反相高效液相色谱法测定果品中有机酸.doc

反相高效液相色谱法测定果品中有机酸

WWW.SFNCC.ORG.CN　©　2008-7-18　国家食物与营养咨询委员会

庞新安1，2，万  英1，2
（1新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室，阿拉尔  843300;
2塔里木大学生物技术研究开发中心，阿拉尔  843300）
摘  要：采用反相高效液相色谱法同时测定5种有机酸，有机酸浓度在5～500μg／L时，其峰面积和有机酸浓度的线性相关系数均在0.999以上，用此法测定了新疆地产四种特色果品中有机酸的含量，取得了满意的结果。
关键词：反相高效液相色谱法；有机酸；果品
有机酸是果品中主要风味物质之一，直接影响果品风味、口感及色泽，是果品成熟度、耐储藏性以及加工性的重要依据，其种类和含量与果品品质有密切关系，因此在果品品质鉴定中占有重要地位［1］。目前，果品中主要以总有机酸含量即可滴定酸度作为有机酸评价指标，不能具体反映出有机酸的种类及其含量；薄层色谱法虽可测定多种有机酸，但测量精度差，不适合定量；气相色谱法需要衍生化，步骤繁琐，并影响分析结果［2］；高效液相色谱法是近几年来发展较快的方法，广泛用于各种食品和天然产物中有机酸的测定［3-11］。
本文采用反相高效液相色谱法直接测定巴旦杏、无花果、沙枣、石榴中有机酸种类及其含量，同时分析4种地产干鲜果品中各有机酸含量之间的关系，以期建立适合于新疆地产果品中有机酸的检测方法，并对新疆地产巴旦杏、无花果、沙枣、石榴中有机酸营养进行综合评价，从而为深层次地开发利用4种地产干鲜果品提供科学依据。
1  材料与方法
1.1  仪器与试剂
Waters-2695高效液相色谱仪，配2487紫外检测器，配Empower色谱工作站（美国Waters公司）；FW-100型高速万能粉碎机（北京市永光明医疗仪器厂）；VIC-412型Sartorius电子天平 （北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DHG-9101—2SA型电热恒温鼓风干燥箱（扬州鸿都电子有限公司）；SK5200H型超声波洗涤器（上海科导超声仪器有限公司）；T18型匀浆分散器 （IKA-WORKS公司）；旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；pH211型酸度计（意大利HANNA公司）。
酒石酸、苹果酸、乙酸、柠檬酸、丁二酸（均为色谱纯）；磷酸氢二铵、磷酸、无水乙醇（均为AR）；巴旦杏、无花果、沙枣、石榴样品采自新疆特色果品种植基地。
1.2  色谱条件
色谱柱：SinoChrom ODS-BP分析柱（4.6mm×250mm，5μm，大连依利特科学仪器有限公司）；流速：1.0ml／min；柱温：37℃；检测波长：210nm；进样量：20μl；流动相：磷酸氢二铵缓冲溶液，浓度为0.01mol／L，pH=2.88。
1.3  样品处理
精确称取预先处理好的巴旦杏、无花果、沙枣、石榴样品，其中巴旦杏、无花果、沙枣为干样，石榴为鲜样；按照样品制备程序将其放入干燥洁净的烧杯中，加入80％乙醇溶液 50ml于常温下匀浆提取5min；取出匀浆液过滤并多次用80％乙醇溶液冲洗沉淀，合并滤液混匀定容至100ml容量瓶中，于旋转蒸发仪75℃蒸干后，用流动相溶解稀释后定容到一定体积，过0.22μm滤膜后进行HPLC测定。
2  结果与分析
2.1  有机酸标样工作曲线
将有机酸标准液配制成浓度分别为5、10、50、100、300、500μg／L的溶液，每一标准液取20μ1依上法进行测定，以有机酸溶液浓度（C，μg／L）为横坐标（x）、峰面积／内标面积（A，μv.s）为纵坐标（Y）绘制有机酸的标准工作曲线，并利用峰面积与浓度进行线性回归。同时，按照上述色谱操作条件对浓度为300μg／L有机酸标准溶液平行测定5次以进行精密度试验，计算相对标准偏差，并以3倍噪声（S／N=3）计算检出限。5种有机酸标准品的保留时间、回归方程、相关系数、相对标准偏差、最小检测限见表1。
结果表明，在一定浓度范围内，各种有机酸的出峰时间较为稳定而且互不干扰，内标峰面积与有机酸浓度线性关系良好，其相关系数为0.9998～9999，可以作为定量分析依据。同时，5种有机酸标准品的相对标准偏差均小于2％，表明分析仪器具有较好的精密度，紫外检测器的最小检测限为0.13～10.967μg／L，符合国家标准要求。
表1  有机酸标准工作曲线
序 有机 保留时 回归 相关 相对标准 检出限 序 有机 保留时间 回归 相关 相对标准 检出限
号 酸 间（min） 方程 系数 偏差（%） （μg/L） 号 酸 （min） 方程 系数 偏差（%） （μg/L）
 1 酒石酸 3.359 A=2140C+4690 0.999803 1.318 4.383 4 柠檬酸 8.820 A=1430C-2280 0.999989 0.272 3.189
 2 苹果酸 4.565 A=1080C 0.999996 0.152 0.131 5 丁二酸 1.211 A=724C-3970 0.999991 0.347 10.967
 3 乙酸 5.986 A=676C-650 0.999996 0.174 1.923
2.2  样品有机酸分析结果
新疆地产巴旦杏、无花果、沙枣、石榴等4种干鲜果品中各种有机酸含量见表2。由表2可知，4种干鲜果品样品中含5种有机酸，有机酸总量为0.8829％～2.3321％，其中无花果、沙枣、石榴富含柠檬酸，而巴旦杏富含酒石酸，因此具有较高的营养价值。
    表2  四种果品中有机酸组成分析结果
 序 有机 保留时间        含量（%）   序 有机 保留时间      含量（%）
 号 酸 （min） 巴旦杏 无花果 沙枣 石榴 号 酸 （min） 巴旦杏 无花果 沙枣 石榴
 1 酒石酸 3.355～3.368 1.1843 未检出 0.0264 未检出 4 柠檬酸 8.810～8.827 0.3023 0.5004 1.5050  2.2843
 2 苹果酸 4.561～4.569 0.1475 0.2478 0.5604 0.0478 5 丁二酸 11.104～11.456 0.0932 0.0364 0.0200 未检出
 3 乙酸 5.959～6.320 0.0533 0.0983 0.0124 未检出  有机酸总量（%）  1.7806 0.8829 2.1242 2.3321
3  结论
本文利用Waters公司的反相高效液相色谱方法测定了新疆地产巴旦杏、无花果、沙枣、石榴中有机酸的种类及其含量。结果表明，4种干鲜果品富含5种有机酸，其有机酸配比合理，适宜人体吸收利用。同时，该测定方法线性范围较宽，相关系数在0.9998～0.9999之间，相对标准偏差均小于2％，其检出限符合国家标准要求，并在15min内完成待测样品中5种有机酸的测定。本研究所建立的方法简便、快速、经济，具有良好的灵敏度、精密度和准确度，可以满足新疆地产巴旦杏、无花果、沙枣、石榴样品中有机酸分析要求，同时对其他果品中有机酸分析具有一定的参考价值。◇
参考文献
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［6］高海燕，廖小军，王善广，胡小松.反相高效液相色谱法测定果汁中11种有机酸条件的优化.分析化学，2004，32（12）：1645-1648.
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［10］崔雨林，戴蕴青，韩雅珊.高效液相色谱法测定水果及其果汁中的几种有机酸.北京农业大学学报，1995，21（1）：39-43.
［11］任一平，高宗裕，黄百芬.高效液相色谱法测定黄酒中的有机酸.食品与发酵工业，1991，5：41.

*基金项目：新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室开放课题资助项目（BR0602）。
作者简介：庞新安（1974～  ），男，湖南常德人，硕士，助理研究员，研究方向为现代仪器分析与农产品品质检测鉴定。

食品中有机酸含量测定

管理员
[方法原理]食品及水果中有机酸主要有：酒石酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸和苹果酸几种。这些有机酸溶于水，在反相柱上保留值不同。调节流动相pH值，可使几种有机酸依次分离。紫外214nm适于检测。　　
[试剂]酒石酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、苹果酸：均为分析纯。水：重蒸并经0，45μm滤膜过滤；磷酸：优级纯。　　
[仪器]　  HPLC　　
          色谱条件：　　
          柱：Novapak C10(0．4cm×15cm)，　　
          流动相：0.1％ H3P04　　
          流速：0．8ml／min　　
          检测器：UV214nm×0．1AUFS　　
[样品制备]标准溶液配制：精密称取六种有机酸标样各20mg于10m1容量瓶中，用流动相溶解并定容，摇匀备用。　　
          样品溶液配制：　　
          液体样品：取液体样品l 0ml于100ml容量瓶中，用流动相稀释并定容，据匀后经0．45μm滤膜过滤，清液待测定。　　
          固体样品：精密称取固体样品10g粉碎匀浆后转至100ml容量瓶中，加50ml 0．0lmol／L氢氧化钠溶液在水浴上煮沸30min，冷却后过滤至100ml容量瓶中，用水定容格匀后经0．46μm滤膜过滤，清液待测定。　　
[测定]　  标准曲线绘制：取混合标样0．5ml，1ml，1．5ml，2ml，2．5ml于五个10ml容量瓶中，用流动相稀释并定容。在上述色谱条件下，取五种浓度溶液各10μl进行色谱分析，得到标样图2-11。作各组分峰面积对含量图，得到标准曲线。　　
          样品溶液测定：在同一色谱条件下，取10μl待测溶液进行色谱分析，得到色谱图2-12。以各相应蜂面积在标准曲线上查出各组分含量。　　
〔计算〕　外标法定量：C=式中　C--1008(m1)样品中各有机酸含虽(g)；C1--样品进样体积中各有机酸含量(μg)；C2--样品称样量（g或ml）V1--样品进样体积（μl）；V2--样品定容体积（ml）