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实验四十四 荧光法测定硫酸奎尼丁
一、目的要求
1. 掌握用校正曲线法进行荧光定量分析。
2. 熟悉荧光分光光度计的使用方法。
二、实验原理
硫酸奎尼丁属生物碱类抗心律失常药，分子结构如图所示。由于其分子结构中具有喹啉环结构（奎尼丁为奎宁的右旋体），故能产生较强的荧光，可用直接荧光法测定其荧光强度，由校正曲线法或回归方程求出试样中奎尼丁的含量。

三、主要仪器与试剂
仪器 岛津RF-1501型荧光分光光度计，移液管（1ml，5ml），刻度吸量管（5ml），量瓶（50ml）
试剂 H2SO4溶液（0.05mol/L），硫酸奎尼丁（原料药），硫酸奎尼丁对照品
四、操作步骤
1.硫酸奎尼丁标准储备液的制备 精密称取硫酸奎尼丁对照品约50mg，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取5ml，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得硫酸奎尼丁标准贮备液。
2.标准系列溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁标准贮备液1、2、3、4及5ml，分别置50ml量瓶中，用硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，制得对照品标准系列溶液。
3.试样溶液的制备 精密称取硫酸奎尼丁试样约10mg，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1ml，置50ml量瓶中，用硫酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制得待测样品溶液。
4.测定
（1）开机：先开主机电源，再开氙灯（Xe lamp）。
（2）确定最大激发波长和最大发射波长。
（3）校正曲线测定：将空白硫酸溶液放入吸收池，点击自动调零按钮“Autozero”，仪器自动进行空白校正（自动扣除空白）。输入浓度值，按顺序放入标准溶液，点击“Start”进行测定。标准系列溶液测定完毕后，绘制标准曲线，仪器窗口将显示标准曲线回归方程（FI=K*C+B）和相关系数(r)。
（5）试样测定：按弹出对话框的提示进行。试样测定的数据（荧光强度和浓度）将显示在数据表格里。根据浓度计算试样中硫酸奎尼丁的百分含量。
5.关机：先关氙灯，待仪器降至室温后，再关总机电源。
五、注意事项
1. 在溶液的配制过程中要注意容量仪器的规范操作和使用。
2. 测量顺序为低浓度到高浓度，以减少测量误差。
3. 进行校正曲线测定和试样测定时，应保证仪器参数设置一致。
六、思考题
1. 测定试样溶液、标准溶液时，为什么要同时测定硫酸的空白溶液？
2. 如何选择激发光波长（λex）和发射光波长（λem）？采用不同的λex或对λem测定结果有何影响？

1. 答：消除硫酸溶液中荧光物质对于测定的影响。
2. 答：（1）① 固定发射波长，测定激发光谱；再固定激发波长，测定发射光谱。
通常选择在最大激发波长和最大发射波长进行物质测定。
② 查阅相关文献。
（2）可能造成定量的灵敏度降低。