放线菌形态观察.doc

放线菌的形态观察
作者：喻曙光 学号：201000。。。。。。 班级：生院2010级生命基地
生北周五第四组 同组者：。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。

【实验目的】
1．学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。
2．了解放线菌的形态特征。
【实验原理】
高氏I号营养培养基
高氏I号营养培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将两中或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如Fe元素。
放线菌及插片法观察放线菌
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称“菌丝”），基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基内菌丝而无气生菌丝。放线菌菌丝体有基内菌丝、气生菌丝和孢子丝组成，制片时不采用涂片法，以免破坏细胞及菌丝形态。通常采用插片法或玻璃纸法并结合菌丝体简单染色进行观察。在插片法中，首先将灭菌盖玻片插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基交接处生长而附着在盖玻片上。取出盖玻片可直接在显微镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于对不同生长时期的放线菌形态进行观察。
在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
【实验材料】
1．.菌种：青色链霉菌(S. glaucus )，弗氏链霉菌(S. fradiae )。
2．培养基：高氏I号培养基。
3．仪器或其他用具：培养皿，盖玻片，载玻片，接种针，镊子，显微镜等。
【实验步骤】
1．配制高氏I号培养基（200mL）：按配方称取高氏培养基各组分，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至200mL，调节pH，121℃灭菌20min。
2．倒平板：取融化并冷却高氏I号培养基倒平板，倒平板时尽量使培养基厚一些，凝固待用。
3． 接种：无菌操作，用接种针挑取菌种培养物在平板上划线接种，划线要密，不能交叉。
4． 插片：以无菌操作用酒精泡过并在酒精灯上灼烧的镊子将灭菌的盖玻片以大约与培养基成45°角插入平板内，并与划线垂直，每个平板插入3个盖玻片。
5． 培养：将平板倒置，28℃培养7天。
6． 镜检：用酒精泡过并在酒精灯上灼烧的镊子小心拔出盖玻片，擦去一面培养物，然后将有菌的一面朝下放在载玻片上，直接10—40倍镜检，必要时可用油镜观察。

【实验结果与分析】
表（1）：各种菌丝形态特征
项目
基内菌丝形态
气生菌丝形态
孢子丝形态
青色链霉菌
较长，疏松，多分枝
毛状
紧密螺旋形
弗氏链霉菌
略短，较密，多分枝
厚絮状
直条状
（一）绘图表示孢子丝

图1弗氏链霉菌 图2青色链霉菌

（二）实验图示 弗氏链霉菌及青色链霉菌

图3弗氏链霉菌 图4弗氏链霉菌孢子丝

图5青色链霉菌 图6青色链霉菌孢子丝
【思考题】
1.镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及孢子丝？
答：气生菌丝直生或分枝丝状，较基内菌丝粗，是指从基质伸向空气中的菌丝体。菌类的菌丝体多是匍匐在基质上，或是贯通基质而伸长的，为了孢子的形成而生长气生菌丝。在一定条件下，水生菌类也可以生长气生菌丝。真菌和放线菌的营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外并伸向空间的菌丝称为气生菌丝。它叠生于营养菌丝上，以致可以覆盖整个菌落表面。在光学显微镜下，颜色较深，直径比营养菌丝粗，直形或弯曲，有的产生色素。在固体培养基上霉菌的菌丝分化为营养菌丝和气生菌丝。营养菌丝深入到培养基内吸收养料；气生菌丝向空中生长，有些气生菌丝发育到一定阶段分化成繁殖菌丝，产生孢子。

2.弗氏链霉菌和青色链霉菌的孢子丝有何区别？
答：青色链霉菌的孢子丝为螺旋形，而弗氏链霉菌的孢子丝为直线形。

附：高氏I号培养基（1000mL）
可溶性淀粉
20g
KNO3
1g
NaCl
0.5g
K2HPO4
0.5g
MgSO4
0.5g
FeSO4
0.01g
琼脂
20g
水
1000mL
pH
7.2~7.4