补体的检测及应用-(2)ppt课件.ppt

补体的体的检测及及应用用一一.概述：概述：(复复习基基础免疫学相关知免疫学相关知识）（一）（一）补体的定体的定义及性及性质：complement：补体是存在于人和体是存在于人和动物血清中的一物血清中的一组具有具有酶活性的球活性的球蛋白，一般情况下蛋白，一般情况下处于未激活状于未激活状态。补体的特性：体的特性：稳定性差，各种理化定性差，各种理化因素都可使之失活：如酸、碱、紫因素都可使之失活：如酸、碱、紫外外线照射、照射、剧烈震烈震荡等等实验室室灭活活补体的条件体的条件为：56C、30；室温下室温下2-3天天补体也可自然失活；体也可自然失活；由于由于补体的体的稳定性差，容易失活，定性差，容易失活，因此作因此作补体的体的检测必必须用新用新鲜血清血清（二）（二）补体的体的组成：由三部分成：由三部分组成成1.补体的固有成分：体的固有成分：C1-C9,其中其中C1又又包括包括C1q、C1r、C1s,共共9种成分种成分11种种蛋白分子。其中蛋白分子。其中C9的分子量最小、的分子量最小、C3的含量最高；的含量最高；2.补体的体的调节蛋白：如蛋白：如C4调节蛋白、蛋白、C1抑制物、抑制物、S蛋白等；蛋白等；3.补体受体；如体受体；如C1qR、C3aR等；等；（三）（三）补体的激活：三条途径体的激活：三条途径1.经典激活途径：又称典激活途径：又称C1途径途径激活激活剂：IgG、IgM形成的形成的AgAb复合物复合物参与成分参与成分：C1C9激活激活过程程：这是一个是一个连锁反反应，缺少其，缺少其中任何一个中任何一个组分，分，连锁反反应都不能都不能进行下去行下去2.旁路激活途径：又称旁路激活途径：又称C3途径途径激活激活剂：脂多糖、酵母多糖、：脂多糖、酵母多糖、IgG4和和IgA的聚合物的聚合物(提供接触表面提供接触表面)参与成分参与成分：C3、C5C9、B因子、因子、D因因子、子、P因子因子3.甘露糖甘露糖结合凝集素途径：合凝集素途径：MBL途途径径在感染早期，常采用途径在感染早期，常采用途径2、3；产生生Ab后，采用途径后，采用途径1（四）（四）补体的生物学作用：体的生物学作用：1.溶菌、溶溶菌、溶细胞作用胞作用：MAC效效应2.调理作用理作用(C3b、C4b和和iC3b)3.免疫黏附作用免疫黏附作用(C3b、C4b)4.炎症介炎症介质作用作用 趋趋化作用化作用化作用化作用 (C3a(C3a、C5a)C5a)过过敏毒素作用敏毒素作用敏毒素作用敏毒素作用(C3a(C3a、C4aC4a、C5a)C5a)二二.补体的体的检测：包括两方面的包括两方面的检测功能功能检测：总补体活性的体活性的检测、单一一补体活性的体活性的检测；量的量的测定定：单一一补体量的体量的测定；定；活性的活性的检测多采用溶血多采用溶血试验；量的量的测定多采用免疫比定多采用免疫比浊法或法或单扩法法溶血溶血试验：绵羊羊红细胞（胞（Ag）与相）与相应的的Ab兔抗兔抗绵羊羊红细胞抗体（溶血素）胞抗体（溶血素）结合后形成致敏羊合后形成致敏羊红细胞（一胞（一对AgAb复合物），在复合物），在补体存在的情况下，启体存在的情况下，启动经典激活典激活途径，途径，导致羊致羊红细胞的胞的细胞膜穿孔，胞膜穿孔，释放血放血红蛋白，从而蛋白，从而发生溶血。生溶血。在溶血反在溶血反应中，指示系中，指示系统是是 绵羊羊红细胞和溶血素胞和溶血素。补体的来源是多只豚鼠的混合血清体的来源是多只豚鼠的混合血清 多只豚鼠血清的混合避免了多只豚鼠血清的混合避免了补体成分的欠缺，使体成分的欠缺，使经典途径典途径的的连锁反反应能能顺利利进行。行。溶血反应溶血反应SRBCSRBC+兔抗兔抗SRBCSRBC抗体抗体 (溶血素溶血素)新鲜血清新鲜血清(提供补体）提供补体）溶血溶血+启启动经典激活途径典激活途径（一）（一）总补体活性体活性检测：CH50试验 (Complement Hemolysis 50%)原理：原理：组成和功能完整的成和功能完整的补体系体系统能使致敏羊能使致敏羊红细胞胞发生溶血；生溶血；羊羊红细胞的溶血程度与胞的溶血程度与补体的活性成正比；体的活性成正比；整个曲整个曲线呈倒呈倒“S”型，即随着型，即随着补体量增加，溶血程度也增加体量增加，溶血程度也增加在在50溶血附近（溶血附近（3070%之之间），稍微改），稍微改变 补体量，体量，溶血程度溶血程度变化明化明显，因此以，因此以50溶血率来判定溶血率来判定终点点较100更更为敏感，所以敏感，所以该试验称称为50溶血溶血试验（CH50）。）。总补体活性的体活性的检测方法方法：见P143试管号管号 1:20稀稀释血清血清 BB液液 溶血素溶血素 SRBC1 0.1(ml)1.4(ml)0.5(ml)0.5(ml)2 0.15 1.35 0.5 0.53 0.20 1.30 0.5 0.54 0.25 1.25 0.5 0.55 0.30 1.20 0.5 0.56 0.35 1.15 0.5 0.57 0.40 1.10 0.5 0.58 0.45 1.05 0.5 0.59 0.50 1.00 0.5 0.510 0.00 1.50 0.5 0.5 上述上述10支支试管管经37C、水浴、水浴30min反反应,离心后与已制离心后与已制备好的好的50溶血溶血标准管准管比比较，取吸光度，取吸光度值最接近的一管，最接近的一管，则 CH50（U/ml）1/血清用量血清用量稀稀释倍数倍数 总补体活性参考范体活性参考范围：5050100U/ml100U/ml（二）（二）单一一补体的体的测定：定：1.单一一补体活性的体活性的检测：用：用溶血溶血试验，常用于常用于测C3、C4、C1q、B因子等因子等原理：将原理：将动物或人血清（物或人血清（提供提供补体体）用一些化学）用一些化学试剂特异地特异地灭活某个活某个组分，然后加入致敏羊分，然后加入致敏羊红细胞，由于胞，由于补体缺少某一体缺少某一组分，分，则不能被激活，溶不能被激活，溶血反血反应不能不能发生。当加入待生。当加入待测血清，如其中含有血清，如其中含有所缺失的所缺失的补体成分，体成分，连锁反反应重又重又发生，即可出生，即可出现溶血。溶血。此法可此法可诊断：断：补体个体个别组分先天性缺乏：如分先天性缺乏：如C3、C4、C1q、B因子；因子；某一某一组分有无溶血活性分有无溶血活性如：如：多支豚鼠混合血清多支豚鼠混合血清+氨水（破坏氨水（破坏C4）R4；R4+致敏羊致敏羊红细胞（抗原抗体复合物）胞（抗原抗体复合物）不溶血不溶血+待待测血清血清观察有无溶血察有无溶血 如溶血，如溶血，说明待明待测血清有血清有C4，且，且C4功能正常；功能正常；如不溶血，如不溶血，说明无明无C4，或，或C4功能差功能差2.单一一补体量的体量的测定：定：采用免疫比采用免疫比浊法或法或单扩法，法，临床上常床上常检测C3。C3含量：含量：1200-1300 g/ml（三）（三）补体裂解体裂解产物的物的检测：C3 C3a+C3b；C3b C3c+C3d如果血清中出如果血清中出现了了C3d，说明明补体被激活：体被激活：血清中血清中C3，C3d，表明分解，表明分解；C3，C3d正常，表明合成正常，表明合成；C3d含量一般小于含量一般小于1mg/ml检测方法多采用方法多采用单扩法或火箭法或火箭电泳泳三三.补体体检测的的临床意床意义：1.补体量体量:多多见于急性炎症感染、于急性炎症感染、组织损伤、癌、癌肿；2.补体量体量：见于于补体消耗体消耗：体内有：体内有Ag、Ab 反反应，如，如SLE、RA等；等；补体合成体合成：肝：肝脏疾患；疾患；补体先天性缺乏：具有体先天性缺乏：具有遗传性和家族史性和家族史四四.补体体结合合试验：原理：原理：补体可与任何一体可与任何一组AgAb复合物复合物结合；合；补补体体一旦与某一一旦与某一AgAb复合物复合物结合后，便不再与合后，便不再与 另一复合物另一复合物结合。合。如：已知如：已知Ag待待测物（物（Ab？）？）AgAbC（补体）体）致敏羊致敏羊红细胞胞不溶血不溶血结果判断：果判断：不溶血不溶血为阳性，即待阳性，即待测物中有相物中有相应的的Ab或或Ag；溶血溶血为阴性，即待阴性，即待测物中无相物中无相应的的Ab或或Ag.优点：该试验既可既可测Ag、又可、又可测Ab；Ag既可以是既可以是颗粒性粒性Ag、也可是可溶性、也可是可溶性Ag、甚至可以是、甚至可以是块状状物，因此物，因此检测Ag的范的范围广；广；可以用于病毒、立克次氏体、可以用于病毒、立克次氏体、细菌等多种病原体的菌等多种病原体的检测（实际上是上是测Ag）；）；比比较敏感敏感(0.05g/ml)、特异；、特异；结果判断明果判断明显：通：通过有无溶血来有无溶血来观察，无需特殊察，无需特殊仪器器检测。缺点：参与反参与反应的物的物质多，影响因素也多；多，影响因素也多；（反（反应体系中有体系中有Ag、Ab、C、羊、羊红细胞、溶血素）胞、溶血素）在正式在正式试验前需要找出几种物前需要找出几种物质间最最恰当的比例，比恰当的比例，比较复复杂。思考题：补体的定体的定义、组成及性成及性质CH50实验的原理、正常的原理、正常值及意及意义补体体结合合实验的原理、的原理、结果判断及果判断及评价价