DB50∕T 948-2019 猕猴桃组培种苗生产技术规程.pdf

ICS 65.020.20 B 61 DB50 重庆市地方标准 DB50/T 9482019 猕猴桃组培种苗生产技术规程 Technical regulation for tissue culture seedlings of kiwifruit 2019 - 11 - 25 发布 2020 - 03 - 01 实施 重庆市市场监督管理局 发 布 DB50/ T 9482019 I 前 言 本标准依据GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由重庆市农业农村委员会提出并归口。 本标准起草单位：重庆文理学院、重庆市农业技术推广总站、重庆市天沛农业科技有限公司、重庆市幅沅众创农业开发有限公司 本标准起草人：唐建民、刘奕清、杨灿芳、廖钦洪、兰建彬、刘燃、张文林、黄科、陈泽雄、李会合、李洪海 DB50/ T 9482019 1 猕猴桃组培种苗生产技术规程 1 范围 本标准规定了重庆市猕猴桃组培种苗生产的术语和定义、 场地及设备、 组培苗生产过程中外植体的获得和处理、初代培养、继代培养、病原检测、生根培养、试管苗移植、组培苗定植、肥水管理、包装和运输等要求。 本标准适用于重庆市猕猴桃组培苗的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 19174 猕猴桃苗木 NY/T 974 柑橘苗木脱毒技术规范 3 术语和定义 3.1 组培苗 tissue culture seedlings 根据植物细胞的全能性，通过组织培养技术，将植物的体细胞、组织或器官进行离体培养，经过不同的细胞分化途径重建形成不同的器官，诱导培育出的完整植株。 3.2 外植体诱导 explants induction 生长健壮的无病虫的植株组织在诱导培养基进行植物细胞的再分化。 3.3 组培穴盘苗 plug plants 移栽在穴盘中培育的组培生根苗。 4 组培室及组培条件 4.1 接种室 主要用于植物材料的消毒和接种、培养物的继代培养等的场所。无尘、无对流空气的洁净环境。 4.2 培养室 培养试管苗的场所，保持清洁干净，内置多层培养架。 DB50/ T 9482019 2 温度根据猕猴桃品种、培养目的进行调控，一般保持在 25(2) ；光照强度根据种苗品种、培养目的进行调控，一般在 1500-3000 lx，每天光照时间 12-14 h。 4.3 主要仪器设备 高压灭菌锅、超净工作台、PCR仪、万分之一电子天平、纯水仪、空调、冰箱、pH计、摇床及烧杯、培养皿、三角瓶、量筒、容量瓶、手术刀、镊子、剪刀、接种针、酒精灯等设备。 4.4 温室 温度、湿度、土壤条件可调控的温室，进出温室门口设置消毒槽。 5 组织培养快繁技术 5.1 猕猴桃组培种苗规模化生产流程图（见附录 A） 5.2 母本园的选择 母本园必须是无病虫害的正常管理猕猴桃园。 5.3 母株的确定 选择品种纯正、农艺性状优良、生长健壮、无病虫害的枝条作为母株，并逐株编号及跟踪观察。 5.4 外植体选择 从具有典型性状的猕猴桃品种无病虫害苗木上选择幼芽作为建立组培快繁体系的外植体。 5.5 外植体处理 外植体取回后，用洗洁精溶液刷洗表面，移至超净工作台上，用 75% 的酒精消毒 15-30 秒，添加两滴 Tween-20 用消毒剂灭菌 8-12 min 后将材料取出，用无菌水冲洗 4-5 次。 5.6 外植体诱导 在超净工作台上，用灭菌手术刀、镊子将外植体均匀切分成大小约 0.5 cm-0.8 cm 的小段，接种于诱导培养基，插入深度 3 mm-4 mm，每瓶 10-15 段。培养温度 26（1） ，光照时间9 h,光照强度 1500 lx-2200 lx。培养周期 20 d-30 d。 5.7 继代培养 将诱导形成的单芽转入继代培养基，芽高 0.5 cm-1.5 cm,茎粗 1.0 mm-3.0 mm。 培养温度26（1） ，光照时间 9 h,光照强度 1500 lx-2200 lx，培养周期 20 d-30 d。 5.8 继代材料的无菌检测 抽样方法参照NY/T 974 中6.2 分子生物学检测执行，丁香假单胞菌病原采用特异引物：F， 5-CAGCAGAACCCGCGCCTGATCCAG-3；R，5-ATCGGACTTGATGCGCAGGCCGTT-3检测，检测不合格材料及时灭菌清除。 5.9 生根培养 DB50/ T 9482019 3 将检测合格的扩繁不定芽（高 2.0 cm、茎粗 2.0 mm- 3.0 mm）接种于生根培养基中，插入深度 3.0 mm-4.0 mm。 培养温度25（1） ，光照时间 9 h,光照强度 1500 lx-2200 lx，培养周期 10 d -15 d，一般根长 1-2 cm，根健壮，每株有根 4-5 条，生根率达 95% 以上。 5.10 驯化移栽 5.10.1 驯化炼苗 出苗前，将猕猴桃瓶苗移放置于遮光率为 65%-80% 的温棚或荫棚下，常温炼苗 10 d，生根苗叶色变浓，加厚。 5.10.2 移栽及基质 用清水冲洗根系上的培养基，放进稀释 2000 倍的多菌灵、百菌清等杀菌剂溶液中 1-2 分钟，取出并放进塑料筐中，在苗床上排放整齐，适时浇水；幼苗保持 60%-70% 的湿度。 泥炭和珍珠岩（V:V= 7:3）的混合物作猕猴桃组培苗的移栽基质，穴盘苗生长健壮快速，成活率达 98% 以上，基质符合LY/T 1000要求。 5.11 穴盘苗移栽与管理 5.11.1 肥水管理 猕猴桃试管苗移栽的前 10 d 每天喷水 3次-4次， 之后适量减少喷水次数。 移植培养7 d 后用 0.5% 复合肥（N:P:K15:15:15）喷雾，每隔 7 d 浇施 1 次，连续施用 3 次，植株生长旺盛。夏季灌水1次-2次/周，土壤含水量维持在70%-80%，pH维持在 5.5-7.0。生长季节培养 50 d-60 d 即可出圃。 5.11.2 病虫防治 幼苗期喷 3次-4次杀菌剂和杀虫剂防治根腐病、立枯病、炭疽病和溃疡病与螨类、鳞翅目类虫害。严格控制人员进出温、网室，对进入人员进行严格消毒。 6 苗木出圃 苗木出圃前按GB 19174中6.1规定进行产地检疫。起苗前充分灌水、抹去幼嫩新芽、剪除幼苗基部多余分枝、 喷药防治病虫害，苗木出圃时要清理并核对品种标签。 苗木出圃后，及时将品种、出圃时间、出圃数量、定植去向、发苗人和接收人签字，入档保存。 DB50/ T 9482019 4 A A 附 录 A （资料性附录） 猕猴桃组培种苗规模化生产过程 母本选择无菌体系建立不定芽增殖诱导初代培养生根培养炼苗移栽穴盘苗培育包装、运输继代培养组培条件优化温室条件优化继代苗病原检测 _