药理学实验基本技能.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,药理学实验基本知识,药理教研室,实验要求,（一）实验课前,1,、仔细阅读实验指导，了解实验目的、要求、步骤及注意事项。,2,、复习相关理论知识，充分理解实验的原理和意义。,3,、预测实验结果，写好预习报告。,（二）实验课中,1,、穿白大褂，带学生证领实验器材、药品。,2,、分工合作，积极参与实验操作、观察、记录。,3,、节约试剂和药品，爱护实验器材，如出现故障，及时请示老师。,4,、严格控制时间，保证在规定的课时内完成实验任务。,（三）实验课后,1,、清洗，整理实验用品。,2,、值日,3,、整理实验记录，写好实验报告。,药理实验学的基本原理,为了解生命的某些规律,必须设计并进行特定的实验，对结果进行分析总结,从而作出正确的判断。,可见，实验的三个基本要素是,（,1,）符合条件的动物或标本（实验对象）,（,2,）作用于实验对象的某些实验条件（实验因素）,（,3,）实验对象的某些生命活动的变化（实验效应或指标）,实验报告的书写,1,、实验名称,2,、实验目的,3,、实验动物,4,、实验步骤,5,、实验结果,6,、讨论、结论,常用实验动物,一、实验动物的定义,实验动物（,laboratory animal,）是根据科学研究需要在实验室条件下有目的、有计划进行人工驯养，繁殖和科学培育而获得的动物。,如,转基因动物,二、实验用动物,泛指一切用于实验的动物，这是一个广义的概念，其中包括要求严格的实验动物，还包括家畜、野生动物和观赏动物等。,常用实验动物的特点及应用,一、青蛙和蟾蜍（,frog v hoptoad,）,（一）生物学特性,两栖类变温动物，有两个心房、一个心室，房室区分不明显。蟾蜍背部有许多突起毒腺，分泌毒素。,（二）在生物科学研究中的应用,1.,药物对心脏的灌流实验。,2.,药物对神经、肌肉、神经,-,肌接头的影响。,常用于：,蛙心灌流,坐骨神经,-,腓肠肌标本,坐骨神经,-,缝匠肌标本,不同灌流液对心肌收缩的影响,二、实验小鼠,(mice),（一）生物学特性,一般特性：,1.,对外界环境反应敏感，适应性差，强光或噪声刺激时，可能导致哺乳母鼠神经紊乱，发生食仔现象。温度过高或过低时，生殖能力下降，严重时会发生死亡；,2.,对多种毒素和病原体易感，百万分之一的破伤风毒素能使小鼠死亡；,3.,对致癌物敏感，自发性肿瘤多。,(,二,),生物医学中的应用,1,、药物学研究和毒性试验,(1),药物筛选试验,:,小鼠常用于药物对疾病疗效筛选试验,如抗肿瘤药物,抗结核药物,抗疟疾药物等的筛选。,(2),药效及其副作用研究,:,如：利用声源性惊厥小鼠来评价抗痉挛药物,:,利用小鼠角膜和耳廓反射评价镇定药物。,(3),毒性试验和安全分析,如：用于铅、苯、汞、矽、一氧化碳等职业性中毒的急性、亚急性和慢性毒性试验以及半致死量测定。,2.,肿瘤学研究,(1),近交系小鼠自发性肿瘤研究,如,AKR,小鼠白血病发生率可达,90,C3H,小鼠乳腺癌发病率达,97,。而,C57BL,小鼠乳腺癌发病率极低。,（,2,）小鼠对致癌物质、射线及某些病毒敏感，进行肿瘤模型的复制。,感染小鼠白血病病毒可诱发白血病；感染人类腺病毒可诱发小鼠肉瘤及淋巴瘤。,移植性肿瘤模型：,将各种实体瘤、腹水瘤、白血病等一定数量的瘤细胞或无细胞的滤液（病毒性肿瘤）接种于相关品系的小鼠，就可以使该品系的一群小鼠带有相同的肿瘤，这种肿瘤模型经常用在筛选抗肿瘤新药的研究。,(3),免疫缺陷小鼠在肿瘤研究中应用。,裸小鼠是一种,11,号染色体上隐性裸基因,(nu),发生突变的小鼠。其生理特征为无胸腺、缺少,T,细胞、,B,细胞虽存在但功能缺损,属于免疫缺陷小鼠,可进行异体肿瘤移植。,3.,免疫学研究,:,免疫缺陷小鼠应用,如,:,进行爱滋病、红斑狼疮相关研究。,4.,传染性疾病研究,:,小鼠对多种病原体特别是病毒极为敏感,如,流感、脑炎、血吸虫病,5.,遗传学和遗传性疾病的研究：如,:,糖尿病肥胖、遗传性贫血,转基因小鼠,研究导入基因的作用。,6.,老年病学的研究：,小鼠寿命短,传代时间短,随着鼠龄的增加,机体内的一些生理生化指标不断发生变化,特别是高龄鼠中老年病明显增多,是老年学研究的极好材料。多用于糖质、脂质、胶原和免疫等方面的研究。,7.,计划生育研究：,小鼠繁殖力强,性周期和妊娠期短,生长快,适合计划生育研究。如常用小鼠做抗生育、抗着床、抗早孕、抗排卵等实验应用上的首选动物。,8.,不宜采用小鼠制作动物模型的实验研究：,(1),研究体温变化的试验,因为小鼠体温变化不稳定；,(2),慢性支气管炎的试验,因为小鼠气管及支气管腺不发达；,(3),催吐试验,因为小鼠无呕吐反应,;,(4),动脉粥样硬化试验,因为小鼠不形成动脉粥样硬化。,三、大鼠（,rat,）,（一）生物学特性,一般特性：,1.,对营养缺乏非常敏感，特别是维生素,A,和氨基酸供应不足时，可发生典型的缺乏症状。,2.,大鼠不能呕吐。,3.,对外部环境反应敏感。,（,二）解剖学特点,1.,肝脏共分,6,叶，再生能力强，部分切除术后仍可再生。,2.,无胆囊。,3.,心脏的血液供给既来自冠状动脉，也来自冠状外动脉。,4.,无扁桃体。,5.,眼角膜无血管，有棕色脂肪组织。,3.,药物学研究（,1,）药物毒理学试验急性、亚急性、慢性毒性试验、生殖毒性试验和药物依赖试验等,;“,三致”试验研究。（,2,）药物药效研究,副交感神经效应器接点的药物研究时，首选大鼠。,SHR,大鼠研究高血压药物的极好模型。,抗炎药物药效评价，大鼠踝关节对炎症反应敏感。,4.,肿瘤研究：具有较高的肿瘤自发率，易研究癌变机理。如，肝癌、肺癌、白血病。,5.,遗传疾病研究：具有自发性遗传疾病，如白内障、尿崩症、肥胖、高血压等。,6.,传染病研究：多种病原体可使大鼠产生与人相似的疾病，如，慢性支气管炎，病毒性肝炎，血吸虫病，钩虫病等。,7.,口腔医学研究：大鼠牙齿上的珐琅质蛀损在宏观和微观上同人的蛀齿相似，可用来研究龋齿。,8.,环境污染与人类健康的研究：大鼠对空气污染非常敏感，重金属污染也可导致大鼠的病理改变，常作为这方面研究的动物模型。,9.,不宜采用大鼠制作动物模型的实验研究：,研究体温变化的试验,因为大鼠体温变化不稳定；,慢性支气管炎的试验,因为大鼠气管及支气管腺不发达；,催吐试验,因为大鼠无呕吐反应；,胆囊功能试验,因为大鼠无胆囊。,四、豚鼠,（一）生物学特性,1.,豚鼠对外界刺激极为敏感。听觉发达、易惊,-,怕噪音；短被毛紧贴皮肤,-,怕高温、高湿；喜活动、爱群居,-,不宜单笼饲养。,3.,胃壁簿，盲肠发达。,4.,晚成动物，孕期比大、小鼠长，产仔少，所以品系少。,5.,自身不能合成维生素,C,。,6.,自动调节体温能力较差。,7.,易引起变态反应，产生大量补体。染色体为,32,对。,（二）生物医学中的应用,1.,药物学研究：,妊娠期长，适用于药物或毒物对胎儿后期发育影响的试验；,豚鼠对多种抗生素类药物非常敏感，是研究抗生素和青霉素的动物模型。,豚鼠还可用于研究麻醉药及镇咳药的药效实验。,2.,免疫学研究：豚鼠血清是所有实验动物中补体含量最多的一种,是过敏性休克和变态反应研究的首选动物。,3.,传染病研究：对多种病原体敏感，用于病原的分离、鉴别、诊断，尤其对结核杆菌高度敏感，幼龄豚鼠经常用于支原体感染后的病理和细胞免疫的研究。,3.,营养学研究：体内不能合成维生素,C,，对其缺乏十分敏感，是研究实验性坏血病和维生素,C,生理功能的理想动物模型。,4.,耳科学研究：听神经对声波特别是,700,2000Hz,的纯音最敏感，常用于听觉和内耳疾病的研究。,5.,肺水肿研究：切断颈部两侧迷走神经可引起肺水肿,复制典型的急性肺水肿模型,适于观察出血和血管通透性变化实验,6.,不宜采用豚鼠做动物模型的研究（,1,）急性实验。因为豚鼠易感染，皮肤厚，不宜注射，血管神经不易分离；（,2,）慢性支气管炎症实验。因为豚鼠气管、支气管腺体不发达；（,3,）呕吐实验。因为豚鼠呕吐反应不敏感。,五,.,家兔,（一）生物学特性,1.,性情温顺，群居性差。,2.,家兔喜干怕热,3.,有食粪特性,4.,兔的胸腔构造与其它动物不同，纵隔将胸腔分左右两室，互不相通。暴露心脏时，不需人工呼吸。,5.,在回盲处有特有的圆小囊。囊壁富有淋巴滤泡，其粘膜不断分泌碱性液体，可以中和盲肠中微生物分解纤维素所产生的各种有机酸，有利于消化吸收。,6.,属恒温动物，正常体温在,38.5,39.5,之间，对致热物质反应敏感，适于用作热源实验。,7.,兔是反射性排卵的动物，生育年龄,5,6,年。平均寿命,8,年。,8.,有特殊的血型和唾液型。染色体,22,对。,（二）在生物学中的应用,1.,免疫学研究：,生产抗体，制备高效价和特异性强的免疫血清。,2.,生殖生理和避孕药研究：家兔属刺激性排卵，可用于避孕药和生殖生理研究。,3.,发热、解热和检查致热源研究：产生热源反应，体温反应灵敏而恒定。用于各类制剂的热源质检及发热解热机制研究。,4.,眼科研究：家兔眼球大，几乎成圆形，便于进行手术操作和观察，也常用于眼科药物筛选和疗效研究。,5.,皮肤反应试验：,兔对刺激反应敏感，反应近似于人，常用兔作为毒物、药物、化妆品等对皮肤局部作用的研究。,6.,胆固醇代谢和动脉粥样硬化症研究：兔对致病胆固醇的敏感性高，成型快。家兔模型的病变与人类基本相似。,7.,急性动物试验常用兔做失血性休克、肠毒素引起的休克、微血管缝合、阻塞性黄疸等急性试验。,8.,其他方面：常利用兔进行各种寄生虫病、畸形学的研究，生理学课程常采用家兔作为实验动物。,9.,不宜用兔作为动物模型的研究：,（,1,）观察呕吐的试验,因为兔对呕吐反应不敏感,（,2,）放射病试验,因为兔对射线非常敏感，射线照射后，常发生休克或死亡；,（,3,）咳嗽试验,因为兔缺乏咳嗽反射；,（,4,）甲状旁腺切除术,因为兔的甲状旁腺分布分散，位置不固定。,常用实验器材及手术器械,一、常用实验器材仪器,换能器,:,即“传感器”,是一种能将机械能、化学能、光能等非电信号转换为电信号的器件或装置。,换能器,常用的换能器有：,1.,机械,电换能器,(,张力换能器,),：此换能器主要用于描 记肌肉、心脏活动、平滑肌活动、呼吸活动等位移和张力实验。,2.,电压换能器,(,压力换能器,),：主要用于测定血压左心室内压的实验。血压换能器能将血压的压力变化转换为电流。,3.,呼吸换能器,:,可以测呼吸波,(,阻抗；热敏电阻,);,也可测呼吸流量。,期前收缩和代偿间隙,（二）刺激电极,普通电极 刺激离体的组织时常用，电极的金属丝装嵌在绝缘的有机玻璃套内，前端裸露少许金属丝，用以接触组织。,保护电极 刺激组织时，避免电流刺激周围组织，需用保护电极。电极的金属丝包埋在绝缘套内，前端有一凹槽露出电极丝用于刺激组织。,乏极化电极 常用的乏极化电极有银氯化银电极、锌硫酸锌电极和汞氯化汞电极。,（三）其它仪器,脑立体定位仪,(Stereotaxic),精确定位脑组织和脊髓组织的部位,Morris,水迷宫（,Animal Behavior Monitor System,）,DSI,植入式生理信号遥测系统：检测信号包括，,1.,压力信号，,2.,心电信号,3.,肌电信号,4.,神经电信号,5.,呼吸信号,6.,体温信号,7.,生理活动,二、常用手术器械,常用器械及操作,第三章 常用仪器和设备,第一节,BL-420,生物机能实验系统,（,a,）,BL-420E+,系统 （,b,）,BL-420F,系统,BL-420,生物机能实验系统,第二节,BI-2000,微循环图像分析系统,第三节,MedLab,生物信号采集处理系统,(,一,),按原始信号的性质分类,1.,电信号：心电、神经放电、神经干动作电位、脑电。,生物信号类型,2.,非电信号：骨骼肌张力、血压、骨骼肌张力、血压、呼吸道压力、心肌收缩力、肠肌张力等。,（二）按信号快慢分类,1.,快信号：神经干动作电位、心室肌动作电位、神经放电等。,2.,慢信号：血压、呼吸、心电、平滑肌张力等。,生物信号采集、处理结果,第四章 动物实验基本操作技术,一、实验动物的编号,二、注射器的使用,三、家兔的基本实验操作,1.,抓取、口服、灌胃、注射,2.,家兔耳缘静脉采血,4.,家兔动脉插管,5.,家兔气管插管,6.,家兔膀胱插管,1.,小鼠的抓取、灌胃、注射,四、鼠,2.,大鼠的抓取和注射,五、狗的抓取，口腹，灌胃，注射,六、猫的脑部手术,去大脑僵直,七、动物雌雄辨别,八、常用实验动物的基本操作常用实验动物的基本操作,2,资料可以编辑修改使用,学习愉快！,课件仅供参考哦，,实际情况要实际分析哈！,感谢您的观看,