药分实验计划.doc

实验一 葡萄糖的一般杂质检查
一、实验要求
1．掌握一般杂质检查的项目及杂质限量计算方法。
2．掌握一般杂质检查的原理和方法。
二、实验原理
1．酸碱度检查
是指用药典规定的方法对药物中的酸度、碱度及酸碱度等酸碱性杂质进行检查。检查时应以新沸并放冷至室温的水为溶剂。不溶于水的药物，可用中性乙醇等有机溶剂溶解。常用的方法有酸碱滴定法，指示剂法以及pH值测定法。
2．氯化物检查
是指药物中微量氯化物在硝酸溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊相比较，以判断供试品中氯化物的限量
Cl-+AgNO3→AgCl↓
3．硫酸盐检查
是指药物中微量硫酸盐与氯化钡试液在酸性溶液中作用生成的白色浑浊液，与一定量的标准硫酸钾溶液与氯化钡试液在相同的条件下生成的浑浊比较，以判断供试品中硫酸盐的限量。
SO+BaCI2→BaSO4↓
4．铁盐检查
是指药物中三价铁盐在酸性溶液中与硫氰酸盐试液生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量的标准铁溶液，用同法处理后进行比色，以判断供试品中三价铁盐的限量。
Fe3++6SCN-→[Fe (SCN) 6]3-
5．重金属检查
是指重金属（以铅为代表）在弱酸性（pH3~3.5）溶液中与硫代乙酰胺或硫化钠作用，生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量的标准铅溶液经同法处理后的颜色比较，以控制药品中重金属含量。
CH3CSNH2→CH3CONH2+H2S
Pb2++H2S→PbS↓
三、实验步骤
(一)标准溶液的配制
1.标准氯化钠溶液的制备
称取氯化钠0.165g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml置100ml瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10μg的Cl)。
2.标准硫酸钾溶液的制备
称取硫酸钾0.18lg，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于100μg的SO4)。
3.标准铁溶液的制备
称取硫酸铁铵 [FeNH4(SO4)2·12H2O] 0.863g,置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。
临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10μg的Fe)。
4.标准铅溶液的制备
称取硝酸铅0.160 g，置于1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。
临用前精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10μg的Pb)。
配制与贮存用的玻璃容器均不得含有铅。
其他试液：
氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）
稀硝酸
硝酸银试液
稀盐酸
25%的氯化钡溶液
硫氰酸铵溶液（30→100）
醋酸盐缓冲液（pH3.5）
硫代乙酰胺试液
(二) 实验内容
1．酸度
取本品2g，加新沸过的冷水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.2ml，应显粉红色。
2．氯化物
取本品0.60g，加水溶解使成25ml（溶解加显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液（10μgCl-/ml）6.0ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，供试溶液不得比对照液更浓（0.01%）。
3．硫酸盐
取本品2.0g，加水溶解使成约40ml（溶液如显碱性，可滴加盐酸使成中性）；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml、摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液（100μgSO42-/ml）2.0ml，置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液，于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%的氯化钡溶液5ml，用水稀释成50ml，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，供试溶液不得比对照溶液更浓（0.01%）。
4．铁盐
取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45ml，加硫氰酸铵溶液（30→100）3ml，摇匀，如显色、与标准铁溶液2.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。
5．重金属
取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液（10ug pb/ml）2ml，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，加水稀释成25ml。取本品4.0g置于乙管中，加水23ml溶解，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深（含重金属不得过百万分之五）。
四、注意事项
1．比色或比浊操作，均应在纳氏比色管中进行。选择比色管时，应注意样品管与标准管的体积相等，玻璃色质一致，管上刻度均匀，高低一致，如有差别，不得超过2mm。
2．样品液与对照品液的操作应遵循平行操作的原则，并应注意按操作顺序加入各种试剂。
3．比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀，然后将两管同置于黑色或白色背景上，自上而下观察。
五、问题与讨论
1．一般杂质检查的主要项目有哪些？
2．比色、比浊操作应遵循的原则是什么？
实验二 苯甲酸钠的含量测定
一、目的
掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的原理和操作
二、操作
取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水约25ml，乙醚50ml与甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液 (0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醚20ml，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1ml的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg的C7H5O2Na。
本品按干燥品计算，含C7H5O2Na不得少于99.0％
三、试剂
乙醚、甲基橙指示液、盐酸滴定液 (0.5mol/L)。
四、注意事项
1.苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。

在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(Pkb=9.80)突跃不明显，故加入与水不相溶混的溶剂乙醚提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。
2.滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层。
3.在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，应用乙醚检查分液漏斗是否严密。
四、思考题
1.乙醚为什么要分两次加入?第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点?为什么?
2.分取水层后乙醚层用5ml水洗涤的目的是什么?
实验三 葡萄糖注射液的鉴别和含量测定
一、实验目的
碘量法，旋光度法，折光法测定葡萄糖注射液的含量。
二、实验原理：
1．旋光法 本品为葡萄糖的灭菌水溶液。葡萄糖的分子结构中五个碳（C*）都是手性碳原子，具有旋光性。当直线偏振光通过该具有光学活性的化合物溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的平面向左或向右旋转。此种旋转在一定条件下，有一定的度数，称为旋光度。旋光度（α）与溶液的浓度（c）和偏振光透过溶液的厚度（l）成正比。当偏振光透过厚 1dm 并每 1ml 中含有旋光性物质 1g 的溶液时，在一定波长与温度下测定的旋光度称为比旋度。
[α]tD＝α/（l·c）。
式中D为钠光谱的D线（589.3nm），t为测定时的温度。葡萄糖的比旋度[α]25D＝+52.75º。所以测定待测葡萄糖溶液的旋光度即可求得其含量。
2．折光法 光线自一种透明介质进入另一透明介质的时候，由于两种介质的密度不同，光速发生变化，即发生折射现象。一般折光率系指光线在空气中的速度与在供试品中的速度之比值，用ntD表示。D为钠光谱的D线（589.3nm），t为测定时的温度。折光率与水溶液中溶质浓度的关系可用下式表示：
ntD＝ntD水+F·P
因此，P = (ntD－ntD水)/F
式中 P表示百分浓度，即100ml水溶液中含的溶质克数；ntD为供试液的折光率；ntD水为同温度时水的折光率；F为折光因素，即被测溶液浓度每增加1％时，其折光率的增长数。
20℃时，n20D水＝1.3330，葡萄糖的折光因素F＝0.00142，所以测定 20℃时供试液葡萄糖注射液的折光率就可求得其含量。
按下式计算100ml供试液中含有的C6H12O6·H2O的重量(g)，并计算标示量的百分含量。
100ml中C6H12O6·H2O的重量(g)＝(ntD－ntD水)／F＝[该供试液的折光率(ntD)－同温度时溶剂的折光率(ntD水)]／折光因素(F)
20℃时蒸馏水的ntD水＝1.3330；20℃时葡萄糖的折光因素 F=0.00142。
中国药典（2005）规定，本品含葡萄糖（C6H12O6·H2O）应为标示量的95.0%~105.0%
三、主要仪器设备：
折光仪、旋光仪、滴定管、玻璃仪器
碱性的酒石酸铜试液、氨试液、碘滴定液(0.1mol/L)、氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)、稀硫酸、硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)、中性乙醚
四、步骤：
1，鉴别：
取本品，缓缓滴入碱性的酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。
2.含量测定：
旋光法：
精密量取本品适量(约相当于葡萄糖10g)，置100ml量瓶中，加氨试液0.2ml（10%以下规格的可以直接取样测定），用水稀释至刻度，摇匀，静置10分钟，依法测定旋光度。与2.0852相乘。既得含量。
碘量法：
精密量取本品2ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。吸取5.00ml置碘量瓶中，准确加入碘滴定液(0.1mol/L)5ml，再分二次加入氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)，每次5ml，密塞，振摇约10秒种，加完后，密塞，于暗处放置10分钟，加稀硫酸1ml，用硫代硫酸钠滴定液棕色碱式滴定管，因为强还原性，弱碱性
(0.1mol/L)滴定，至2.88ml时，浅黄色不应消失，至3.09ml时，应为无色溶液。
折光法：
将折光计置于光线充足的台面上，与恒温水浴连接将折光计棱镜的温度调至 20±1℃，分开两面棱镜，用擦镜纸将镜面轻轻拂拭清洁后（或用擦镜纸蘸取中性乙醚轻拭镜面，乙醚挥干），在下面棱镜中央滴蒸馏水1~2滴，合闭棱镜，俟蒸馏水与棱镜的温度一致，转动分界调节螺旋，使标尺读数为1.3330，再旋转调节补偿棱镜的螺旋，消除虹彩使明暗分界线清晰，然后用小钥匙插入观察镜的筒旁小孔内的螺钉上，轻轻转动，直到阴暗线恰好移到十字交叉线的交叉点上，此时折光计的零点调节完毕，再分开两面棱镜，用擦镜纸将镜面轻轻拭洁净后，在下面棱镜中央滴供试液（5％葡萄糖注射液）1~2 滴，合闭棱镜，俟供试液与棱镜的温度一致，旋转调节补偿棱镜的螺旋，清除彩虹使阴暗分界线清晰，再转动分界调节螺旋，使明暗交界线对准在十字交叉线的交叉点上，根据标尺刻度记录读数，读数应精确至小数点后第四位（最后一位为估计数字），轮流从一边再从另一边将分界线对准在十字交叉线上，重复观察及记录读数三次，读数间的差数不应大于0.0003，所得读数的平均值，即为供试品的折光率。
五、实验中注意事项：
旋光法：
1、WZZ-1自动指示旋光仪操作方法(每次测定前应以溶剂作空白校正；示数盘上红色示值为左旋(一)，黑色示值为右旋(+)；配制溶液及测定时，均应调节温度至20℃±0.5℃ (或各药品项下规定的温度)。
2、配制供试液后，要静置10分钟。供试液测定时的温度必须调节至25℃。
3、测定管两端的圆玻片，为光学玻璃片，测定前应小心用软纸擦试，以防磨损。
4、测定管洗净后，应用供试液荡涤数次，以确保浓度一致。
5、供试液应缓缓加入，不能有气泡。
实验四 硫酸阿托品片的含量测定
一、目的
1.掌握酸性染料比色法的基本原理和操作。
2.掌握比色法的基本方法，要求和计算。
二、药品和试剂
硫酸阿托品对照品，硫酸阿托品片、氯仿、溴甲酚绿溶液（溴甲酚氯、邻苯二甲酸氢钾）
二、实验内容
1.对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含无水硫酸阿托品50μg)。
2.供试品溶液的制备
取本品20片，精密称定、研细，精密称出适量(约相当于硫酸阿托品2.5mg)，置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释至刻度，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。
3.测定法
精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置于预先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液 [取溴甲酚氯50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g，加氢氧化钠液(0.2mol/L)6.0ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过] 2.0ml，振摇提取2分钟后，静置使分层，分取澄清的氯仿液，置1cm吸收池中，在420nm的滤长处分别测定吸收度，计算，并将结果与1.027相乘，即得供试量中硫酸阿托品(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重量。
本品含硫酸阿托品[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]应为标示量的90.0～110.0％。
三、说明
1. 硫酸阿托品的结构：

2.本实验采用酸性染料比色法测定硫酸阿托品含量，实验中应严格控制水相pH并保证离子对化合物能定量提取进入氯仿层。
3.分液漏斗活塞处宜涂甘油淀粉作润滑剂，其配制方法是：取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，混匀，加热至140℃，保持30分钟，并不断搅拌至透明，放冷，即得。
4.振摇提取时既要能定量地将离子对化合物提入氯仿层，又要防止乳化和少量水份不混入氯仿层，因此，需小心充分振摇，并使静置分层后再分取氯仿层，同时可在分液漏斗颈部放置少许脱脂棉以吸附氯仿中少量水份。
四、思考题
1.试述酸性染料比色法的原理。
2.酸性染料比色法的主要条件有哪些? 结合实验说明如何控制这些条件。
3.应如何作空白试验?
4.校正因子1.027是怎样算得的?
实验五 维生素B1片的分析
一、目的
1.掌握维B1鉴别反应的原理和方法；
2.掌握紫外分光光度法测定药物含量的原理和方法。
二、实验内容
(一) 鉴别
取本品的细粉适量，加水搅拌，滤过，滤液蒸干。
(1)取残渣约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml溶解后，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2分钟，放置使分层，上面的醇层显强烈的蓝色荧光；加酸使成酸性，荧光即消失；再加碱使成碱性，荧光又显出。
(2)取残渣少许，加水溶解，加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成。
(3)取残渣少许，置试管中、加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。
(二)含量测定
直接紫外法
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于维生素B1 25mg)，置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9→1000ml)约70ml，振摇15分钟使维生素B1溶解，加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS·HCl的吸收系数(E)为421计算，即得。
本品含维生素B1(C12H17ClN4OS·HCl)应为标示量的90.0～110.0％。
差示分光光度法
1. 目的要求
1.1. 掌握差示分光光度法原理
1.2. 熟悉差示分光光度法的基本测定方法
2. 基本原理
差示分光光度法(Difference Spectrophotometry)：简称ΔA法。取两份相等的供试液，一份加酸，另一份加碱或缓冲液或其他能够发生某种化学反应的试剂，有时也可不加任何溶液，然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差值（ΔA值），在供试溶液的一定浓度范围内，ΔA值与浓度C之间呈线性关系。优点：在不同pH介质中，或经适当化学反应后，供试物发生了特征性的光谱变化，而赋形剂或其他共存物质不受pH条件或化学试剂的影响，未引起光谱变化，从而消除了它们的干扰。同时，参比池与样品池中含有相同浓度的供试物与干扰物，这就为吸收度的测量提供了一个近似理想的参比溶液。
3. 实验操作
3.1. 测定波长的选择
精密称取维生素B1100mg，用水溶解并稀释成100.0mL。精密量取2.0mL二份，分别用缓冲液（PH7.0）和盐酸液（PH2.0）稀释成100.0mL（浓度为0.002%），以相应溶剂为空白，测定紫外吸收光谱。再将前者放于参比池，后者放于样品池，绘制差示吸收光谱，在247nm有最大差示吸收值ΔA，根据标准曲线计算待测组分的含量。
3.2. 标准曲线的绘制
精密称取干燥至恒重的维生素B1100mg，用水溶解并稀释成100.0mL，作为贮备液。精密量取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL贮备液各两份，分别置100 mL容量瓶中，一份用缓冲液稀释至刻度，另一份用盐酸液稀释至刻度，摇匀。取上述五组浓度相同，PH值不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值，以浓度C为横坐标，以差示吸收值为纵坐标绘制标准曲线。
3.3. 样品测定
取本品20片，研细，精密称取适量粉末（约相当于维生素B150mg），置50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0mL二份，分别置100 mL容量瓶中一份用缓冲液稀释至刻度，另一份用盐酸液稀释至刻度，摇匀。将前者放于参比池，后者放于样品池，在247nm测其差示吸收值ΔA，由标准曲线求得维生素B1浓度，计算片剂含量（标示量%）。
三、思考题
1.试简述以上维生素B1鉴别反应的原理。
2.试简述吸收系数测定药物含量的特点和一般方法。
3.如何计算供试品中维生素B1的含量。
实验六 醋酸可的松中其它甾体的检查（薄层）
一、实验要求
1．了解醋酸可的松中的特殊杂质来源及其检查意义。
2．掌握薄层色谱法检查特殊杂质的操作方法。
二、实验原理
甾体激素类药物多是由甾体化合物经结构改造而来，因而可能带来未反应完的原料、中间体、异构体、降解产物、试剂和溶剂等杂质。甾体化合物通常要作“其它甾体”的检查，“其它甾体”是药物中存在的具有甾体结构的其它物质。如合成用的原料、中间体、副产物及降解产物等。由于其它甾体和药物的结构相似，一般采用色谱方法检查，如薄层色谱法、高效液相色谱法等。如醋酸可的松中其它甾体的检查可采用薄层色谱方法。
在醋酸可的松的化学结构中，由于C17位的α-醇酮基（-CO-CH3OH）具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑定量地还原为有色甲臢，生成的颜色随所用的试剂和条件而不同，多为红色或兰色。
三、实验步聚
1．薄层板的制备
取薄层用硅胶G4g，按1∶3（W∶V）比例加0.5%的羧甲基纤维素钠的上清液，研磨均匀，铺于两块5×20cm规格的玻璃板上，于室温下，置水平台上晾干，在110℃烘半小时，取出，置干燥器中备用。
2．供试溶液和对照溶液的制备
取醋酸可的松适量，加氯仿-甲醇（9∶1）制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取以上溶液适量，加氯仿-甲醇（9∶1）稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。
3．薄层层析
照薄层色谱法（中国药典1990年版附录30页）试验，吸取上述供试溶液和对照溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷10ml-乙醚-甲醇-水（385∶60∶15∶2）为展开剂，展开后，晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。
四、注意事项
1．点样量不准，则检查结果不可靠。点样可用10μl微量注射器一次吸取5μl供试液（或对照溶液），分少量多次点于同一原点处，以免原点过于扩散。
2．展开过程中，层析缸应密封良好，否则展开剂易挥发，使Rf值增大。展开距离一般为10~15cm。
3．显色液碱性四氮唑蓝试液应在喷雾前临时配制（取0.2%的四氮唑蓝的甲醇溶液10ml与12%氢氧化钠的甲醇溶液30ml，临用时混合，即得），新鲜配制的溶液应呈黄色，如颜色变深，则不宜使用。
五、问题与讨论
1．什么是“其它甾体”？为什么要对其进行检查？
2．甾体激素结构中的何种基团可与四氮唑蓝产生反应？
3．按本实验的操作方法，计算醋酸可的松中“其它甾体”的限量。
实验七 药物的特殊杂质检查
一、实验要求
1．熟悉某些药物中的特殊杂质。
2．掌握特殊杂质检查的几种主要方法及操作。
二、实验原理及操作步骤
1．阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查
（1）方法原理
乙酰水杨酸属芳酸酯类药物，在生产和贮存过程中均会产生水杨酸。水杨酸对人体有毒。应对其进行限度检查。其检查原理是利用水杨酸具有酚羟基，可与高铁盐溶液作用形成紫蓝色，而乙酰水杨酸因无酚羟基，不呈此反应。

（2）操作步骤
取本品5片，研细，用乙醇30ml分次研磨，并移入100ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤过，精密量取续滤液2ml，置50ml纳氏比色管中，用水稀释至50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1ml/L盐酸溶液1ml，加硫酸铁铵指示液2ml后，再加水适量使成100ml）3ml，摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5ml，加乙醇3ml、0.05%酒石酸溶液1ml，用水稀释至50ml，再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液3ml，摇匀）比较，不得更深（1.5%）
2．肾上腺素中酮体的检查
（1）方法原理
肾上腺素是由肾上腺酮经氢化还原制成。若氢化不完全，可能引进酮体杂质，所以药典规定应检查酮体。其检查原理是利用酮体杂质在310nm波长处有最大吸收，而肾上腺素药物本身在此波长处几乎没有吸收。根据杂质的吸光度，可控制肾上腺素中酮体的限量。
（2）测定方法
取本品，加盐酸溶液（9→2000）制成每1ml中含2.0mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版附录22~23页），在310nm的波长处测定，吸光度不得过0.05。
三、注意事项
1．进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH4~6）中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会分解褪色。
2．测定吸光度时，应注意吸收峰波长位置的准确性，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±1nm以内。
四、问题与讨论
1．特殊杂质检查的常用方法有哪些？
2．利用紫外-可见分光光度法检查杂质有何优点？
3．薄层色谱法检查杂质常用的方法有哪几种？其结果如何判断？