微生物检测培养基.doc

临床微生物培养基手册大全临床微生物检验

常用基础培养基

★营养琼脂

【用途】供作一般细菌培养和菌株的纯化及传种用

【原理】培养基含有氮源、碳源和微量无机盐适合一般细菌的生长繁殖

【成分】蛋白胨１０牛肉膏５.０氯化钠５.０琼脂粉２０蒸馏水１ＬpＨ７.2～7.4

【制备】将上述成分(除琼脂外)溶于水中校正pH后假如琼脂,煮沸溶解,根据用途不同进行分装,经121℃灭菌15min,倾注平板或制成斜面,置冰箱保存,两周内保持用完

【接种】根据用途不同按常规操作,35℃18～24h观察结果

【观察结果】在平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为ß溶血，菌落周围呈绿色为a溶血。溶血的情况可以显微镜下用低

【质量控制】金黄色葡萄球菌,菌落浅黄色,直径＞1.5mm志贺痢疾菌,菌落无色,直径＞1.5mm铜绿假单胞菌,菌落无色或浅绿色,直径＞2.5mm

★血琼脂培养基

【用途】适用于各类需氧及兼性厌氧细菌生长，一般细菌学检验标本的分离培养、溶血鉴别及菌种保存

【原理】羊血或兔血时细菌生长繁殖的良好营养物质。在45℃～50℃的基础培养基中加加入血液（5～10%）可以保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血细胞不被破坏。若将NaCl的浓度提高到0.85%,则可使血平皿经35℃18～24h后色泽仍然鲜艳。在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全破坏为ß溶血。菌落周围呈绿色为ɑ溶血。溶血的情况可以显微镜下用低倍镜观察

【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维羊血60ml pＨ７.2～7.4

【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，置三角瓶内，高压灭菌（121℃15min）后冷至约50℃ ，加入无菌纤维羊血，旋转式充分摇匀后倾平板。血琼脂层厚4mm。凝固后，抽样置于35℃培养18～24h，如无菌生长，冷藏备用。

【接种】取标本增菌培养物或纯培养物划线接种到平板上，置35℃培养1～2d，观察结果

【观察结果】在血平板上除可以观察菌落的形态外，还可以判断溶血的情况：菌落周围的培养基内红细胞完全被破坏为ß溶血，菌落周围呈绿色为ɑ

【质量控制】化脓性链球菌，ATCC19615，生长良好，ß-溶血。肺炎链球菌，ATCC6303，为ɑ溶血。表皮葡萄球菌，ATCC12228，生长良好，不溶血。

★巧克力培养基

【用途】主要用于嗜血杆菌的分离，亦可用于奈瑟菌的增菌培养。

【原理】流感嗜血杆菌培养时，需要依赖血液中的X及V因子方能生长繁殖，当培养基加热至80～90℃时，可使血液中的红细胞破裂，以利于嗜血杆菌，奈瑟菌等的生长培养。凡疑有这些菌种存在的标本，均应接种巧克力平板。血液标本培养，增菌后又细菌生长，若移种巧克力平板上，有利于分离更多的细菌。

【成分】牛肉浸出液1L蛋白胨10氯化钠5琼脂15无菌脱纤维马血、羊血或兔血100mlpH７.2～7.4

【制备】将前四项成分混合，加热溶化，校对pH，高压灭菌（121℃15min）后在80～90℃以无菌方法加入血液，摇匀后置90℃水浴中。维持该温度15min，使之呈巧克力色取出，至室温冷至约50℃，倾制平板 。凝固后，抽样置于35℃培养18～24h，如无细菌生长，冷藏备用。

【接种】将可疑标本直接划线接种于该培养基上，置35℃普通培养或置含5%～10%二氧化碳环境培养18～24h，取出观察细菌生长状况。

【观察结果】流感嗜血杆菌菌落微小(0.8mm),无色透明、光滑整齐、似露滴状，48h后达1.5mm，从血液或脑脊液中分离的菌落往往形成液状，菌落较大，老培养物菌落中心呈凹陷。

【质量控制】流感嗜血杆菌ATCC10211，生长良好，菌落典型。肺炎链球菌，ATCC6305，生长良好，菌落典型。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★营养肉汤

【用途】用于一般细菌的增加培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。

【原理】该培养基含有氮及微量无机盐，适宜一般细菌的生长繁殖，因此是最基础的培养基。

【成分】牛肉浸液1L蛋白胨10氯化钠5pH7.2～7.4（牛肉浸液可用3.0g牛肉膏和1L蒸馏水代替）

【制备】上述各成分混合溶解，校正pH。分装试管，每管3～5ml。高压灭菌（121℃15min），做无菌试验后冷藏备用。

【质量控制】金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌均生长良好。

★肉浸液培养基

【用途】供作基础培养用。营养比肉膏汤好，一般营养要求不高的细菌均可生长。

【原理】牛肉含有丰富的营养物质，如蛋白质、碳水化合物及无机盐类等，通过水解并用Nacl

【成分】新鲜牛肉500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.4～7.6

【制备】1.将新鲜牛肉去除脂肪、肌膜及肌腱，切成小块后用绞肉机绞碎(或用刀剁碎)。取500g碎肉，加蒸馏水1L，混合后置冰箱中冷浸过夜。

2.将肉浸液取出，煮沸20～30min（并不断搅拌，以免沉底、烧焦）。冷后，用绒布或麻布挤压过滤，使所有的肉浸汁尽量挤出。

3.加入蛋白胨、氯化钠，加热溶解，补足蒸发的水分。矫正Ph至7.4～7.6。

4.用滤纸过滤，装瓶。高压灭菌（121℃15min）即成肉浸液。

5.与1L肉浸液中加入2～3g琼脂，即成肉浸液琼脂。

【使用】根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其他培养基。如制作固体培养基，加入琼脂1.5～2%即成。

【质量控制】金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。

【保存】置冰箱可使用较长时间。

★牛脑心浸液培养基

【用途】用于培养要求较高的细菌。

【原理】牛心脑浸液是细菌生长的营养物质，磷酸盐为缓冲剂，加上适宜的无机盐，有利于细菌的生长繁殖。

【成分】牛脑（小牛脑制成浸液）200牛心（制成浸液）250眎胨或多胨10葡萄糖2Na2HPO4蒸馏水1L。

【制备】1.将牛脑、牛心制成浸液，并加水至1L，加入固体成分，加温溶解。

2.调整pH为7.6，分装，高压灭菌（121℃15min）。

3.牛脑心浸液中加放1.5～2%琼脂，即为牛脑心浸液琼脂。

【临床经验】1.培养厌氧菌时再加入半胱氨酸0.5g。

2.若在此培养基中再加入酵母浸出物5g/1L，则效果更佳。

★肝浸液及肝浸液琼脂

【用途】使用于对营养要求较高的细菌培养。

【原理】肝组织除了含有丰富的营养成分，如蛋白质、碳水化合物以及无机盐外，还含有胆固醇、铁化合物、血红蛋白等细菌生长因子，有利于各种细菌的生长繁殖。

【成分】牛肝或猪肝500蛋白胨10氯化钠5蒸馏水1LpH7.0

【制备】将新鲜的牛或猪肝洗净，除去脂肪、浆膜、大血管、肝胆总管，绞碎，置铝制容器内，加蒸馏水500ml，经流动蒸汽加热30min，取出调匀后，再蒸90min。然后，用数层纱布或绒布过滤。滤液中加入蛋白胨、氯化钠，并加蒸馏水至1L。加热溶解，矫正pH至7.0，再置于流动蒸汽蒸30min。用滤纸过滤，分装经高压灭菌（121℃15min），即成肝浸液。于每100ml肝浸液中加入2～3g琼脂，即成肝浸液琼脂。

【保存】置冰箱内有效期较长。

★蛋白胨水

【用途】1.供细菌靛基质（吲哚）试验用2.一般细菌培养和传代

【原理】培养基中的蛋白胨含有色氨酸，能被有些细菌利用而成靛基质，与试剂对二甲氨基苯醛缩二吲哚。而不利用色氨酸的细菌则无此反应，故可鉴别细菌。因含有胨和氯化钠，故可供一般培养和传代。

【成分】蛋白胨（或胰蛋白胨）10氯化钠5蒸馏水1LpH7.2

【制备】将上述成分溶于水中，校正pH，分装试管，每管2～3ml，至121℃灭菌15min备用

【接种】将待检菌接种培养基内，经35℃培养18～24h。

【质量控制】大肠埃希菌，生长极好，靛基质（+）伤寒沙门菌，生长良好，靛基质（-）金黄色葡萄球菌，生长良好，靛基质（-）

★血液增菌培养基

【用途】用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。

【成分】牛肉浸液1L眎胨或多价蛋白胨10氯化钠5葡萄糖3～枸橼酸钠3酵母浸膏3琼脂0.75 0.75%对氨基苯甲酸5mlpH7.4

【制备】将上述各成分混合校正pH。分装于螺旋盖有橡皮塞可穿刺的瓶，每瓶50ml。高压灭菌（121℃15min）后，无菌手续加入灭菌硫酸镁(24.65%)溶液1ml。也可选用各种商品血液培养系统。

★葡萄糖肉汤

【用途】用于血液增菌。

【成分】蛋白胨10氯化钠5肉浸液（或心浸液）1L葡萄糖3枸橼酸钠3 0.5%对氨基苯甲酸水溶液10ml 24.65%MgSO4?7H2O水溶液20ml青霉素酶1000U

【制备】将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨基苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸5min，并补足失水，调整pH至7.8。过滤分装于带有反口橡皮塞的玻璃瓶内，每瓶装50ml，高压灭菌115℃20min，每瓶加入青霉素酶50U，经无菌试验合格后，冷却备用。

【接种】将采取的血液标本，以无菌手续注入培养液瓶中（血液1ml，培养液10ml），置35℃培养箱内，每日取出观察一次结果。

【观察结果】经35℃培养，如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时做分离培养，可选用血琼脂、EMB及巧克力平板等。无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中，至于应做2次分离培养。

【临床经验】1.枸橼酸钠为抗凝剂，使血液加入培养基中不凝固。

2.对氨基苯甲酸能中和血液中磺胺类药物的抑制作用。

3.硫酸镁能破坏血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑制作用。

4.本培养基近年来有许多改良配方，如加入0.3～0.5%酵母浸膏以增菌培养；加0.2%核酸刺激细菌生长；加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面，使细菌免受抗体破坏；加入SPS可提高检出率。

常用阳性及阴性球菌分离培养基

★甘露醇琼脂

【用途】供致病性葡萄球菌分离培养用。

【原理】根据致病葡萄球菌耐盐性强和发酵甘露醇的两大特性，在25g/L含盐量的甘露醇琼脂平板上能生长，并形成橙黄色均落，酚红指示剂起显色作用。而凝固酶阴性葡萄球菌不发酵甘露醇呈现红色菌落。微球菌及大部分革兰阴性杆菌基本不生长。因此该平板起选择性分离和鉴别作用。

【成分】眎蛋白胨10牛肉膏10氯化钠25琼脂20甘露醇10 0.2%酚红水溶液12.5ml蒸馏水1LpH7.4

【制备】将上述成分（除甘露醇、酚红外）溶于水中，加热后溶解，校正pH后加入甘露醇和酚红水溶液，摇匀分装，经115℃15min灭菌，待冷却到50℃时倾注平皿，凝固后冷藏备用。

【接种】取待检标本或增菌培养物划平板，置35℃培养18～24h。

【观察结果】挑取橙黄色菌落，接种营养琼脂斜面，经培养后做涂片和其他生化鉴定。

【质量控制】金黄色葡萄球菌，生长，菌落呈黄色，直径>1.0mm.表皮葡萄球菌，生长，菌落呈红色，直径〉1.0mm.普通变形杆菌、大肠埃细菌，基本不生长。

【保存】置冰箱内，使用期限2～3d，如用无菌塑料袋包装可延长使用时间。

★哥伦比亚血琼脂

【用途】供革兰阳性球菌分离用。

【原理】培养基内含有萘啶酸和黏菌素，对革兰阴性菌有很强的抑制作用。

【成分】胰酪蛋白胨12牛肉蛋白胨15玉米淀粉1氯化钠5黏菌素10mg萘啶酸15mg 琼脂粉12蒸馏水1L脱纤维羊血50mlpH7.2～7.4

【制备】将上述各成分（羊血和抗菌药物除外）充分混合，加热溶解，调pH7.2～7.5，115℃15min灭菌。待冷至50℃时加入脱纤维羊血50ml及黏菌素和萘啶酸（预先溶于5ml水中）。混匀，勿使产生气泡。倾入无菌平皿，凝固后备用。

【接种】取经过增菌的标本或其他标本，直接划种于平板上，置35℃24～48h观察结果。

【质量控制】配成的培养基应呈鲜红色，冰箱放置后可变为暗红色。大肠埃希菌，ATCC25923，抑制性生长。肺炎链球菌，ATCC6303，生长良好。化脓性链球菌，ATCC19615，生长良好。

★卵黄双抗琼脂

【用途】供分离培养脑膜炎奈瑟菌用。

【成分】蛋白胨10氯化钠5牛肉膏3玉米淀粉1.6750%卵黄盐水悬液100ml多黏菌素B4.2mg万古霉素3.3mg琼脂15～20g蒸馏水1L

【制备】将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏溶解后，矫正pH至7.6，加入玉米淀粉（先以水调成糊状）及琼脂，混合后115℃20min灭菌。待冷至50℃左右，加入卵黄和抗菌药物（抗菌药物先以少量无菌蒸馏水溶解），轻轻摇匀后，倾注平板备用。

【接种】将标本立即分离接种于上述平板至35℃，含5～10%二氧化碳环境培养20～24h，取出观察结果。

【观察结果】脑膜炎奈瑟菌在此平板上（20～24h），菌落呈无色或米灰色，光滑湿润，边缘整齐，半透明，不产生色素。

【质量控制】脑膜炎奈瑟菌生长良好。

【保存】新鲜配置的平板置4℃冰箱可保存2～3d，如用无菌塑料袋包装可延长使用时间。

【临床经验】1.50%卵黄盐水的制备：取新鲜鸡蛋，用肥皂水洗净蛋壳，浸于75%乙醇中30min，取出用无菌纱布擦干，以无菌手续弃去蛋清，将蛋黄收集于置有玻璃珠的无菌三角烧瓶中摇匀，在加等量盐水，用力振荡，将卵黄搅碎，使之呈均匀混悬液。

2.如无玉米淀粉，用可溶性淀粉代替，多黏菌素B亦可用硫酸多黏菌素E代替。

3.卵黄盐水用10%脱纤维羊血代替，做成巧克力双抗琼脂，亦可作脑膜炎奈瑟菌培养用。

★淋病奈瑟菌分离琼脂(GC Agar)

【用途】用于分离培养淋病奈瑟菌（亦可分离培养脑膜炎奈瑟菌）)

【原理】因淋病奈瑟菌的繁殖对营养要求较高，标本含杂菌又多，难以分离，所有培养基内必须含有马血、血清及卵黄，以及多种氨基酸、维生素和辅酶等增补剂，如lsovitaleX(BBL)\Vitox(Oxoid)等。另外，T-M（Thayer-Martin）培养基是在GC琼脂的基础上，添加抗菌药物抑制剂以抑制革兰阳性细菌和真菌的生长，增强其选择性，提高检出率。

【成分】基础琼脂（双倍浓缩）多价胨（Oxiod）15麦淀粉1.0氯化钠5K2HPO44.0KH2PO41.0琼脂粉10蒸馏水500mlpH7.2增补剂2ml/100ml培养基马血（水溶解物）100ml/100ml培养基

【制备】将基础琼脂成分混合溶于水中，煮沸溶解，矫正pH，分装每瓶100ml，经121

℃灭菌15min备用。临用时将琼脂基础100ml加热熔化，冷却至50℃时加入无菌的5%马血水溶液（先欲温50℃）100ml，再加入增补剂2ml，倾注平板。

注：T-M培养基：取GC琼脂9、（双倍浓度）100ml，加入血红蛋白2%水溶液100ml，增补剂2ml，在倾注平板前加入抗菌药物混合液1ml。

抗菌药物培养基内最终浓度含有发：TMP5ug/ml，万古霉素3ug/ml，多黏菌素7.5ug/ml，制霉菌素12.5ug/ml。

【接种】取病灶部位分泌物（棉拭子），在取样现场迅速直接涂布在平板上，保温到实验室再做4区划线，立即置含10%二氧化碳温箱内，亦可用二氧化碳（或蜡烛缸），注意培养环境的适度，培养1～d。

【观察结果】菌落较小（0.5～1.0mm），湿润，光滑，凸起，透明无色成水珠状。然后做涂片染色镜检和氧化酶等实验等进行鉴定。

【质量控制】使用前必须进行目的菌的生长试验，质量合格者，方可使用。

【保存】置冰箱内，一周内用完。

★卵黄糖发酵平板

【用途】检测脑膜炎奈瑟菌生长反应，适用于现场大量标本的筛选。

【成分】牛肉浸膏3氯化钠5蛋白胨10玉米淀粉1.67 50%卵黄盐酸悬液10ml琼脂200.%酚红溶液5ml蒸馏水900ml糖（醇）按需加入pH7.4

【制备】1.将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠加水加热溶解，调pH至7.

2.将玉米淀粉加于20ml蒸馏水中搅拌均匀，再加入90ml沸水，边加边搅，使成糊状，倒入上述溶液中，加入琼脂、糖类及指示剂，高压灭菌121℃20min备用。

3.待琼脂基本冷却至50℃左右，加卵黄盐水100ml，轻轻摇匀后倾注平板。凝固后置35℃做无菌试验，合格后方可使用。

【接种】采用点种法，将脑膜炎奈瑟菌点种于上述平板上（接种量要大），置35℃培养18～24h培养，生长菌落为淡红色，培养基背景转黄色者为阳性。

【临床经验】1.脑膜炎奈瑟菌对糖发酵能力较弱，虽在发酵过程中曾一度使培养基变酸（变色），但时间一长，就会被细菌在代谢过程中不断形成的碱性物质所中和，使培养基又逐渐转为原来的中性或碱性颜色。如不及时观察，容易误作阴性反应，故进行生化反应时应随时观察随时记录。

2.培养基内加入适量的玉米粉，可吸附培养环境中对该菌的毒性物质，以利于生长，培养温度低于30℃或超过40℃均不能生长。

常用革兰阴性杆菌分离培养基

★中国蓝琼脂

【用途】可抑制革兰阳性细菌，使较好的弱选择性培养基。

【原理】以中国蓝为指示剂，无抑制作用，玫瑰红酸仅能抑制革兰阳性细菌生长，而对大肠杆菌没有抑制作用。发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此种平板上的菌落颜色不同，便于鉴别菌种。

该培养基中不含胆盐，与SS琼脂配对用于粪便中志贺菌和沙门菌的分离是比较合理的。

【成分】牛肉膏5氯化钠5蛋白胨10琼脂15乳糖10蒸馏水1L无菌1%中国蓝水溶液3ml1%玫瑰红酸乙醇溶液3mlpH7.2～7.4

【制备】将前6项成分混合，加热熔化，校正pH（7.4）后，高温灭菌（115℃15min）。冷却至60℃，无菌手续加入中国蓝溶液和玫瑰红酸乙醇溶液，充分摇匀后，倾制平板。

【接种】将检材直接划线分离于该平板上，至35℃18～24h观察结果。

【观察结果】在中国蓝平板上，分解乳糖产酸的细菌，其菌落呈蓝色；不分解乳糖的细菌，菌落为淡红色的透明菌落。

【质量控制】大肠埃希菌ATCC25922，菌落呈蓝色。痢疾志贺菌Ⅰ型，ATCC，13311，菌落呈淡红色。鼠伤寒沙门菌，ATCC，13311，菌落程淡红色。

【保存】平板置4℃冰箱保存，1周内用完。

【临床经验】1.中国蓝水溶液徐徐煮沸或高压115℃15min灭菌后腰应用。玫瑰红酸乙醇溶液，无需灭菌，但加热时应避开火焰。

2 玫瑰红酸能抑制革兰阳性细菌生长，但对大肠埃希菌没有抑制的作用，故各种标本接种量不宜太多。

3.次培养基pH约为7.4，制好后应呈淡紫红色，若过碱则呈鲜红色，过酸则呈蓝色，均不适用。

★伊红亚甲蓝琼脂（eosin methylene blue agar）

【用途】供肠道致病菌及大肠菌群的分离。

【原理】伊红和亚甲蓝两种燃料一酸一碱。两者在培养基中为指示剂，对革兰阳性菌有抑制生长作用。当大肠埃希菌分解乳糖时，菌落中的伊红和美蓝相结合形成紫红色的复合物，有时呈金属光泽；而不分解乳糖的细菌其菌落为无色或灰白色；有的细菌因产生碱性物质较多，而出现蓝色菌落。

【成分】蛋白胨10K2HPO42琼脂15乳糖10蒸馏水1L无菌2%伊红-Y和亚甲蓝溶液，充分摇匀，倾制平板。

【制备】将前5项成分混合，加热溶化，校正pH后高压灭菌。冷却至60℃，无菌手续加入伊红-Y和亚甲蓝溶液，充分摇匀，倾制平板。

【接种】取粪便标本或增菌物，划线接种在平板上，置35℃培养18～24h观察结果。

【观察结果】根据检验目的不同，挑取无色菌落或挑选紫红色及有金属光泽的菌落转种到克氏双糖或三糖铁琼脂进行鉴定。

★麦康凯平板

【用途】供肠道致病菌的分离培养和非发酵细菌鉴别用。

【原理】该培养基利用胆盐来抑制革兰阳性细菌生长，为中等程度选择性培养基，抗菌力略强，有少数革兰阴性菌不生长；而对伤寒等沙门菌促进生长的作用。利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开。沙门菌及志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落。

在麦康凯平板上能够生长，是非发酵菌鉴定的一个根据。如果用麦康凯平板作为原始标本分离的培养基时，应注意该标本在血平板上的细菌分离生长情况，以免遗漏部分被抑制生长细菌。

【成分】蛋白胨20氯化钠5胆盐5乳糖10琼脂15～201%中性红溶液5ml蒸馏水1LpH7.2

【制备】将各成分（除中性红外）混合，加热溶解，校正pH，加入中性红溶液，高压灭菌115℃15min，冷却至约50℃，倾制平板，4℃冰箱（避光）保存，1周内用完。

【接种】取粪便标本或增菌物划线接种到平板上，置35℃18～24h培养18～24h观察结果。

【观察结果】不发酵乳糖的肠道细菌呈无色菌落，直径约为2.0mm，光滑半透明。大肠埃希菌呈红色菌落。

【临床经验】非发酵细菌在该平板上是否生长，使临床鉴定某些非发酵细菌的指标之一。

★SS琼脂

【用途】用于志贺菌和沙门菌分离

【原理】SS琼脂为强选择性培养基。其成分除了有必要的胨、牛肉膏等氮、碳源外，其他则为选择性抑制剂和缓冲剂。如枸橼酸钠、胆盐、硫代硫酸钠的协同作用与煌绿共同来抑制肠道非病原性细菌及部分大肠埃希菌的生长；对志贺菌属及沙门菌属相对抑制性较弱。硫代硫酸钠有助于大肠菌的菌落着色，枸橼酸铁能缓解某些药物对病原菌的毒性作用，同时与细菌产物起反应呈黑色菌落。中性红可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落，故此具有选择性鉴别作用。

【成分】牛肉浸粉5眎胨或多价蛋白胨5乳糖10胆盐8.5枸橼酸钠8.5硫代硫酸钠8.5枸橼酸铁1琼脂15～201%中性红水溶液2.5ml0.1%煌绿水溶液0.33ml蒸馏水1LpH7.0～7.1

【制备】将上述成分（除中性红、煌绿）混合于水中，加热煮沸溶解（部高压），校正pH，然后加入中性红和煌绿水溶液，充分混匀冷至50℃时倾注平板。

【接种】将病人或带菌者的各种标本直接划线接种在该平板上，置35℃培养18～24h观察结果。

【质量控制】大肠埃希菌，抑制性生长，菌落程红色。志贺痢疾Ⅰ型，生长良好，菌落无色。福氏志贺菌，生长良好，菌落无色

【观察结果】沙门菌其菌落呈无色半透明，产生H2S者菌落中心呈黑色，部分菌株如亚利桑那亚属Ⅲ有分解乳糖的菌落呈红色、中心黑色，志贺菌属的菌落呈无色透明。大肠埃希菌呈红色混浊。宋内志贺菌能延缓发酵乳糖，培养24h厚可以出现红色菌落。肠道致病菌的菌落均可达1.5mm以上。

【保存】避光，3d内用完，或保存于冰箱内备用。

【临床经验】煌绿要新配，中性红要优质；此培养基因含胆盐量较高，对肠道非病原性细菌有较强的抑菌力。在目前商品培养基中，不同厂家的产品抑菌力不同，使用时应注意。选择性过强，可能影响检出率，所以，最好的办法是选择一种若选择平板，以配对互补使用。

★山梨醇麦康凯琼脂

【用途】用于致病性、侵袭性和产毒性大肠埃希菌分离培养。

【原理】用山梨醇替代乳糖制成的麦康凯琼脂有利于对部分大肠菌的鉴别。如致病性、侵袭性和产毒性大肠菌有部分菌株不发酵山梨醇，在此培养基上生长的菌落呈无色，以识别。

【成分】蛋白胨5眎胨3氯化钠5胆盐5山梨醇10琼脂粉120.01%结晶紫水溶液1ml0.5%中性红水溶液5ml蒸馏水1LpH7.2

【制备】将上述成分（除中性红、琼脂粉、结晶紫、山梨醇）混合于水中，加入溶解，校正pH，再加入琼脂粉加热煮沸溶解。分装三角烧瓶100ml，经121℃15min灭菌备用。临用时，加热溶解，再加入山梨醇、结晶紫及中性红水溶液，摇匀倾注平板。

【接种】将标本活增菌液直接分离到平板上，置35℃培养18～24h。

【观察结果】与麦康凯琼脂不同之处事挑取致病性大肠的菌落时，以无色菌落为主，同时也不能放弃红色菌落，如EPEC迟缓分解山梨醇，菌落呈红色。EHECO55H6菌落无色。

【质量控制】参照麦康凯琼脂。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★碱性琼脂

【用途】供霍乱弧菌分离培养用。

【原理】利用霍乱弧菌怕酸不怕碱的特点，提高培养基的pH来抑制其他菌的生长，以利于目的菌的分离。

【成分】蛋白胨10牛肉膏3氯化钠5琼脂20蒸馏水1LpH8.4

【制备】将上述成分混合于水中，加热溶解，校正pH，分装后高压灭菌121℃15min倾注平板。

【接种】凡急性病人水样便做增菌培养的同时，应直接将粪便标本分离到碱性琼脂平板或亚碲酸钾琼脂平板上。置37℃培养12～16h，观察结果。

【观察结果】霍乱弧菌生长较快，菌落大而扁平，呈青灰色，半透明，光滑湿润。在亚碲酸钾琼脂上菌落较小，呈灰黑色。

【质量控制】各实验室凡自配或商品培养基，在使用前必须用标准菌株或送上一级检验机构进行目的菌检测，质量可靠者方可使用。

El-Tor弧菌，生长良好；大肠埃希菌25922，抑制性生长。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★TCBS琼脂

【用途】供霍乱弧菌及副溶血性弧菌分离培养用。

【原理】在碱性琼脂的基础上，利用枸橼酸钠、硫代硫酸钠和牛胆汁，加强了对革兰阳性菌及大肠菌群等杂菌的抑制。牛胆汁对霍乱弧菌生长又有促进作用。其中T.B和BTB作指示系统，把分解蔗糖的霍乱弧菌与不分解蔗糖的细菌鉴别开。

【成分】酵母膏粉5蛋白胨10枸橼酸钠10硫代硫酸钠10牛胆汁粉8蔗糖20氯化钠10枸橼酸铁1麝香草酚蓝（T.B）0.04溴麝香草酚蓝（BTB）0.04琼脂粉12蒸馏水1LpH8.4

【制备】将上述成分（除T.B和BTB）称量混合于水中，加热煮沸溶解，校正pH，再加入T.B和BTB指示剂，混匀倾注无菌平板。

【接种】取病人粪便或增菌培养物，划线分离于琼脂平板上，置35℃培养16～18h，观察结果。

【质量控制】霍乱弧菌（小川、稻叶），生长良好，菌落2～3mm，黄色。副溶血性弧菌，生长良好，菌落2～3.5mm，蓝绿色。大肠埃希菌，基本生长良好。金黄色葡萄球菌，不生长。变形杆菌，受抑制。

【保存】置冰箱，1周内用完。

【临床经验】霍乱弧菌在此培养基上，血清凝集试验有时不易乳化，应引起注意。

★庆大霉素琼脂

【用途】供霍乱弧菌分离培养用。

【原理】该培养基以碱性琼脂作基础，加入枸橼酸钠、亚硫酸钠、庆大霉素以及多黏菌素B来抑制革兰阳性和阴性杆菌的生长，而对霍乱弧菌无抑制性。在标本中杂菌较多时加入亚碲酸钾1/20万，对杂菌抑制效果更好，分离率更高。

【成分】蛋白胨10牛肉膏3氯化钠5枸橼酸钠10无水亚硫酸钠3蔗糖10琼脂15～20庆大霉素、多黏菌素B“双抗液”2ml蒸馏水1LpH8.4

【制备】将上述成分（除双抗液）称量混合于水中，加热溶解，校正pH，分装灭菌121℃15min，冷至50℃时，每100ml内加“双抗液”1.2ml，倾注平板。如果标本中杂菌较多时，可另加0.5%亚碲酸钾水溶液0.1ml，再倾注平板。最后每毫升培养基内含有庆大霉素0.5U，多黏菌素B0.6U，亚碲酸钾1/20U。

【接种】将粪便标本活增菌培养物划线接种到该平板上，置35℃培养16～18h。

【观察结果】由于该培养基抑制性强，而霍乱弧菌生长迅速，16h菌落达2mm，菌落青灰色，半透明，扁平，光滑湿润。培养时间长，菌落略黄色、隆起，中心厚而不透明。

【质量控制】霍乱弧菌（小川、稻叶）生长良好，培养18～24h菌落直径2.5～3.0mm，大肠杆菌和变形杆菌受抑制。

【保存】置冰箱内，1周内用完。

【临床经验】“双抗液”配置：98ml灭菌蒸馏水中加入庆大霉素（25000U/ml）1ml，多黏菌素B或多黏菌素E（3000000U/ml）1ml。冰箱保存1个月用完。

★4号琼脂

【用途】供分离霍乱弧菌用。

【原理】培养基中所有庆大霉素主要抑制革兰阴性细菌生长，十二烷基硫酸钠和利凡诺（雷佛奴尔）主要抑制阳性细菌生长，这3种药品还有协同作用，故此培养基抑制杂菌的能力很强，为选择性培养基。另一方面，由于亚硫酸钠和枸橼酸钠有促进霍乱弧菌生长的作用，胆汁有保护霍乱弧菌和促进生长的双重作用，在该培养基上霍乱弧菌能使亚碲酸钾还原成碲，菌落中心呈黑色，边缘淡黄色的大菌落与其他杂菌的小菌落很容易区别。

【成分】蛋白胨10氯化钠5牛肉膏3亚硫酸钠（无水）3枸橼酸钠10猪胆汁粉5十二烷基硫酸钠20利凡诺（雷佛奴尔）3琼脂粉12庆大霉素亚碲酸钾混合液1ml蒸馏水1LpH8.0

【制备】将1～8成分放于玻璃或搪瓷容器内（严禁用铝制等金属容器），加入蒸馏水，加热混合后，调整pH至8.0，然后按1.2%加入琼脂，煮沸至琼脂溶化后，冷却至60℃

【接种】取待检标本划线接种于平板上，置35℃培养过夜。

【观察结果】8h即可初步观察结果，24h霍乱弧菌呈中心黑色较大而扁平的菌落，较易区别。

【质量控制】1.配成的培养基呈亮黄色透明。

2.El-Tor弧菌稻叶型和小川型均生长良好，大肠埃希菌ATCC25922不生长。

【临床经验】1.庆大霉素和亚碲酸钾混合液应新鲜配制并置冰箱保存。

2.利凡诺应避光保存，而且每批均应预试后方可使用。成品培养基应避光保存。

★HE琼脂

【用途】供沙门菌属及志贺菌属分离培养使用

【原理】该培养基既有较强的选择性，又有一定的鉴别性，因为培养基内含有高浓度的胆盐，能抑制革兰阳性及大肠杆菌的生长，而有利于沙门菌的生长，因此具有选择性。

培养基内含有乳糖、蔗糖和水杨素等3种糖作为鉴别系统，溴麝香草酚蓝和酸性品红指示剂作用，能把发酵糖类的细菌区别开。前者为橘黄色，后者为淡蓝色菌落。能产生H2S的沙门菌其菌落无色半透明，中心显黑色，志贺菌在此培养基上呈淡蓝色半透明，因此易于鉴别。

【成分】蛋白胨12酵母浸膏3乳糖12蔗糖12水杨素2混合胆盐9氯化钠5硫代硫酸钠5枸橼酸铁铵1.50.4%溴麝香草酚蓝16ml0.5%酸性品红12琼脂粉12蒸馏水1LpH7.5

【制备】将上述成分（除指示剂）称量混合于水中，加热溶解，校正pH，最后加入指示剂，冷却至50～55℃倾注灭菌平皿。

【接种】取粪便标本或增菌培养物，划线接种于该平板上，置35℃培养18～24h观察结果。沙门菌落呈淡蓝色，产生H2S者菌落中心呈黑色；志贺菌的菌落呈淡蓝色半透明；大肠埃希菌落呈橘黄色，3种菌落大小基本相近。经18～24h培养后，菌落直径约2.0mm。

【质量控制】大肠埃希菌，菌落呈橘黄色。鼠伤寒沙门菌，菌落呈黑色。志贺菌，菌落淡蓝色。金黄色葡萄球菌，不生长。

【保存】置冰箱，1周内用完。

★GN增菌液

【用途】供志贺菌增菌培养用。

【原理】该培养基中含有枸橼酸钠和去氧胆酸钠，对革兰阳性菌有抑制作用，而对革兰阴性杆菌抑制性较弱。

【成分】蛋白胨20葡萄糖1甘露醇2枸橼酸钠5磷酸氢二钾4磷酸二氢钾1.5氯化钠5蒸馏水1LpH7.0

【制备】将上述成分称量混合，加热溶解，校正pH，分装于试管5～10ml，经121℃15min灭菌备用。

【接种】取粪便标本或棉拭子取样直接接种到增菌管内，置35～37℃培养6～8h。

【观察结果】培养物有细菌生长者，即分离到SS和麦康凯琼脂平板上进行培养。

【质量控制】接种大肠埃希菌（ATCC25922）和痢疾志贺菌，10个活菌即可检出。

【保存】置冰箱保存，2周内用完。

★四硫磺酸盐（TT）增菌液

【用途】沙门菌增菌培养用。

【原理】TT增菌液中的碘氧化硫代硫酸钠而形成四硫磺酸钠（2Na2S2O3+I2→Na2S4O6）。四硫磺酸钠对大肠埃希菌有抑制作用，而有利于沙门菌的生长，但对志贺菌也有一定的抑制作用。碳酸钙具有缓冲作用，使沙门菌不至于因增菌液酸碱度的改变而死亡。

【成分】眎胨或多胨5硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）30碳酸钙10胆盐1蒸馏水1L碘液（碘6g，碘化钾5g，溶于20ml水中，储存于棕色玻璃瓶内备用）

【制备】将上述成分（除碘液），混合后，加热溶解，不必校正pH，每管分装10ml，分装时应充分振摇，使碳酸钙能均匀地分装到各试管内。经高压蒸汽115～121℃10min灭菌。

临用时，于每只试管内加碘液0.2ml，混匀即可。

★亚硒酸盐（SF）增菌液

【用途】沙门菌增菌培养用。

【原理】强选择性增菌培养基，亚硒酸盐对革兰阳性菌有较强的抑制作用，又选择性的抑制生长作用，对革兰阴性杆菌，有选择性的抑制生长作用，尤其对大肠埃希菌属和志贺菌属的细菌抑制性较为明显，而对沙门菌属则无明显的抑制性。在磷酸缓冲剂的作用下，这种差异就更明显，从而起到选择作用。

【成分】亚硒酸氢钠4蛋白胨5乳糖4磷酸氢二钠9.5磷酸二氢钠0.5蒸馏水1LpH7.1

【制备】将上述各成分溶于水中，校正pH，分装每管10ml，用流动蒸汽100℃15～30min灭菌后，冷藏备用。

【临床经验】1.SF增菌液不宜用高压蒸汽灭菌。温度过高，会有大量红色沉淀形成，影响增菌效果。

2.pH必须为7.1，否则会产生棕黄色沉淀。若pH不符，可改变磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的比例，进行调整。

3.亚硒酸钠或亚硒酸氢钠都可用。硒盐是剧毒品，必须妥善使用、保管。硒的有机物和硒氢化合物时挥发性的，有毒，勿吸入。

★碱性蛋白胨水

【用途】供霍乱弧菌增菌培养用。

【成分】蛋白胨20氯化钠5蒸馏水1LpH8.6

【制备】将上述成分溶解于水中，校正pH，分装于试管8～10ml，经121℃15min备用。

【接种】将待检标本接种到碱性蛋白胨水中，置37℃培养6～8h，即分离到碱性琼脂，庆大琼脂或TCBS琼脂平板上。必要时做第二次增菌6～8h。

水样增菌取50ml，10倍浓缩碱性胨水加水样450ml，再加入1%无菌亚硒酸钾溶液1ml和青霉素100U，置37℃培养过夜，再做第二次增菌6～8h，做分离培养。

【观察结果】经6～8h培养，霍乱弧菌呈均匀混浊生长，表面有菌膜出现。

【质量控制】各实验室自配或采用商品培养基，用前均需用标准菌株进行检测，生长良好者方可使用。

霍乱弧菌El-Tor生物菌，生长良好（6h）。大肠埃希菌ATCC25922，抑制生长(6h).副溶血性弧菌，生长良好。

【保存】置冰箱，2周内用完。

【临床经验】若在碱性胨水中加入1%亚碲酸钾0.5～1ml/L，则成为亚碲酸钾碱性胨水，其增菌效果更为理想。

★耶尔森菌分离培养基CIN琼脂

【用途】供小肠结肠炎耶尔森菌分离培养用。

【成分】甘露醇20明胶胰酶消化液10牛肉浸膏5眎胨5丙酮酸钠2酵母膏粉2氯化钠1去氧胆酸钠0.5中性红0.03新生霉素0.0025结晶紫0.001头孢磺啶钠（达克舒林）0.015氧苯酚（Irgasan DP 300）0.004琼脂粉12蒸馏水1LpH7.2～7.6

【制备】将上述成分（除新生霉素和达克舒林）加入水中，煮沸溶化，冷至50℃，以无菌手续加入新生霉素和头孢磺啶钠，婚姻内，倾入无菌平皿，备用。

【接种】取标本划线接种于上述平板上，置22℃培养48h。

【观察结果】小肠耶尔森菌可利用甘露醇，其菌落可形成中心深红，有透明周边的牛眼装菌落。

【质量控制】配成之培养基应呈粉红色或橘红色透明。

小肠耶尔森菌接种后置22℃培养48h，生长良好，菌落