GB 31656.1-2021 食品安全国家标准 水产品中甲苯咪唑及代谢物残留量的测定 高效液相色谱法.pdf

食品安全国家标准水产品中甲苯咪唑及代谢物残留量的测定高效液相色谱法20中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准备案号：XXXX-XXXX67.120.30CCS X31656.12021National food safety standardDetermination of mebendazole and its metabolites residue in fisheryproducts by high performance liquid chromatographyGB2021?09?16发布2022?02?01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发 布国 家 市 场 监 督 管 理 总 局中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部G B 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分: 标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.本文件系首次发布.G B 食品安全国家标准水产品中甲苯咪唑及代谢物残留量的测定高效液相色谱法范围本文件规定了水产品中甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑、 羟基甲苯咪唑残留检测的制样和液相色谱测定方法.本文件适用于鱼、 虾和蟹可食组织中甲苯咪唑及其代谢物氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑残留量的检测.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中, 注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件; 不注日期的引用文件, 其最新版本( 包括所有的修改单) 适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规则和试验方法G B/T 水产品抽样规范术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理试样中残留的甲苯咪唑及其代谢物, 用乙酸乙酯提取, 正己烷除脂, 阳离子固相萃取柱净化, 高效液相色谱紫外检测器测定, 外标法定量.试剂和材料以下所用试剂, 除另有注明外均为分析纯, 水为符合G B/T 规定的一级水. 试剂 乙腈(CHC N) : 色谱纯. 甲醇(CHOH) : 色谱纯. 正己烷(CH ) : 色谱纯. 乙酸乙酯(CHC OOCHCH) : 色谱纯. N,N 二甲基甲酰胺(CHNO) : 色谱纯. 磷酸(HP O) . 磷酸二氢铵(NHHP O) . 三乙胺 (CH)N . 甲酸(HC OOH) . 氨水(NHHO) . 标准品甲苯咪唑(m e b e n d a z o l e,C H NO,C A S号: ) 、 羟基甲苯咪唑( h y d r o x y m e b e n d a z o l e,C H NO,C A S号: ) 和氨基甲苯咪唑(a m i n o m e b e n d a z o l e,C H NO,C A S号: ) : 含量 .G B 溶液配制 甲醇溶液: 取甲醇 mL, 加水至 mL, 混匀. 甲酸溶液: 取甲酸mL, 加水至 mL, 混匀. m o l/L磷酸二氢铵三乙胺溶液: 取磷酸二氢铵 g, 加水溶解并稀释至 mL, 加三乙胺m L, 混匀. m o l/L磷酸二氢铵缓冲液: 取磷酸二氢铵 g, 加水 mL使溶解, 用磷酸调p H至 ,用水稀释至 mL. 氨化甲醇溶液: 取氨水mL、 甲醇 mL, 混匀; 临用前配制. 溶解液: 取N,N 二甲基甲酰胺 mL, 用 m o l/L磷酸二氢铵缓冲液稀释至 mL. 标准溶液制备 标准储备液( g/mL) : 分别取甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑各 m g, 精密称定,加甲酸m L使其溶解, 并用甲醇稀释定容至 mL容量瓶, 摇匀, 配制成浓度各为 g/mL的标准储备液. 以下避光保存, 有效期个月. 混合标准中间液: 分别准确量取甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑标准储备液适量, 用甲醇稀释配制成含氨基甲苯咪唑g/mL、 羟基甲苯咪唑 g/mL和甲苯咪唑 g/mL的混合标准中间液. 以下避光保存, 有效期个月. 材料 混合型阳离子固相萃取柱: m g/mL, 或相当者. 水相聚砜醚针式滤器: m.仪器和设备 高效液相色谱仪, 配紫外检测器. 分析天平:感量 g和 g. 离心机: r/m i n. 旋转蒸发仪. 固相萃取装置. 超声波清洗仪. 氮吹仪. 鸡心瓶: mL.试样的制备与保存 试样的制备按G B/T 中附录B的要求制样.a)取均质后的供试样品, 作为供试试样;b)取均质后的空白样品, 作为空白试样;c)取均质后的空白样品, 添加适宜浓度的混合标准溶液, 作为空白添加试样. 试样的保存 以下保存, 有效期个月.测定步骤 提取取试样g( 准确至 g) 于 mL离心管中, 加水 mL, 涡旋 s, 使其分散; 加乙酸乙酯G B m L, 振荡m i n, 超声m i n, r/m i n离心 m i n, 乙酸乙酯转入 mL鸡心瓶.残渣加乙酸乙酯 m L, 按上述方法重复提取次.合并乙酸乙酯至 mL鸡心瓶中, 旋转蒸发至干.加 甲醇溶液mL, 涡旋混合m i n, 加正己烷mL, 混合m i n, 将溶液转入 mL离心管中, r/m i n离心 m i n, 去除正己烷层; 下层再加正己烷mL, 重复去脂一次.向下层溶液中加甲酸水溶液m L, 混匀, r/m i n离心m i n, 上清液备用. 净化固相萃取柱依次用甲醇、 水各mL活化, 将上清液过柱; 依次用水、 甲醇各mL淋洗, 弃去流出液,抽干.用氨化甲醇溶液 mL洗脱, 洗脱液接收至 mL离心管中, 氮气吹干.加溶解液 m L溶解残余物, 涡旋混合m i n, 用水相针式滤器过滤至进样小瓶中, 供高效液相色谱测定. 标准工作曲线的制备精密量取混合标准中间液适量, 用溶解液稀释配制成甲苯咪唑、 羟基甲苯咪唑浓度分别为 g/m L、 g/m L、 g/m L、 g/m L、 g/m L和 g/m L, 氨 基 甲 苯 咪 唑 浓 度 为 g/m L、 g/m L、 g/m L、 g/m L、 g/m L和g/m L的系列标准工作液, 供高效液相色谱测定.分别以甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的峰面积为纵坐标, 相应浓度为横坐标, 绘制标准曲线, 求回归方程和相关系数.此标准工作液现用现配. 测定 液相色谱条件a)色谱柱:C 柱( mm mm,m) , 或相当者;b)流动相:A为乙腈,B为 m o l/L磷酸二氢铵三乙胺溶液, 梯度洗脱条件见表;表梯度洗脱条件时间m i n乙腈 m o l/L磷酸二氢铵三乙胺溶液 c)流速: mL/m i n;d)柱温: ;e)进样量: L;f)检测波长: n m. 测定法取系列标准工作液和试样溶液, 作单点或多点校准, 按外标法以色谱峰面积定量.标准溶液和试样液中甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的响应值均应在仪器检测的线性范围之内.在上述色谱条件下, 标准溶液液相色谱图见附录A. 空白试验取空白试料, 除不加标准溶液外, 采用相同的测定步骤进行平行操作.结果计算和表述试样中甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑的残留量按公式() 计算.XiCiVfm ()式中:Xi 试样中甲苯咪唑或代谢物残留量的数值, 单位为微克每千克(g/k g) ;G B Ci 从标准工作曲线计算得到的试样溶液中甲苯咪唑或代谢物浓度的数值, 单位为微克每毫升(g/mL) ;V 溶解残余物体积的数值, 单位为毫升(mL) ;f 稀释倍数; 换算系数;m 供试试样质量的数值, 单位为克(g) . 方法灵敏度、 准确度和精密度 灵敏度本方法甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑检测限为g/k g, 定量限为 g/k g.本方法氨基甲苯咪唑检测限为 g/k g, 定量限为 g/k g. 准确度本方法甲苯咪唑、 羟基甲苯咪唑在 g/k g g/k g, 氨基甲苯咪唑在 g/k g g/k g的添加浓度范围内, 回收率为 . 精密度本方法批内相对标准偏差 , 批间相对标准偏差 .G B 附录A( 资料性)甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑液相色谱图甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑混合标准溶液液相色谱图见图A .标引序号说明: 氨基甲苯咪唑( g/m L) ; 羟基甲苯咪唑( g/m L) ; 甲苯咪唑( g/m L) .图A 甲苯咪唑、 氨基甲苯咪唑和羟基甲苯咪唑混合标准溶液液相色谱图31656.12021GBGB31656.12021书 书 书1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?