HIV抗体筛查试验室内质控品制备和日常检测典型案例分析.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2019/11/18,#,1,北京大学人民医院 纪和平,北京市疾病预防控制中心 辛若雷,HIV,抗体筛查试验室内质控品制备和应用及日常检测案例分析,2,室内质控品,抗体,检测的统计学室内,质量控制,非,试剂盒组份,的,外部质控品,，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控,血清,；,只,设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（,Cut-off,）的,2,3,倍,为宜,。,外部,质控品的作用是，,判断该批临床样品检测的有效性,，因此，每次实验必须包含室内质控品，其,结果无效，必须重新试验,。,室内,质控品可以是,商品,或,实验室自行制备,。,3,室内质控品的使用和质量要求,每一次实验必须使用室内质控品,，以便监控实验的,重复性,。,同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异。室内质控品的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（,cv,20%,）,；,并且质控品应,稳定,、,无菌,，且,不含,有影响试剂反应的,防腐剂,。,4,北京大学人民医院,肝病研究所承担,HIV,抗体检测任务：,首选试剂：生物,梅里,埃（,3,代）；备用试剂：万泰,3,代；,2011,年检测样本量：筛查阳性样本数,26,例（,0.3,）；其中，确证试验阳性样本,13,例，不确定,4,例，阴性,9,例；,2012,年,1-4,月，筛查阳性,15,（,1,），阳性,9,例。,2012,年，检验科开始用雅培化学发光进行,初筛,，初筛阳性送肝病研究所进行,复检,。,5,调制针对生物梅里埃（,3,代）,_1,材料,抗,-HIV,阳性,灭活血清（可用梅里埃试剂盒中的阳性对照替代,）,；,抗,-HIV,阴性,的血清（可用梅里埃试剂盒中的阴性对照）或,20%,小牛,血清,；,2 mL,冻,存,管；,生物安全柜；,酶免仪、微量进样器、,15-50 mL,离心管；,6,调制针对生物梅里埃（,3,代）,_2,基本操作流程,先,将抗,-HIV,阳性灭活血清混合进行常规检测，读取,OD,值。,将,抗,-HIV,阳性灭活血清用抗,-HIV,阴性的血清、或,20%,小牛血清稀释至所需,浓度,（,4-6,倍）,，,一般为阴性对照,OD,值的,3-4,倍。,将,配置好的质控血清分装,到,2 mL,冻存,管,中，,1 mL/,管,，置,-,20,冰箱保存。,按照,室内质控要求计算出此批次质控血清的,SD,值、,CV,值，并绘出质控图，标明批号备用,。,7,2012,年,2,月质控图,8,2011-2,质控考评质控图,9,ELISA,检测,HIV,抗体室内质控血清的制备,目的,实验室自制外部质控血清，绘制质控图，满足,全国艾滋病检测技术规范,要求和考评要求。,方法,利用,试剂盒内的阳性对照血清,，用健康人的血清按一定量混合稀释成弱阳性，筛选出合适混合比例，分装冷冻保存使用。,结果,试剂盒内的阳性对照血清与健康人的血清,1,：,10,左右混合比例比较适合。,结论,自制质控血清性能稳定，经济、方便，便于推广使用。,韦雪芳（广西壮族自治区横县疾病预防控制中心,HIV,初筛实验室,530300,）；,检验医学与临床，,2011,；,8:2527-2528.,10,HIV,抗体阳性血清梯度稀释系列用于,实验室质控,和,试剂评价,探讨（,1,）,方法,用,阴性,血清,梯度稀释,HIV,抗体,确认阳性血清,，用第三代,ELISA,检测试剂进行检测，寻找稀释度与,OD,值间的关系，然后,应用于实验室质控和试剂评价,。,HIV,抗体阳性混合血清：,WB,确证阳性样本：,WB,全条带（,gp160,、,gp120,、,p66,、,p55/p51,、,gp41,、,p31,、,p24,、,p17,）；,HIV,抗体阴性混合血清：筛查试验阴性；,用阴性血清稀释阳性混合血清，筛查试验确定最高稀释度稀释倍数：,10,3,-10,5,；,-20,保存；,李红星（商丘市卫生防疫站）；,河南预防医学杂志，,2005,；,16:133-135.,11,HIV,抗体阳性血清梯度稀释系列用于,实验室质控,和,试剂评价,探讨（,2,）,结果,在一定稀释度范围内,-log,稀释度,与,OD,值呈线性关系。实验系列用于质控，各实验室均正确报出样品的阴阳性结果，但灵敏度（回归曲线斜率,/,残差标准差）不同，依此对实验室进行排序。,结论,HIV,抗体阳性血清梯度稀释系列可用于实验室质控和试剂评价。但灵敏度的合适范围还需继续探讨。,李红星（商丘市卫生防疫站）；,河南预防医学杂志，,2005,；,16:133-135.,12,北京大学人民医院肝病研究所联系电话：,88325729,13,化学发光试剂应用案例,1,韩,，山东青岛人,19,岁，,MSM,2012,年,3,月初，到北京大学人民医院呼吸科，以发烧、腹泻住院治疗；,检验科雅培化学发光：,S/CO,值,29,；送肝病研究所复核阴性（梅里埃、万泰，三代）；,主治医生比较负责任，采血继续送检，梅里埃（,1.9,）、万泰（,0.3,），均阳性；,CD4,细胞计数和,CD4/CD8,比值偏低；,地坛医院皮肤科就诊，送检确证。,14,化学发光试剂应用案例,1,（续）,批号,样本,ID,检测日期,初筛,复检,1,WB,带型,北京大学人民医院,3,月,6,日,雅培发光：,25,梅里埃、万泰,3,代：,0.1,未送检,人民医院,121176,3,月,13,日,梅里埃,3,代,:1.6,万泰,3,代,:0.32,p17 gp120 gp160,地坛医院,121631,4,月,10,日,梅里埃,4,代,:2.9,万泰,4,代,:0.66,p24 gp41 gp120 gp160,北京大学人民医院,&,地坛医院,韩,，山东青岛人,19,岁，,MSM,15,化学发光试剂应用案例,2,单位,样本,ID,检测日期,初筛,复检,1,WB,带型,东直门医院,120740,2,月,21,日,雅培发光：,2.5,万泰,4,代：,0.07,p24,性艾所,VCT,121214,3,月,20,日,万泰,4,代,:1.49,梅里埃,4,代：,1.81,p24 p31 gp160,性艾所,VCT,121518,4,月,10,日,万泰,4,代,:1.89,梅里埃,4,代：,2.05,p17 p24 p31 gp41 p51 p55 p66 gp120 gp160,东直门医院,&,性艾所,贾,，,33,岁，,MSM,16,雅培：,2.51,万泰,4,：,0.013,一个月后，,梅里埃,4,：,1.81,万泰,4,：,1.49,17,部分单位送检样本确证结果分析,初筛试剂,筛查阳性,确证阳性,确证阴性（,%,）,确证可疑（疑似感染）,备注,华信,罗氏化发,70,10,41,（,58),19,（,3,）,阴性，,Max:21,；可疑,Max:,7.8,；阳性,Min:171,望京,梅里埃,4,代,36,5,23,（,63),8,（,3,）,中日,金豪,58,30,14,（,24),14,（,5,）,北医三院,罗氏化发,71,12,31,（,43),28,（,4,）,梅里埃,4,代,55,10,22,（,40),23,（,4,）,雅培化发,2,2,地坛医院,梅里埃,4,代,265,220,13(6),32,（,16,）,皮肤科，新发病例多,2012,年,北医三院,罗氏化发,55,5,42(76),8,（,1,）,阴性，,Max:31.35,；可疑,Max:,13.4,雅培化发,6,3,1,2,协和,雅培化发,48,31,4,13,（,7,）,阳性,Min,：,6.61,；阴性,Max,：,3.65,18,2012,年罗氏和雅培化学发光确证结果的比较,根据病例属性情况，选择适宜的筛查试剂；,没有最好的试剂，要选择最适合的试剂,。,初筛试剂,筛查阳性,确证阳性,确证阴性（,%,）,确证可疑（疑似感染）,备注,罗氏,化发,111,23,63,（,56,）,25,（,4,）,阴性，,Max:31.35,；可疑,Max:,76.4,；阳性,Min:49.2,雅培化发,147,109,12,（,8,）,26,（,9,）,阴性，,Max:143.25,和,52.8,（同仁医院）,；可疑,Max:,139,（,p24,）和,36.42,（,p66,）；阳性,Min:6.6,和,10.21,统计数据截止到,2012-4-10,19,HIV,抗体不确定病例排查,HIV,抗体不确定病例,(,特殊病例,),的排查，可以通过核酸检测予以辅助诊断，尤其是手术病例；,可联系协和医院、地坛医院、佑安医院送检，约,1300,元,/,例；,协和医院：韩扬，,65295048,地坛医院：宋淑静，,84322434,佑安医院：魏飞力，,83997354,302,医院：王海滨，,66933129-6245,20,谢谢！,