小胶质细胞极化探讨Sev对SD诱发大鼠抑郁样症状与认知功能障碍的影响.pdf

论著511脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第8 期小胶质细胞极化探讨Sev对SD诱发大鼠抑郁样症状与认知功能障碍的影响王健葛树胜【摘要】目的探讨七氟醚（Sev）对睡眠剥夺（SD）诱发大鼠抑郁样症状与认知功能障碍的调控作用，明确小胶质细胞的影响。方法48 只SD大鼠随机分为对照（Con）组、睡眠剥夺（SD）组、SD+1%Sev（SD+1%Se v）组、SD+3%Sev（SD+3%Se v）组，每组12 只。模型构建前开展Morris水迷宫与糖水偏好训练。取SD组大鼠进行48 hSD模型构建，通过1%或3%Sev治疗后开始Morris水迷宫与糖水偏好测试。处死大鼠后取脑组织用于ELISA检测下丘脑垂体肾上腺轴相关细胞因子含量，免疫荧光检测离子钙结合接头分子1（iba1）表达，实时荧光定量PCR检测M1/M2型小胶质细胞标记物mRNA表达。结果与Con组相比，SD组大鼠首次达到平台时间增加，穿越平台次数减少，第II象限停留时间减少，糖水偏好摄取率降低；与SD组相比，SD+1%Sev组大鼠首次达到平台时间减少，穿越平台次数与第III象限停留时间增加，糖水偏好摄取率提高；然而，3%Sev+SD组大鼠这些指标没有明显变化。与此同时，与Con组相比，SD组大鼠ibal平均荧光强度增加；与SD组相比，SD+1%Sev组ibal平均荧光强度降低。此外，与Con组相比，SD组CD16、肿瘤细胞坏死因子-（T NF-）、白介素-1（IL-1）、一氧化氮合成酶（i NO S）mRNA 表达增加；与SD组相比，SD+1%Sev组CD16、T NF-、IL-1、i NO SmRNA 表达减少，且CD206、转化生长因子-（T G F-）、精氨酸酶1（Arg1）、几丁质酶样蛋白1（Ym1）m RNA 表达增加结论1%Sev通过抑制小胶质细胞促炎表型极化，提高抗炎表型极化，减轻SD诱导的抑郁样症状与认知功能障碍。【关键词】七氟醚；睡眠剥夺；小胶质细胞；炎症反应；剂量中图分类号：R749文献标识码：A文章编号：10 0 6-351X（2 0 2 3）0 8-0 511-0 6Effects of sevoflurane on sleep deprivation-induced depression-like symptoms and cognitive dysfunction inrats based onmicroglia polarizationWang Jian,Ge ShushengDepartment of Anesthesiology,the First Affiliated Hospital of Hainan Medical College,Haikou 570102,ChinaCorresponding author:Wang Jiang,Email:Abstract Objective To investigate the effect of sevoflurane(Sev)on sleep deprivation(SD)-induceddepressive-like symptoms and cognitive dysfunction in rats,and to clarify the effect of microglia.Methods 48 SDrats were randomly divided into control(Con)group,SD group,SD+1%Sev(SD+1%Sev)group,SD+3%Sev(SD+3%Sev)group,12 animals in each group.Morris water maze and sucrose preference training were arranged beforethe model constructed.Rats in SD group experienced a 48-h SD for model construction.Morris water maze andsucrose preference test were started after treatment with 1%or 3%Sev.Then,the rats were sacrificed,the brainswere collected for detection of hypothalamic-pituitary-adrenal axis related cytokines by ELISA.As well as theexpression of ibal was detected by immunofluorescence,and the mRNA expression of M1/M2 type microglia markerwere detected by RT-PCR.Results Compared with Con group,the rats in SD group increased the first arrival timeto the platform,decreased the number of platform crossing and the resident time in the III quadrant,and decreasedthe sucrose preference.Compared with SD group,the first arrival time to the platform of the rats in SD+1%Sevgroup deceresed,t the number of platform crossing and the resident time in the II quadrant increased,and thesucrose preference increased.However,these indicators did not change significantly in the 3%Sev+SD group.At基金项目：海南省卫生健康行业科研项目（2 1A200011）作者单位：57 0 10 2 海口，海南医学院第一附属医院麻醉科512脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第8 期the same time,compared with Con group,the MFI of ibal in the SD group increased;compared with SD group,theMFI of ibal in the SD+1%Sev group decreased.In addition,compared with Con group,the expression of CD16,TNF-,IL-1,iNOS mRNA in SD group increased;compared with SD group,the expression of CD16,TNF-,IL-1,iNOS mRNA in SD+1%Sev group decreased,and the expression of CD206,TGF-,Arg1,Ym1 mRNAincreased.Conclusion 1%Sev can reduce the depressive-like symptoms and cognitive dysfunction induced by SDthrough inhibiting the pro-inflammatory phenotype polarization of microglia and increasing the anti-inflammatoryphenotype polarization.Key wordsSevoflurane;Sleep deprivation;Microglia;Inflammatory response;Dose睡眠约占日常生活中1/3时间，是个体发育所必需的生理活动，对维系个体生理与心理功能发挥着极其重要的角色。睡眠剥夺（sleepdeprivation，SD）会影响认知功能水平，甚至会诱发抑郁症发生与发展1-2 。七氟醚（sevoflurane，Se v）是临床常用的一类吸人型麻醉药物，广泛应用于全身麻醉的诱导与维持。虽然Sev麻醉会造成老龄或幼龄小鼠出现不同程度的认知功能障碍3-4，但也有研究显示Sev对青年或成年个体的影响较小，且低剂量Sev还可能存在部分神经功能保护作用5-6 。因此，本研究拟通过不同剂量Sev治疗SD诱发记忆功能障碍与抑郁样行为小鼠，评估其行为学上的改变，探究分子生物学层面小胶质细胞的变化。材料与方法1.实验动物与分组48只7 w龄成年SD大鼠，雄性，SPF级，体质量18 0.0 19 0.0 g。所有大鼠均由海南药物研究所有限责任公司提供，并饲养在海南医学院动物实验中心SPF级动物房中，饲养条件维持恒温（2 41），恒湿（50 5%），夜循环固定（12 h/12h），保证食物和水源充足。2.实验材料与仪器实验材料：Sev（上海恒瑞医药有限公司，HR190352);促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropinreleasing hormone,CRH）、促肾上腺皮质激素（adreno-cortico-tropic-hormone,ACTH),皮质酮(Corticosterone,COR）5-羟色氨酸（5-hydroxytryptamine,5-HT）试剂盒（杭州联科生物技术公司，10 37-119 5、110 5-2105、10 18-12 9 3、17 0 5-1135）；促炎/抗炎因子mRNA引物（广州锐博生物科技公司）；兔源抗鼠离子钙结合接头分子1（rabbitantiratibal）抗体（美国abcam公司，ab3762）；Co r a Li t e 59 4耦合山羊抗兔IgG(H+L)荧光二抗（美国abcam公司，ab1013）。实验仪器：小动物气体麻醉机（上海玉研科学仪器有限公司，ABM）；小动物多通道SD仪（安徽耀坤生物科技有限公司，ZL-014A）；M o r r is 水迷宫装置（江苏赛昂斯公司，SA201）；实时荧光定量PCR仪（美国爱普拜斯公司，ABIViiATM7）。3.实验方案（图1）实验动物随机分为4组，每组12 只大鼠：对照(Control,Con）组、SD组、SD+1%Sev 组、SD+3%Sev组。SD模型构建前对各组大鼠进行Morris水迷宫实验与糖水偏好实验训练。取SD组大鼠构建模型，24h后，取Sev组大鼠置于麻醉箱中，进气口通人1%或3%Sev，气体流速2 1min*，共麻醉1h。Co n 组与SD组大鼠放人不同麻醉箱中，通人正常空气，共1h。麻醉结束后，将所有大鼠移至干燥笼中1h，开展Morris水迷宫实验与糖水偏好实验测试。完成测试后，取大鼠开展心脏灌注冲尽血液，取脑组织用于免疫荧光染色，神经递质检测和荧光定量PCR检测。1.不同剂量七氟醚麻醉2.Morris水迷宫测试1.Morris水迷宫训练3.糖水偏好测试2.糖水偏好适应构建睡眠剥夺模型4.取脑组织备用-4023时间(d)图1实验方案流程4.SD模型构建所有大鼠人组后适应环境1w，取SD组大鼠放人改良的SD箱中，箱体内间隔15cm固定一个圆柱型平台，箱体内注人清水，顶部覆盖了一层金属丝网，以防止大鼠逃逸。构建SD模型时，将大鼠放在平台上，大鼠会因快速眼动睡眠而落入水中，再次苏醒爬上平台，以此达到SD目的。此外，SD箱顶设置一盏冷光源LED灯，打乱大鼠睡眠节奏。在此SD期间，大鼠可以自由获得饮用水和食物，整个SD时间共计48 h，前36 h自由饮食，后12 h禁食。Con组在相同条件下将大鼠置于相同高度和直径2 0 cm的圆柱体上，大鼠不会因为睡眠跌人水中，排除环境干扰因素。5.Morris水迷宫实验实验分为训练期（SD模型构建前）与测试期513脑与神经疾病杂志2023年第31卷第8 期（SD 模型构建后）。该实验系统分为4个象限，每个象限壁上标注有不同图案。第I象限水面下设置一个逃生平台。训练时，将大鼠面向池壁投入各个象限，自由探索9 0 s，直到登上逃生平台，记录这段时间为逃避潜伏期。若未找到平台，则引导大鼠至平台，强制停留10 s，记录逃避潜伏期为9 0 s。测试时，撤去平台，将大鼠自第I象限丢人水中，自由探索，记录9 0 s内大鼠首次到达平台时间，穿越平台次数，第I象限停留时间。6.糖水偏好实验模型构建前，所有鼠笼均插人一瓶纯净水与一瓶1%蔗糖水。模型构建后，将各组大鼠单笼饲养，禁食禁水12 h。每只大鼠分别给予一瓶纯净水与一瓶1%蔗糖水，测定每只动物3h内饮用纯净水与1%蔗糖水的质量，通过公式计算出各个大鼠的糖水偏好率。糖水偏好率（%）=蔗糖水消耗质量（g）/纯净水消耗质量（g）+蔗糖水消耗质量（g）10 0%。7.HPA轴相关神经递质检测采用ELISA法检测大鼠血浆中HPA轴指标CRH、A CT H、CO RT 与5-HT的含量。取大鼠抗凝全血，常温下静置30 min，离心后取上清液获得血浆。将各组样品稀释5倍，取ELISA试剂盒中预包被孔板，加入待测样品与标准品溶液，孵育2 h。清洗孔板，加人Anti-CRH（或Anti-ACTH或Anti-CORT或Anti-5-HT检测抗体）孵育1h。清洗孔板，加人链霉素-HRP孵育30 min。清洗孔板，加人TMB底物显色，5min左右加人终止液停止反应。在450 nm波长处使用酶标仪检测OD值，绘制标准曲线，计算各个样本中CRH、A CT H、CO RT 与5-HT含量。8.小胶质细胞活化检测取大鼠脑组织用4%多聚甲醛固定，经梯度乙醇脱水、冷冻液包埋后纵向切成5m冠状切片。将切片置人3%甲醇双氧水中孵育30 min，消除内源性过氧化物酶活性，37 孵育1h。PBS清洗后滴加兔源Anti-ratibal抗体，4湿盒中孵育过夜。次日，取出切片，加人CoraLite594耦合山羊抗兔IgG(H+L)溶液，37 反应2 h。PBS清洗后滴加DAPI染色液，37孵育5min，滴加抗荧光猝灭剂，荧光显微镜下观察CoraLite594荧光强度9.荧光定量PCR（q PCR）检测小胶质细胞极化(表）表本研究中相关促炎/抗炎因子mRNA引物序列基因正向引物(5-3)反向引物(3-5)名称GAPDHAACTTTGGCATTGTGGAAGGGGATGCAGGGATGATGTTCTU6AACGCTTCACGAATTTGCGTAACGCTTCACGAATTTGCGTCD16TTTGGACACCCAGATGTTTCAG GTCTTCCTTGAGCACCTGGATCTNF-GCTGAGCTCAAACCCTGGTACGGACTCCGCAAAGTCTAAGIL-1TGTGAAATGCCATTTGAGGTCAAAGGTTTGGAAGCAGiNOSCCCAGAGTTCCAGCTTCTGGCCAAGCCCCTCACCATTATCTCD206CTTCGGGCCTTTGGAATAATCTTCGGGCCTTTGGAATAATTGF-TGCGCTTGCAGAGATTAAAACGTCAAAAGACAGCCACTCAArg1CTGGTCGGTTTGATGCTATGCTTAGCTCTGTCTGCTTTGCYmlCAGGGTAATGAGTGGGTTGGCACGGCACCTCCTAAATTGT取大鼠脑部海马区组织样本，液氮冷冻后粉碎，转移至1.5ml离心管中，加入RNA提取缓冲液RNAisoPlus，裂解后离心，收集上清液。氯仿重悬后振荡、离心，收集水层。水层中加人异丙醇，静置，离心，收集沉淀。加人7 5%酒精重悬、离心，首次沉淀，加人焦碳酸二乙酯（DEPC）处理过的超纯水重悬获得RNA样品。采用紫外吸收法对RNA样本进行纯度与浓度检测。首先使用基因反向引物制备互补脱氧核糖核酸（cDNA），再以cDNA为模板，用正向以及反向引物进行qPCR，在同一反应体系中一步完成反转录到qPCR的全部反应。qPCR条件为高特异性选择两部法：45反转录5min，继之9 5预变性2 min，然后40 个循环，包括9 515s，6 0 15s，6 0 30 s。基因特异性正向，反向引物序列于表1中。目的基因数据采用2-AC法，分别检查扩增曲线、溶解曲线。10.统计学方法所有数据以元s计量并利用SPSS22.0软件分析，多组数据之间比较采用单因素方差分析（Oneway Anova），组间两两比较采用Dunnettst检验。以P0.05为差异有统计学意义。结果1.低剂量Sev减轻了大鼠记忆功能障碍（图2）90907ConaSDa60SD+1%Sev60-SD+3%Sevb3030-00ConSD第一天第二天第三天第四天SD+1%SeySD+3%SevA：训练时逃避潜伏期变化B：测试时首次到达平台时间514脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第8 期20-90-5b60b305-00SDConConSD+1%SevSD+3%SevSD+1%SevSD+3%SevC：测试时穿越平台次数D：测试时第象限停留时间注：与Con组比较，P0.05；与SD组比较，bP0.05图2各组大鼠SD模型构建前后Morris水迷宫实验结果比较SD模型构建前，各组大鼠训练时，逃避潜伏期随着训练次数的增加而减少，各组之间没有差异。构建SD模型后，与Con组相比，SD组大鼠首次到达平台时间明显增加（P0.05），穿越平台次数与第III象限停留时间明显减少（P0.05）；且采用Sev治疗后，与SD组相比，SD+1%Sev组大鼠SD组大鼠首次到达平台时间明显减少（P0.05），穿越平台次数与第I象限停留时间明显增加（P0.05），穿越平台次数与第III象限停留时间增加（P0.05），但这些改变差异无统计学意义。2.低剂量Sev改善了大鼠喜感偏好（图3）100100b(%)本水80806060404020-2000conSDconSDSD+1%SevSD+3%SevSD+1%SevSD+3%SevA：SD 模型构建前糖水摄取率B：SD 模型构建后糖水摄取率注：与Con组比较，P0.05；与SD组比较，P0.05图3各组大鼠糖水偏好率比较SD模型构建前，各组大鼠糖水摄取率之间没有差异；SD模型构建后，与Con组相比，SD组大鼠糖水摄取率明显减少（P0.05），接近50%；与SD组相比,SD+1%Sev组糖水摄取率明显增加（P0.05）,SD+1%Sev组糖水摄取率存在改变（P0.05），但差异无统计学意义3.低剂量Sev抑制了HPA轴亢进，增加了5-HT分泌（图4）与Con组相比，SD组大鼠血浆中CRH，A CT H,COR含量明显增加（P0.05），5-H T 含量明显减少（P0.05）；与SD组相比，SD+1%Sev组大鼠血浆中CRH，A CT H，CO R含量明显减少（P0.05）,5-HT含量明显增加（P0.05）;然而，与SD组相比，SD+3%Sev组大鼠血浆中 CRH，A CT H，CO R、5-H T含量虽然改变，但差异无统计学意义。51007a480(ru/ad)HO8321-20-00ConSDConSD+1%SevSD+3%SevSD+1%SevSD+3%SevA：血浆中CRH含量B:血浆中ACTH含量8200a6(u/ad)LH-s1504100-250-00conSDConSDSD+1%SevSD+3%SevSD+1%SevSD+3%SevC:血浆中COR含量D：血浆中5-HT含量注：与Con组比较，P0.05；与SD组比较，bP0.05图4各组大鼠血浆中HPA轴分泌细胞因子含量比较4.低剂量Sev降低了小胶质细胞激活（图5）ConSDSD+2%Sev6（联）42SD+3%SevSDSD+1%SevSD+3%Sev注：与Con组比较，P0.05；与SD组比较，bP0.05图5各组大鼠脑组织中小胶质细胞活化比较与Con组相比，SD组大鼠海马区Ibal平均荧光强度明显增加（P0.05）；与SD组相比，SD+1%Sev组大鼠海马区Ibal平均荧光强度明显减少（P0.05）。5.低剂量Sev降低了小胶质细胞促炎表型，提高了抗炎表型mRNA表达（图6）对于小胶质细胞促炎表型，与Con组相比，SD组 与 SD+3%Sev组 CD16、T NF-、IL-1、i NO SmRNA表达明显增加（P0.05）；与SD组相比，SD+1%Sev组 CD16、T NF-、IL-1、i NO S m RNA表达明显减少（P0.05）；对于小胶质细胞抗炎表型，515脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第8 期与Con组相比，SD组CD206、T G F-、A r g l、Ym lmRNA表达没有改变；与SD组相比，SD+1%Sev组与 SD+3%Sev组 CD206、T G F-、A r g l、Yml mRNA表达明显增加（P0.05）。82ConaSDSD+1%Sev生SD+3%SevbCD16TNF-IL-1iNOSA：抗炎性M1型小胶质细胞mRNA含量一）32CD206TGF-Arg1Ym1B：抗炎性M2型小胶质细胞mRNA含量注：与Con组比较，P0.05；与SD组比较，P0.05图6 名各组炎性细胞因子mRNA比较（xs，n=4）讨论实验室睡眠缺失模型一般分两种，第一类是急性SD模型，指动物短期内（一般为2 4 7 2 h）始终保持觉醒；另一种是慢性SD模型，指动物在一个周期内睡眠不足（如连续5d，每天3h睡眠）。长时间SD会造成大鼠行为学与情绪上的改变，初期会表现为易怒、焦虑、情绪激动的状态，这可能与兴奋性神经递质如CRH水平升高相关。其原理是杏仁核，边缘皮质和额叶前皮质之间的突触信号中断，大脑神经递质分泌失衡。然而，也有研究认为短期、急性的SD（一般为12 h）通过增加5-HT1A受体表达，提高5-HT功能，升高海马CA1区兴奋性突触后电位，改善大鼠抑郁样症状8-9 。因此，SD对抑郁症的影响与觉醒时间相关。本研究通过构建48 h急性SD模型发现，与Con组相比，SD组大鼠出现首次到达平台时间减少，穿越平台次数增加的情况，且SD组大鼠糖水摄取率降低，下丘脑垂体肾上腺轴细胞因子释放增加，5-HT释放减少。即大鼠认知功能障碍与抑郁样症状的生理与病理指标发生改变。SD组大鼠经历了1%Sev治疗后显示，1%Sev+SD组大鼠首次到达平台时间增加，穿越平台次数减少，但糖水偏好率增加，下丘脑垂体肾上腺轴细胞因子释放减少，5-HT释放增加。然而，与此矛盾的是，SD组大鼠经历3%Sev治疗后，以上这些认知功能障碍与抑郁样症状生理与病理指标并没有明显改变。这可能Sev麻醉时伴随的神经毒性相关，且对于老龄或者幼龄大鼠，Sev的神经毒性尤为显著。Wu等10 研究显示幼鼠出生后7 d，经历2 h的Sev麻醉诱导便会造成远期的社会行为改变，表现出行为呆滞，运动迟缓，记忆降低的情况。对于老龄大鼠，Zhou等 研究中显示，Sev麻醉会造成细胞调亡，导致A沉积增加。虽然本研究中采用的是成年大鼠，据文献报道，Sev不会产生明显的神经毒性12 ，但由于急性SD影响，大鼠神经元处于一种易损的状态。因此，3%Sev干预导致明显的神经毒性。然而1%Sev浓度较低，因此发挥了神经保护作用。文献中多有报道，在不同的脑结构损伤中，Sev都存在发挥神经保护的作用 15-。Song等研究中显示，钝性颅脑损伤模型中，Sev（2.4%，0.5h）通过激活FGF2/EZH2信号轴降低HES1表达，发挥抑制神经元自噬与神经元调亡的作用，最终提高了大鼠行为学评分。Machado等研究，脑缺血再灌注模型中，Sev（2%，1h）协同miR-203-3p通过上调Bcl-2和下调HDAC4以减轻脑卒中小鼠脑梗死面积。综合以上研究报道显示，Sev发挥神经保护作用多为亚麻剂量，且其机制多数涉及神经凋亡的抑制。然而，本研究从另一方面研究发现，Sev发挥神经保护作用可能与抑制促炎型小胶质细胞活化相关。由于长期睡眠障碍会导致轻度神经炎症，继而表现出焦虑行为和记忆力下降13，约有1/3抑郁症患者存在炎症表现14，且临床上对于抑郁症治疗中，不少医生会针对患者病情处方部分抗炎药物用于辅助治疗15。神经炎症反应往往被认为是NF-kB/NLRP3信号诱发小胶质细胞活化的结果16 。小胶质细胞是中枢神经系统中与外周系统巨噬细胞功能相似的先天性免疫细胞，通常被认为是大脑的第一道防线。脑损伤早期，为了清除外周侵袭的病原微生物或过度神经凋亡产生的毒性物质，小胶质细胞活化后发挥吞噬作用17 。此时，小胶质细胞主要极化为抗炎的M2表型，可以诱发包括神经发生、轴突重塑和髓鞘再生在内的多种机制修复受损组织18 。随着炎症级联反应后的信号放大，小胶质细胞进一步活化，转化为促炎性M1表型，可以诱发包括神经元焦亡，神经元调亡，过度自噬等病理情况。不同的神经保护药物治疗过程中都有发现促炎性M1表型小胶质细胞表达减少，抗炎性M2表型小胶质细胞表达（收稿日期：2 0 2 2-0 9-0 3）516脑与神经疾病杂志2 0 2 3年第31卷第8 期增加的情况19 。本研究显示，SD组大鼠脑组织中促炎性小胶质细胞mRNA表达增加。1%Sev的干预则明显降低了促炎性小胶质细胞mRNA表达，增加了抗炎性小胶质细胞mRNA表达。然而，有趣的是，与SD组相比，虽然3%Sev干预明显提高抗炎性小胶质细胞mRNA表达，但促炎性小胶质细胞mRNA表达却没有降低。因此，3%Sev诱发神经毒性更多的是与小胶质细胞促炎表型极化相关。综上所述，长时间的SD会造成机体出现认知功能障碍与抑郁样症状，其机制可能与小胶质细胞促炎表型极化增加，抗炎表型极化减少相关。1%的Sev存在神经保护的作用，主要通过抑制小胶质细胞促炎表型极化，增加抗炎表型极化提高大鼠认知功能，减轻大鼠抑郁样症状。利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突作者贡献声明王健、葛树胜：实验资料收集和整理、论文撰写和修改参考文献1Turan I,Ozacmak HS,Ozacmak VH,et al.The effects of glucagon-like peptide 1 receptor agonist(exenatide)on memory impairment,and anxiety-and depression-like behavior induced by REM sleepdeprivationJj.Brain Res Bull,2021,174:194-202.2San-Juan D,Mas RNM,Guti rrez C,et al.Effect of the anodaltranscranial direct current electrical stimulation on cognition ofmedical residents with acute sleep deprivationJJ.Sleep Sci,2022,15(1):89-96.3Goyagi T.Erythropoietin reduces neurodegeneration and long-termmemory deficits following sevoflurane exposure in neonatal ratsJ.Neurotox Res,2019,36(4):817-826.4Huang H,Liu CM,Sun J,et al.Repeated 2%sevofluraneadministration in 7 and 60-day-old rats:Neurotoxicity andneurocognitive dysfunctionJJ.Anaesthesist,2017,66(11):850-857.5Wang Z,Wang Z,Wang A,et al.The neuroprotective mechanismof sevoflurane in rats with traumatic brain injury via FGF2J.JNeuroinflammation,2022,19(1):51.6Song J,He K,Yang L,et al.Sevoflurane protects mice from cerebralischemic injury by regulating microRNA-203-3p/HDAC4/Bcl-2axisJj.Eur J Neurosci,2022,doi:10.1111/ejn.15622.7Machado RB,Tufik S,Suchecki D.Modulation of sleep homeostasisby corticotropin releasing hormone in rem sleep-deprived ratsJ.IntJ Endocrinol,2010,2010:326151.8Azizi H,Hwang J,Suen V,et al.Sleep deprivation induces changesin 5-HT actions and 5-HT 1A,receptor expression in the rathippocampusJj.Neurosci Lett,2017,655:151-155.9Wolf E,KuhnM,Norman C,et al.Synaptic plasticity model oftherapeutic sleep deprivation in major depressionJJ.SleepMed Rev,2016,30:53-62.10Wu Y,Yang Z,Su S,et al.Differential epitranscriptome and proteomemodulation in the brain of neonatal mice exposed to isoflurane orsevofluraneJJ.Cell Biol Toxicol,2022.doi:10.1007/s10565-022-09701-9.11Zhou HS,Cao SM,Liao HS,et al.Hirsutanol a exhibitsneuroprotective activities against sevoflurane-induced neurotoxicityin aged ratsJJ.Anat Rec,2021,304(3):591-601.12Li C,Liu S,Mei Y,et al.Differential effects of sevoflurane exposureon long-term fear memory in neonatal and adult ratsJ.MolNeurobiol,2022,doi:10.1007/s12035-021-02629-x.13Newbury CR,Crowley R,Rastle K,et al.Sleep deprivation andmemory:Meta-analytic reviews of studies on sleep deprivation beforeand after learningJ.Psychol Bull,2021,147(11):1215-1240.14Nemeroff CB.Prevalence and management of treatment-resistantdepressionJ.J Clin Psychiatry,2007,68:17-25.15Raison CL,Rutherford RE,Woolwine BJ,et al.A randomizedcontrolled trial of the tumor necrosis factor antagonist infliximab fortreatment-resistant depression:the role of baseline inflammatorybiomarkersJ.JAMA Psychiatry,2013,70:31-41.16 Qiu C,Wang M,Yu W,et al.Activation of the hippocampal LXR improves sleep-deprived cognitive impairment by inhibitingneuroinflammationJJ.Mol Neurobiol,2021,58(10):5272-5288.17Rudolph M,Schmeer CW,G u nther M,et al.Microglia-mediatedphagocytosis of apoptotic nuclei is impaired in the adult murinehippocampus after strokeJ.Glia,2021,69(8):2006-2022.18Huang L,Wu S,Li H,et al.Hypoxic preconditioning relievedischemic cerebral injury by promoting immunomodulation andmicroglia polarization after middle cerebral artery occlusion in ratsJ.Brain Res,2019,1723:146388.19Yang C,Gong S,Chen X,et al.Analgecine regulates microgliapolarization in ischemic stroke by inhibiting NF-k B through theTLR4 MyD88 pathwayJJ.Int Immunopharmacol,2021,99:107930.