新生儿溶血的检测专家讲座.pptx

复习复习n n新生儿溶血病机制n nABO-HDN特点n nRh-HDN特点n n临床表现新生儿溶血的检测第1页病理生理病理生理 Rh溶血溶血 ABO溶血溶血胎儿红细胞溶血重胎儿红细胞溶血重心力衰竭心力衰竭髓外造血髓外造血肝脾肿大肝脾肿大胎儿全身水肿胎儿全身水肿低蛋白血症低蛋白血症胎儿重度贫血胎儿重度贫血胎儿血中胆红素胎儿血中胆红素新生儿黄疸新生儿黄疸母亲肝脏母亲肝脏 胎盘胎盘娩出时黄疸不显著娩出时黄疸不显著 新生儿处理胆红素新生儿处理胆红素血清血清UCB过过高高胆红素脑病胆红素脑病 血脑屏障血脑屏障 胎儿红细胞溶血轻胎儿红细胞溶血轻新生儿溶血的检测第2页新生儿溶血的检测第3页新生儿溶血的检测第4页新生儿溶血的检测第5页新生儿溶血病血清学检验 经过血清学检验可了解：经过血清学检验可了解：经过血清学检验可了解：经过血清学检验可了解：母婴血型是否不合母婴血型是否不合母婴血型是否不合母婴血型是否不合、母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应IgGIgGIgGIgG性质抗性质抗性质抗性质抗体及效价体及效价体及效价体及效价、患儿红细胞是否被来自母亲患儿红细胞是否被来自母亲患儿红细胞是否被来自母亲患儿红细胞是否被来自母亲IgGIgGIgGIgG抗体所抗体所抗体所抗体所致敏致敏致敏致敏，从而对新生儿溶血病进行预防诊疗和治疗。从而对新生儿溶血病进行预防诊疗和治疗。从而对新生儿溶血病进行预防诊疗和治疗。从而对新生儿溶血病进行预防诊疗和治疗。血型血清学检验对新生儿溶血病诊疗、血型血清学检验对新生儿溶血病诊疗、预防和治疗有主要意义预防和治疗有主要意义新生儿溶血的检测第6页产前检验 孕妇血样本检验孕妇血样本检验孕妇血样本检验孕妇血样本检验(产前检验产前检验产前检验产前检验)是孕妇血液常规进是孕妇血液常规进是孕妇血液常规进是孕妇血液常规进行产前检验，用以判定这些孕妇妊娠患新生儿行产前检验，用以判定这些孕妇妊娠患新生儿行产前检验，用以判定这些孕妇妊娠患新生儿行产前检验，用以判定这些孕妇妊娠患新生儿溶血病胎儿危险，一旦被判定有此危险时，定溶血病胎儿危险，一旦被判定有此危险时，定溶血病胎儿危险，一旦被判定有此危险时，定溶血病胎儿危险，一旦被判定有此危险时，定时过筛试验可用于确定影响程度。时过筛试验可用于确定影响程度。时过筛试验可用于确定影响程度。时过筛试验可用于确定影响程度。新生儿溶血的检测第7页产前新生儿溶血病预测产前新生儿溶血病预测n n产前免疫血液学检验n n羊水检测n n其它检验n nIgGIgG分型分型n nB B超、胎心等超、胎心等新生儿溶血的检测第8页产前免疫血液学检验内容产前免疫血液学检验内容n n孕产史与输血史n n夫妇血型n nIgG不规则抗体新生儿溶血的检测第9页孕产输血史影响孕产输血史影响无输血孕无输血孕产史产史1 15 5次输次输血孕产史血孕产史5 5次以上输次以上输血孕产史血孕产史统计人数统计人数323274741919检出抗体检出抗体*人数人数0 013136 6检出抗体检出抗体占总数占总数0 017.517.531.531.5抗体*：有临床意义不规则抗体数据来自Transfusion 1984 Nov-Dec;24(6):482-5.新生儿溶血的检测第10页妻子血型妻子血型妻子血型妻子血型丈夫配合血型丈夫配合血型丈夫配合血型丈夫配合血型丈夫不配合血型丈夫不配合血型丈夫不配合血型丈夫不配合血型O O O OO O O OA A A A、B B B B、AB AB AB ABA A A AO O O O、A A A AB B B B、AB AB AB ABB B B BO O O O、B B B BA A A A、ABABABABABABABABO O O O、A A A A、B B B B、AB AB AB AB/RhD+RhD+RhD+RhD+RhD-RhD-RhD-RhD-RhD-RhD-RhD-RhD-/RhDRhDRhDRhDRhD-RhD-RhD-RhD-RhD+RhD+RhD+RhD+孕妇血样本检验1 1、血型判定、血型判定：包含夫妇：包含夫妇ABOABO、RhRh血型血型。新生儿溶血的检测第11页孕妇血样本检验2 2 2 2、抗体筛选和判定、抗体筛选和判定、抗体筛选和判定、抗体筛选和判定 取母亲血清与筛选红细胞作取母亲血清与筛选红细胞作取母亲血清与筛选红细胞作取母亲血清与筛选红细胞作抗体筛选试验抗体筛选试验抗体筛选试验抗体筛选试验 。假如该试验阳性，应深入用配组谱细胞作假如该试验阳性，应深入用配组谱细胞作假如该试验阳性，应深入用配组谱细胞作假如该试验阳性，应深入用配组谱细胞作抗体判定，以确定抗体特异性。当检出某一抗抗体判定，以确定抗体特异性。当检出某一抗抗体判定，以确定抗体特异性。当检出某一抗抗体判定，以确定抗体特异性。当检出某一抗体后，需深入判定双亲相关红细胞抗原。体后，需深入判定双亲相关红细胞抗原。体后，需深入判定双亲相关红细胞抗原。体后，需深入判定双亲相关红细胞抗原。如夫妇如夫妇如夫妇如夫妇ABOABOABOABO血型配合，可直接用孕妇血清加丈血型配合，可直接用孕妇血清加丈血型配合，可直接用孕妇血清加丈血型配合，可直接用孕妇血清加丈夫红细胞做抗体筛查试验。夫红细胞做抗体筛查试验。夫红细胞做抗体筛查试验。夫红细胞做抗体筛查试验。新生儿溶血的检测第12页 检出有意义抗体后，应定时复查，观检出有意义抗体后，应定时复查，观察抗体效价改变情况，抗体效价连续升高察抗体效价改变情况，抗体效价连续升高提醒胎儿可能受害。必要时可准备产后马提醒胎儿可能受害。必要时可准备产后马上换血。上换血。新生儿溶血的检测第13页n n假如抗体筛选试验阴性，只有丈夫红细胞出现阳假如抗体筛选试验阴性，只有丈夫红细胞出现阳假如抗体筛选试验阴性，只有丈夫红细胞出现阳假如抗体筛选试验阴性，只有丈夫红细胞出现阳性反应，则提醒孕妇血清中存在针对低频率抗原性反应，则提醒孕妇血清中存在针对低频率抗原性反应，则提醒孕妇血清中存在针对低频率抗原性反应，则提醒孕妇血清中存在针对低频率抗原抗体。抗体。抗体。抗体。n n假如孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿血型抗假如孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿血型抗假如孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿血型抗假如孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿血型抗原，则该抗体可能是因为输血等原因引发对胎儿原，则该抗体可能是因为输血等原因引发对胎儿原，则该抗体可能是因为输血等原因引发对胎儿原，则该抗体可能是因为输血等原因引发对胎儿无害。无害。无害。无害。新生儿溶血的检测第14页n n检测检测RhRh系系HDNHDN同时，注意母婴同时，注意母婴ABOABO系系HDNHDN并存，并存，需以缺乏该需以缺乏该RhRh抗体对应抗原抗体对应抗原A(B)A(B)红细胞进红细胞进行检测证实。行检测证实。n n如母亲如母亲Rh DRh D阴性，阴性，A A型型 父亲父亲Rh DRh D阳性阳性 B B型型检测母亲体内除抗检测母亲体内除抗-D-D外，是否存在抗外，是否存在抗B B应该用母亲血清应该用母亲血清+Rh D+Rh D阴性阴性B B型红细胞反应型红细胞反应新生儿溶血的检测第15页母婴Rh血型不合溶血病血清学检验孕妇血样本检验孕妇血样本检验孕妇血样本检验孕妇血样本检验 RhRhRhRh阴性第一次怀孕孕妇抗体检测应分别在阴性第一次怀孕孕妇抗体检测应分别在阴性第一次怀孕孕妇抗体检测应分别在阴性第一次怀孕孕妇抗体检测应分别在20202020、28282828、34343434周进行。检测包含对母亲血清用抗体筛选周进行。检测包含对母亲血清用抗体筛选周进行。检测包含对母亲血清用抗体筛选周进行。检测包含对母亲血清用抗体筛选红细胞以及红细胞以及红细胞以及红细胞以及(在在在在ABOABOABOABO血型配合时）丈夫红细胞作抗血型配合时）丈夫红细胞作抗血型配合时）丈夫红细胞作抗血型配合时）丈夫红细胞作抗体筛选。体筛选。体筛选。体筛选。经产妇或曾输过经产妇或曾输过经产妇或曾输过经产妇或曾输过RhRhRhRh阳性血，怀孕早期作抗体筛阳性血，怀孕早期作抗体筛阳性血，怀孕早期作抗体筛阳性血，怀孕早期作抗体筛查，一旦检出，则最少查，一旦检出，则最少查，一旦检出，则最少查，一旦检出，则最少每每每每4 4 4 4周周周周检测一次，亲密观察检测一次，亲密观察检测一次，亲密观察检测一次，亲密观察抗体效价改变抗体效价改变抗体效价改变抗体效价改变。新生儿溶血的检测第16页孕妇血样本检验3 3、血清中、血清中IgGIgG抗体及效价检验抗体及效价检验：ABOABOABOABO系系系系HDNHDN由由由由IgGIgG抗抗抗抗A A(B B)引发，检测母亲血清引发，检测母亲血清引发，检测母亲血清引发，检测母亲血清中有没有中有没有中有没有中有没有IgGIgG性质抗性质抗性质抗性质抗A A(B B)抗体及效价，即可预抗体及效价，即可预抗体及效价，即可预抗体及效价，即可预ABOABO系系系系HDNHDN发生可能性。发生可能性。发生可能性。发生可能性。新生儿溶血的检测第17页效价测定方法：效价测定方法：应用应用2-2-巯基乙醇（巯基乙醇（2-Me2-Me）或二硫苏糖）或二硫苏糖醇（醇（DTTDTT）破坏或中和）破坏或中和IgMIgM抗体使之不能再抗体使之不能再与盐水介质中相对应红细胞凝集。经处理与盐水介质中相对应红细胞凝集。经处理后血清加盐水进行倍比稀释后血清加盐水进行倍比稀释 加入相对应红加入相对应红细胞用间接抗球蛋白法检测。细胞用间接抗球蛋白法检测。怎样检测IgG类血型抗体？新生儿溶血的检测第18页IgGIgG抗体检测方法抗体检测方法n n当IAT效价盐水效价4倍或以上时结果可信。n nIgG抗A、B效价能够从32开始检测，其它不规则抗体均从1或2开始检测。n n用唾液血型物质中和IgM抗A,B？值得注意是无公认检测高滴度抗A、抗B试验方法，亦无明确试验室操作指南。新生儿溶血的检测第19页思索：1 1、你认为是否全部孕妇都应该作抗体筛查？为何你认为是否全部孕妇都应该作抗体筛查？为何？2 2、假如不是，什么情况下提议孕妇作抗体筛查？、假如不是，什么情况下提议孕妇作抗体筛查？新生儿溶血的检测第20页产前检验产前检验羊水检验羊水检验n n抽取羊水检测胆红素抽取羊水检测胆红素n n检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂百分比检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂百分比(L/S)(L/S)n n检测羊水中血型抗原帮助判断检测羊水中血型抗原帮助判断ABOABO血型血型 羊水穿刺术轻易造成母亲和胎儿出血，并引发羊水穿刺术轻易造成母亲和胎儿出血，并引发母亲免疫反应，所以现在极少有医院采取。母亲免疫反应，所以现在极少有医院采取。新生儿溶血的检测第21页新生儿溶血患儿血样本检验 患儿血样本检验是诊疗患儿血样本检验是诊疗HDNHDN最有利证最有利证据，证实患儿红细胞是否被来自母体据，证实患儿红细胞是否被来自母体IgGIgG抗抗A A（B B）抗体所致敏。）抗体所致敏。试验包含试验包含红细胞直接抗球蛋白试验、游红细胞直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、抗体放散试验。离抗体试验、抗体放散试验。新生儿溶血的检测第22页试验室检验试验室检验 试验名称试验名称n n目标目标方法方法结果判定结果判定 意义意义直接抗人球直接抗人球蛋白试验蛋白试验n n测测定定患患儿儿红红细细胞胞上上结结合合血血型型抗抗体体n n“最适稀释度最适稀释度”抗人球蛋白抗人球蛋白血清与充分洗血清与充分洗涤后受检红细涤后受检红细胞盐水悬液混胞盐水悬液混合合红细胞凝红细胞凝聚为阳性聚为阳性n n红细胞已红细胞已致敏，为致敏，为确诊试验确诊试验n nRhRh溶血病溶血病阳性率高阳性率高而而ABOABO溶溶血病低血病低抗体释放试抗体释放试验验n n测定测定患儿患儿红细红细胞上胞上结合结合血型血型抗体抗体n n使患儿致敏红使患儿致敏红细胞结合母体细胞结合母体血型抗体释放血型抗体释放于释放液中，于释放液中，该释放液与同该释放液与同型成人红细胞型成人红细胞混合，再加入混合，再加入抗人球蛋白血抗人球蛋白血清清红细胞凝红细胞凝聚为阳性聚为阳性n n检测致敏检测致敏红细胞敏红细胞敏感试验，感试验，为确诊试为确诊试验验n nRhRh和和ABOABO溶血病普溶血病普通均为阳通均为阳性性游离抗体试游离抗体试验验n n测定测定患儿患儿血清血清中来中来自母自母体血体血型抗型抗体体n n在患儿血清中在患儿血清中加入与其相同加入与其相同血型成人红细血型成人红细胞，再加入抗胞，再加入抗人球蛋白血清人球蛋白血清红细胞凝红细胞凝聚为阳性聚为阳性n n预计是否预计是否继续溶血继续溶血和换血效和换血效果，不是果，不是确诊试验确诊试验新生儿溶血的检测第23页新生儿溶血患儿血型判定n nABO血型判定：常规方法n nRh血型判定：常规方法ABO-HDN患儿新生儿溶血的检测第24页新生儿溶血患儿血型判定n nABO血型判定：常规方法n nRh血型判定：Rh溶血病婴儿Rh血型定型比较困难，原因是婴儿红细胞直抗呈强阳性，不论在酶，抗球蛋白中都必定呈阳性，所以普通检测方法都不能适用。Rh-HDN患儿新生儿溶血的检测第25页Rh-HDNRh-HDN患儿患儿RhRh血型判定血型判定 n n对新生儿红细胞进行热放散（无须放散到直抗完全阴性）后再用酶法或抗球蛋白法或盐水法判定血型。n n用恰当盐水介质抗体。包含全部单克隆盐水介质试剂;n n对于化学改性盐水介质试剂除非说明书中注明能够用于直抗阳性细胞血型判定，普通不能在此应用。新生儿溶血的检测第26页n n新生儿红细胞“遮断现象”新生儿新生儿RhDRhD阳性而且红细胞完全被母亲抗阳性而且红细胞完全被母亲抗D D所饱所饱和，以至于红细胞上没有和，以至于红细胞上没有D D位点与盐水介质定型试位点与盐水介质定型试剂起反应，又称封闭性剂起反应，又称封闭性D D。此时用盐水介质抗体检测结果可能出现弱阳性此时用盐水介质抗体检测结果可能出现弱阳性甚至阴性。甚至阴性。所以此时假如母亲为所以此时假如母亲为RhDRhD阴性，且血清中已经阴性，且血清中已经检出抗检出抗D D，新生儿直抗强阳性且与抗，新生儿直抗强阳性且与抗D D产生阴性或产生阴性或模棱两可结果，应考虑这种情况，依据需要将细模棱两可结果，应考虑这种情况，依据需要将细胞热放散后再定型。胞热放散后再定型。新生儿溶血的检测第27页HDN患儿血样本检验1 1 1 1、红细胞直接抗球蛋白、红细胞直接抗球蛋白、红细胞直接抗球蛋白、红细胞直接抗球蛋白 假如新生儿红细胞被假如新生儿红细胞被假如新生儿红细胞被假如新生儿红细胞被IgGIgGIgGIgG抗体抗体抗体抗体所致敏，直接抗球蛋所致敏，直接抗球蛋所致敏，直接抗球蛋所致敏，直接抗球蛋白试验能得到阳性结果。因为新生儿白试验能得到阳性结果。因为新生儿白试验能得到阳性结果。因为新生儿白试验能得到阳性结果。因为新生儿A A A A(B B B B)抗原密度抗原密度抗原密度抗原密度比成人低，所以被结合抗体亦极少，呈弱阳性混合比成人低，所以被结合抗体亦极少，呈弱阳性混合比成人低，所以被结合抗体亦极少，呈弱阳性混合比成人低，所以被结合抗体亦极少，呈弱阳性混合视野外观。视野外观。视野外观。视野外观。RH RH RH RH血型不合血型不合血型不合血型不合HDNHDNHDNHDN直抗试验往往强阳性。这是区分直抗试验往往强阳性。这是区分直抗试验往往强阳性。这是区分直抗试验往往强阳性。这是区分ABOABOABOABO新生儿溶血病主要标志。新生儿溶血病主要标志。新生儿溶血病主要标志。新生儿溶血病主要标志。直抗试验越强，通常病情越重。直抗试验越强，通常病情越重。直抗试验越强，通常病情越重。直抗试验越强，通常病情越重。新生儿溶血的检测第28页新生儿溶血的检测第29页2 2、游离抗体试验、游离抗体试验ABO-HDNABO-HDN患儿血样本检验患儿血样本检验 新生儿血清中新生儿血清中新生儿血清中新生儿血清中IgGIgG抗抗抗抗A A(B B)抗体来自母亲，抗体来自母亲，抗体来自母亲，抗体来自母亲，假如患儿血清中发觉有与其红细胞不配合假如患儿血清中发觉有与其红细胞不配合假如患儿血清中发觉有与其红细胞不配合假如患儿血清中发觉有与其红细胞不配合IgGIgG抗抗抗抗A A(B B)时，应将其血清与时，应将其血清与时，应将其血清与时，应将其血清与A A、B B、O O试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞用间接抗球蛋白试验加以证实。用间接抗球蛋白试验加以证实。用间接抗球蛋白试验加以证实。用间接抗球蛋白试验加以证实。新生儿溶血的检测第30页Rh-HDN患儿游离试验患儿游离试验 n nRh溶血病游离试验要求最好用母亲血清代替婴儿血清做一组谱细胞。n n该试验阳性不能证实新生儿溶血病，因为该试验检出抗体可能是因为母亲以前经输血或孕产留下。该试验只能确定婴儿血清中可能存在血型抗体。n n确诊Rh新生儿溶血病要靠直抗和释放试验。n n同时用婴儿本身血清加对应A、B细胞排除ABO溶血病。加入A、B细胞应不含能与母亲血清中Rh抗体反应抗原。新生儿溶血的检测第31页 3 3、抗体放散试验抗体放散试验 用放散法提取致敏于红细胞表面抗体。将用放散法提取致敏于红细胞表面抗体。将用放散法提取致敏于红细胞表面抗体。将用放散法提取致敏于红细胞表面抗体。将抗体放散于盐水溶液中，然后加入抗体放散于盐水溶液中，然后加入抗体放散于盐水溶液中，然后加入抗体放散于盐水溶液中，然后加入A A、B B、O O红细红细红细红细胞，作胞，作胞，作胞，作间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验，放散试验中使用红，放散试验中使用红，放散试验中使用红，放散试验中使用红细胞是直抗试验几百倍，所以此法甚为敏感，细胞是直抗试验几百倍，所以此法甚为敏感，细胞是直抗试验几百倍，所以此法甚为敏感，细胞是直抗试验几百倍，所以此法甚为敏感，即使是直接抗球蛋白试验阴性患儿，一旦本试即使是直接抗球蛋白试验阴性患儿，一旦本试即使是直接抗球蛋白试验阴性患儿，一旦本试即使是直接抗球蛋白试验阴性患儿，一旦本试验出现阳性结果，即可明确诊疗。本试验是新验出现阳性结果，即可明确诊疗。本试验是新验出现阳性结果，即可明确诊疗。本试验是新验出现阳性结果，即可明确诊疗。本试验是新生儿溶血病三项试验中最具价值一项试验。生儿溶血病三项试验中最具价值一项试验。生儿溶血病三项试验中最具价值一项试验。生儿溶血病三项试验中最具价值一项试验。新生儿溶血的检测第32页ABO-HDN患儿血样本检验 热放散法提取致敏红细胞表面抗体，将抗体放散于盐水溶液中，然后加入经酶处理A、B、O红细胞，做间接抗球蛋白试验。注意事项：洗出尽可能多红细胞进行放散；放散液温度不能超出56，以防溶血；天冷时放散液离心注意保温；将尽可能多放散液吸出；注意除去放散液中残留红细胞。新生儿溶血的检测第33页注意 在放散试验结果观察中，会碰到一个交叉反应性抗-AB抗体，它针正确特异性是A和B抗原所共有，因而它能凝集A型和B型红细胞，抗-AB一样可引发ABO溶血病。ABO-HDN患儿血样本检验新生儿溶血的检测第34页ABO新生儿溶血病判读中可能碰到问题直抗阳性而释放试验阴性直抗阳性而释放试验阴性 可能是试验误差或抗可能是试验误差或抗可能是试验误差或抗可能是试验误差或抗C3C3C3C3阳性造成或是药品阳性造成或是药品阳性造成或是药品阳性造成或是药品引发新生儿溶血病引发新生儿溶血病引发新生儿溶血病引发新生儿溶血病在在A A(B B)细胞释放液中检出抗细胞释放液中检出抗-B B(A A)在释放试验结果观察中，会碰到交叉反应性在释放试验结果观察中，会碰到交叉反应性在释放试验结果观察中，会碰到交叉反应性在释放试验结果观察中，会碰到交叉反应性抗抗抗抗-ABABABAB抗体，假如在抗体，假如在抗体，假如在抗体，假如在A A A A(B B B B)细胞释放液中仅仅检细胞释放液中仅仅检细胞释放液中仅仅检细胞释放液中仅仅检出抗出抗出抗出抗B B B B(A A A A),),),),却未检出抗却未检出抗却未检出抗却未检出抗A A A A(B B B B)时，仍认为是阴性。时，仍认为是阴性。时，仍认为是阴性。时，仍认为是阴性。新生儿溶血的检测第35页Rh-HDN患儿放散试验 放散试验放散试验 当直抗当直抗2 2时，释放试验该用乙醚放散，时，释放试验该用乙醚放散，放散液做一组谱细胞。必要时另加对应放散液做一组谱细胞。必要时另加对应A A、B B红细胞排除红细胞排除ABOABO新生儿溶血病。新生儿溶血病。如此项试验阳性如此项试验阳性，就能够直接确诊为由就能够直接确诊为由免疫抗体所致溶血病。免疫抗体所致溶血病。新生儿溶血的检测第36页小结HDN检测产前检测父母血型检测、抗体筛查、IgG类抗体效价监测产后检测 新生儿血型，Rh-HDN新生儿Rh血型检测 直抗试验 游离试验 放散试验：ABO-HDN热放散，Rh-HDN乙醚放散 Rh-HDN排除合并ABO：新生儿血清、放散液加加对应对应A A、B B细胞排除细胞排除ABOABO溶血病。加入溶血病。加入A A、B B细胞应不细胞应不含能与母亲血清中含能与母亲血清中RhRh抗体反应抗原。抗体反应抗原。新生儿溶血的检测第37页病例分析病例分析1：n n临床资料患者临床资料患者,40,40岁岁,回族回族,无输血史无输血史,孕孕3 3产产3 3。第第1 1胎产健康儿胎产健康儿;第第2 2胎足月顺产胎足月顺产,产后严重黄疸产后严重黄疸,经经治疗无效死亡。第治疗无效死亡。第3 3胎胎,产后产后12h12h后出现黄疸后出现黄疸,并逐并逐步加重步加重,2,2天后送省血液中心做新生儿溶血病血型天后送省血液中心做新生儿溶血病血型血清学检验。血清学检验。该产妇和新生儿应该做哪些检测项目？并写出原因新生儿溶血的检测第38页n n血型检验:孕妇为O、CcDee、NN 型;丈夫为A、ccDEE、MM型;患儿为O、ccDEe、MN型新生儿溶血的检测第39页n n孕妇血清抗体初筛与判定检测：孕妇血清抗体初筛与判定检测：孕妇血清与谱细胞反应格局见下表n n孕妇血清孕妇血清IgG抗体效价检测抗体效价检测新生儿溶血的检测第40页依据结果分析，可能由哪种抗体引发HDN?新生儿溶血的检测第41页n n依据检验结果，孕妇血清在盐水介质中与谱细胞均不凝集,在抗人球介质中仅与E抗原阳性红细胞反应,提醒孕妇血清中含有抗-E,效价为1:128。新生儿溶血的检测第42页n n新生儿血型血清学三项试验检测结果：患儿红细胞直接抗人球蛋白试验 2+;游离抗体试验患儿血清中检出抗-E;新生儿红细胞采取乙醚放散试验,放散液中检出抗-E,证实新生儿溶血病是由来自母体Rh血型系统抗-E免疫所致。新生儿溶血的检测第43页病例分析病例分析2 2 患儿患儿,女女,生后生后1 h,1 h,因生后皮肤黄染、吐沫因生后皮肤黄染、吐沫1 h1 h转入本科。转入本科。患儿系母孕患儿系母孕40+140+1周第周第2 2胎剖宫产分娩胎剖宫产分娩(第第1 1胎女孩胎女孩,7,7岁岁,血血型型RhRh阳性阳性O O型型),),因母亲血型疑为因母亲血型疑为RhRh阴性阴性A A型型,由产科转入本由产科转入本科。查体科。查体:体温体温36.8,36.8,呼吸呼吸6060次次/min,/min,心率心率130130次次/min,/min,体质量体质量3 750 g,3 750 g,反应可反应可,皮肤轻度黄染皮肤轻度黄染,以颜面及躯干部以颜面及躯干部为主为主,未见出血点未见出血点,双肺呼吸音粗双肺呼吸音粗,心音有力心音有力,律齐律齐,无杂音。无杂音。腹软腹软,肝右肋下可及肝右肋下可及,脾不大脾不大,四肢无水肿四肢无水肿,新生儿反射可引新生儿反射可引出出,经皮胆红素经皮胆红素126mol/L,126mol/L,即刻送血检测。即刻送血检测。新生儿溶血的检测第44页病例分析病例分析2 2 Coombs Coombs试验汇报试验汇报:新生儿血型新生儿血型ABOABO系统系统A A型型,Rh,Rh系系统统D Du u 型。型。新生儿血清学检验新生儿血清学检验:1.1.直接抗人球蛋白试验阳性直接抗人球蛋白试验阳性;2.;2.抗体释放试验阳性抗体释放试验阳性;3.;3.游离抗体检测阳性。游离抗体检测阳性。疑难血型判定汇报疑难血型判定汇报:ABO:ABO血型血型A A型型,Rh(D)CCD,Rh(D)CCDu u eeee。血清中免疫性抗。血清中免疫性抗D D效价效价64,64,故考虑溶血病发生故考虑溶血病发生为为RhRh血型系统抗血型系统抗D D引发引发 母亲血型母亲血型A A型型Rh(D)CCDRh(D)CCDu ueeee血清中免疫性抗血清中免疫性抗-D-D效价效价256,256,明确诊疗新生儿明确诊疗新生儿RhDRhDu u 血型不合溶血病血型不合溶血病。新生儿溶血的检测第45页病例分析病例分析3n n普通资料：产妇，女，普通资料：产妇，女，3636岁，汉族，岁，汉族，1414年前因产年前因产后大出血而输全血后大出血而输全血1 U1 U4 4年前因做淋巴结切除术年前因做淋巴结切除术而输全血而输全血2 u2 u。曾怀孕。曾怀孕4 4次存活一儿女此次再次存活一儿女此次再次分娩产下一男婴。患儿，男，次分娩产下一男婴。患儿，男，4 d4 d，因胆红素高，因胆红素高(3Omd(3OmddL)dL)，贫血严重怀疑为血型不合引发新生，贫血严重怀疑为血型不合引发新生儿溶血病儿溶血病新生儿溶血的检测第46页结果结果n n血型判定：血型判定：母亲母亲A A型，型，RhRh红细胞表型为红细胞表型为ccdeeccdee。新。新生儿生儿ABOABO血型正定型为血型正定型为O O，RhRh红细胞表型为红细胞表型为CcdeeCcdee。n n新生儿直抗试验强阳性新生儿直抗试验强阳性(+)(+)n n游离及释放试验：游离及释放试验：取患儿血清用谱细胞做游离试取患儿血清用谱细胞做游离试验同时取三洗后患儿压积红细胞用乙醚做释放试验同时取三洗后患儿压积红细胞用乙醚做释放试验。结果见下表验。结果见下表新生儿溶血的检测第47页新生儿溶血的检测第48页结果分析结果分析n n依据谱细胞格局，患儿血清中可能存在抗一依据谱细胞格局，患儿血清中可能存在抗一D D，抗一，抗一C C和抗和抗一一E E，放散液中可能存在抗一，放散液中可能存在抗一D D，抗一，抗一C C。n n4 4号谱细胞只有号谱细胞只有D D抗原而无抗原而无C C和和E E抗原但它与患儿血清和抗原但它与患儿血清和释放液在抗人球介质中均为阳性反应，说明血清和释放液释放液在抗人球介质中均为阳性反应，说明血清和释放液中均存在抗一中均存在抗一D D。一样，。一样，5 5号谱细胞只有号谱细胞只有C C抗原，而无抗原，而无D D和和E E抗原但它与患儿血清和释放液在抗人球介质中均为阳性抗原但它与患儿血清和释放液在抗人球介质中均为阳性反应，说明血清和释放液中均存在抗一反应，说明血清和释放液中均存在抗一C C。6 6号谱细胞只有号谱细胞只有E E抗原而无抗原而无D D和和C C抗原，但它与患儿血清在抗人球介质中抗原，但它与患儿血清在抗人球介质中均为阳性反应，说明血清存在抗一均为阳性反应，说明血清存在抗一E E。新生儿溶血的检测第49页结果分析结果分析n n吸收放散试验：吸收放散试验：为了深入确认血清和放散液中抗为了深入确认血清和放散液中抗体种类，体种类，做了吸收放散试验。患儿放散液与做了吸收放散试验。患儿放散液与O O ccDeeccDee型红细胞在型红细胞在3737吸收吸收1 h1 h吸收后放散液与吸收后放散液与CCdeeCCdee细胞在抗球蛋白介质中无反应说明放散液细胞在抗球蛋白介质中无反应说明放散液中无抗一中无抗一C C。n n患儿血清与患儿血清与O CCdeeO CCdee型红细胞在型红细胞在37C37C吸收吸收1 h1 h吸吸收后血清与收后血清与ccDeeccDee细胞在抗球蛋白介质中有反应，细胞在抗球蛋白介质中有反应，而与而与CCdeeCCdee无反应，说明血清中有抗一无反应，说明血清中有抗一D D。新生儿溶血的检测第50页讨论讨论n n患儿母亲有屡次妊娠史并屡次输注全血这两种路径都患儿母亲有屡次妊娠史并屡次输注全血这两种路径都有可能产生免疫性抗体。有可能产生免疫性抗体。RHRH抗体往往含有联合作用，含有抗体往往含有联合作用，含有C C和和(或或)D)D抗原红细胞几乎无例外地都有抗原红细胞几乎无例外地都有G G抗原。即使抗一抗原。即使抗一G G表现是抗一表现是抗一CDCD，不过它不能被分离为抗一，不过它不能被分离为抗一C C和抗一和抗一D D。抗一。抗一G G显然是与显然是与D D和和C C一个共同部位特异性反应。一个共同部位特异性反应。D D阴性人被阴性人被C(C(一一)D(+)D(+)血免疫后，产生抗体不但与血免疫后，产生抗体不但与D D阳性红细胞反应也与阳性红细胞反应也与C C阳性红细胞反应：而阳性红细胞反应：而D D阴性人被阴性人被C(+)D(C(+)D(一一)血免疫后，得血免疫后，得到抗体也包含抗到抗体也包含抗D D成份成份新生儿溶血的检测第51页n nG G抗原概念能够处理血清学存在一些迷惑，如此例抗原概念能够处理血清学存在一些迷惑，如此例中该患儿母亲中该患儿母亲RhRh血型为血型为ccdeeccdee新生儿新生儿RhRh血型为血型为CcdeeCcdee。患儿红细胞表面缺乏。患儿红细胞表面缺乏D D抗原，而释放液中抗原，而释放液中却存在抗一却存在抗一D D说明患儿红细胞吸附是抗一说明患儿红细胞吸附是抗一G G而不而不是抗一是抗一D D。而患儿血清中也对应存在抗一。而患儿血清中也对应存在抗一G G。新生儿溶血的检测第52页患儿出生第患儿出生第1 1天即出现严重黄染天即出现严重黄染,脾大脾大,尿尿液茶色液茶色,血红蛋白血红蛋白126g/L,126g/L,总胆红素总胆红素467.1mol/L467.1mol/L。头部。头部B B超发觉室管膜下出血。超发觉室管膜下出血。送本试验室检测时为出生后送本试验室检测时为出生后4d,4d,患儿母亲孕患儿母亲孕4 4次次,存活儿女为第存活儿女为第2 2胎。有胎。有2 2次输血史次输血史:14:14年年前产后大出血时输血前产后大出血时输血,4,4年前在医院切除淋年前在医院切除淋巴结时输注巴结时输注2 2单位悬浮红细胞。单位悬浮红细胞。上海血液中心上海血液中心病例分析病例分析新生儿溶血的检测第53页 试剂试剂ABOABO和和RHRH定型试剂定型试剂(单克隆抗单克隆抗-A-A、抗、抗-B-B、抗、抗-D-D、抗、抗-C-C、抗抗-c-c、抗、抗-E-E、抗、抗-e-e、标准、标准A A、B B、O O细胞细胞)均购自上海血液生均购自上海血液生物医药有限企业。血型抗体判定使用谱细胞购自上海血液物医药有限企业。血型抗体判定使用谱细胞购自上海血液生物医药有限企业和生物医药有限企业和IMMUCOR,INC.PANOCELL-10IMMUCOR,INC.PANOCELL-10。DAT(DAT(直直接抗球蛋白试验接抗球蛋白试验)和和IAT(IAT(间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验)试验采取多试验采取多特异性抗球蛋白试剂、单特异性抗特异性抗球蛋白试剂、单特异性抗-IgG-IgG、单特异性抗、单特异性抗-C3d-C3d购自上海血液生物医药有限企业和购自上海血液生物医药有限企业和Ortho-Ortho-ClinicalDiagnostics,IncClinicalDiagnostics,Inc。检测抗体效价使用。检测抗体效价使用Dce/DceDce/Dce、dCe/dCedCe/dCe、dcE/dcEdcE/dcE红细胞均来自红细胞均来自3d3d以内合格献血者。以内合格献血者。新生儿溶血的检测第54页 血型患儿和母亲均为O型,RHD阴性,母亲RH分型为dce/dce,患儿分型RH为dCe/dce。直抗强阳性,患儿红细胞抗-D、抗-E检测结果开始为阳性,经磷酸氯喹处理后呈阴性新生儿溶血的检测第55页4抗体判定n n母亲血清中检出抗-D+C+G+E4种抗体n n效价为抗-D(检测细胞:Dce/Dce):64;抗-C(检测细胞:dCe/dCe):64;抗-E(检测细胞:dcE/dcE):8。n n患儿血清中检出抗-D+C+G+En n效价为抗-D(检测细胞:Dce/Dce):16;抗-C(检测细胞:dCe/dCe):2;抗-E(检测细胞:dcE/dcE):新生儿溶血的检测第56页n n患儿放散液检出抗患儿放散液检出抗-C-C和抗和抗-D-D特异性特异性,但患儿但患儿RHRH分型分型为为RHDRHD阴性阴性(dCe/dce),(dCe/dce),所以放散液中应存在抗所以放散液中应存在抗-G-G而而不是抗不是抗-D-D。n n用用dCe/dCedCe/dCe红细胞和患儿放散液做吸收红细胞和患儿放散液做吸收,原始患儿原始患儿放散液吸收后无任何抗放散液吸收后无任何抗-C-C和抗和抗-D-D特异性特异性,说明原始说明原始患儿放散液不含单独抗患儿放散液不含单独抗-D;-D;n n用用Dce/DceDce/Dce红细胞和患儿放散液做吸收红细胞和患儿放散液做吸收,原始患儿原始患儿放散液吸收后无任何抗放散液吸收后无任何抗-D-D特异性特异性,但依然含有抗但依然含有抗-C-C特异性特异性,说明原始患儿放散液含单独抗说明原始患儿放散液含单独抗-C-Cn n由此可证实为抗由此可证实为抗-C+G-C+G引发新生儿溶血病。引发新生儿溶血病。新生儿溶血的检测第57页 文件报道,在27例产生抗-D和抗-C病例统计中,3例是单纯抗-D+抗-C+而无抗-G;24例是有抗-G,其中4例为抗-G+C,13例是抗-D+C+G,7例为抗-D+G。理论上抗-G对于有D或者C抗原新生儿都会引发HDN。但依据多篇报道,抗-G引发HDN严重程度往往更取决于C抗原,而不是D抗原。新生儿溶血的检测第58页n n一样是一样是dCe/dcedCe/dce患儿患儿,也是由抗也是由抗-C+G-C+G引发严重新生儿溶血病引发严重新生儿溶血病,试验者用患儿放散液和试验者用患儿放散液和dCe/dcedCe/dce、DCe/dceDCe/dce、DCe/DCeDCe/DCe细胞细胞反应均呈强阳性反应均呈强阳性;和和Dce/dceDce/dce、DcE/dceDcE/dce、DcE/DcEDcE/DcE细胞反应细胞反应均为弱阳性均为弱阳性;和和dce/dcedce/dce、dcE/dcedcE/dce细胞反应呈阴性。细胞反应呈阴性。n nSkovSkov曾做过曾做过RhRh表型上表型上G G抗原位点数抗原位点数,结果显示结果显示DCe/DCe9900-DCe/DCe9900-12200;dCe/dCe8200-9700;DCE/DCE5400;DcE/DcE3600-12200;dCe/dCe8200-9700;DCE/DCE5400;DcE/DcE3600-5800;Dce/Dce4500-5300;DcE/dce42005800;Dce/Dce4500-5300;DcE/dce4200。dCe/dCeGdCe/dCeG抗原量抗原量远多于远多于DcE/DcEDcE/DcE。抗。抗-G-G抗体与抗体与C C抗原反应强度大于抗原反应强度大于D D抗原。抗原。新生儿溶血的检测第59页新生儿溶血病治疗新生儿溶血病治疗新生儿溶血的检测第60页产前治疗产前治疗：减轻病情，治疗贫血减轻病情，治疗贫血。n n血浆置换n n药品治疗n n宫内输血n n提前分娩新生儿溶血的检测第61页孕妇血浆置换孕妇血浆置换n n孕妇血中不规则抗体效价过高时应考虑血浆置换。n n可保留胎儿直到能够作宫内输血时；n n作为宫内输血辅助伎俩（妊娠末3月）。n n血浆置换并不能显著降低血清中抗体量，经常只能阻止抗体量增加。新生儿溶血的检测第62页药品治疗药品治疗n n静注丙球：输注丙种球蛋白（0.51g/Kg治疗5天，隔5天为一个疗程）n n封闭巨噬细胞封闭巨噬细胞FcFc受体