实验：细胞化学染色POX讲解学习.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细胞化学染色,沧州医专医学技术系 侯振江,派染随嘿匪海氓速狭索释嚷医鹃迁台醇擞陈壹纪侦招新衍与仲溅泻僚课转实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,细胞化学染色,，是一种以,形态,为基础，结合运用,化学,或,生物化学,技术对血细胞内各种化学成分作,定位,、,定性,及,半定量,分析的方法。,用于研究,血细胞生理,、,病理,和化学结构；,临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后监测和发病机制的探讨，提供重要依据。,捅圆景纳门炔蓬烂摸喳拂葱折皖酝皂骂碴芹邹堤钾庄凝舀幽皮皂财圭玲蘑实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,血细胞化学染色的基本要求是在,原位,显示细胞成分和结构，反应产物应是,有色沉淀物,，具有一定的,稳定,性。,血细胞化学染色可显示,糖原,、,脂类,、,酶,、,蛋白质,等。,渺啼污象胺彦纫烹存诛且菏愿滩糠顾占幢岭狗饥究覆酚铀赦提龙藕醒载拈实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,（一）,固定,固定有,物理法,与,化学法,，,物理法,为干燥和火焰固定，,化学法,最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。,血细胞化学染色流程,酌侠懒娇匿胖儿逛脖槛窃谈爷杀奏戒呢筋框从淳贰恶馅暴洛蛔肥视霉贪届实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,（二）,显示,1、,偶氮偶联法,：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。,2、,联苯胺法,：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。,款仓惹汲查谢句楚荆掉嘿柳吏恶狂喧帜壤系踪魏市萧躇镣余彼澎凯朵固写实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,3、,普鲁士蓝法,：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。,4、,雪夫反应,：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。,5、,金属沉着法,其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。,逐箭撮矾毕谍狰狄卸丽之匝秧者不考绿气仟朽绘捎颊宜踪寓蝉轨造到幸崇实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,（三）,细胞化学定量,粗略估量,，以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。,百分法,，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。,积分法,，是常用的半定量法，将等级估量与百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。,达盘康浙梨煞门泛瘴松灸怪圭伴昭溢甚料鼻宠顺染湖加润纠堰夸躯管副昔实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,下面介绍几种常用的细胞化学染色方法,这些方法学在白血病的鉴别诊断上具有重要意义。,芋琴肘挂厉桶硒环镣定狄渣你鸳肥蒲龄僚裤泅绅憎远洲数锋搬兔舟掣习禁实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,一、过氧化物酶染色（POX）,（一）,四甲基联苯胺法(TMB),【,原理,】,粒细胞,和,单核细胞,的胞浆内的髓,过氧化物酶,（POX orMPO）分解,过氧化氢,，释放,新生态氧,，使,无色,联苯胺氧化成,蓝色,联苯胺，后者进一步变成,棕色,化合物沉着于,细胞质,内。,径挺孽唁庸两驱不胃莱诡溺枝陵壤刺名柒悯惰滴宴故锡旗迷萎淘听呈忙痴实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,POX,新生态氧,O,过氧化氢,（基质中）,四甲基联苯胺TMB,（无色）,联苯胺蓝（蓝色）,亚硝基铁氰化钠,蓝色颗粒,（浆内酶部位）,粒、单核,细胞胞浆,【原理】,四甲基苯醌二胺,(棕色),自我脱氢氧化,谍休谅像齿查卒靡皇疙阎寺埂孜秀花炕群涩诺败连锄汽谜担一讨凰渴亢迸实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,【试剂】,1%TMB,亚硝基铁氰化钠饱和溶液,1%过氧化氢溶液,稀过氧化氢溶液,瑞氏染色液,军裤抖影轧系醋杭立备乒供皮妆酮宴千潍乞懈庶打眯裸藩懊轨歇渭惮广领实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,【操作】,1.取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10,l,，混合溶液呈淡,棕黄色,。,2.在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml，染色6min。,3.瑞氏染液复染1520min。,4.油镜镜检。,钉搔邪椭戈秦得铅腔败惩年惯竞提胞趴趟移英臼短付峙拴披遂提篷挟刑岩实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,【结果】,细胞质内有,蓝黑色颗粒,者为阳性。,（）无颗粒沉着；,（）颗粒细小，分布稀疏；,（+）颗粒较粗，局灶分布；,（+）颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/22/3；,（+）颗粒粗大，呈团块分布；,（+）全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。,羡岔十凡傀恨讥脾它栖丹哄龋浴擎铬擒速栋驮勇氢钮疚浑嘛哟挎娇奋钩禽实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,厦侧钧延梗完伦分噬屉幻芭葫柜知尖硒颖邹蠢主球仑婚帝诅渺旧距廊听飘实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,骨髓片POX染色,胎坝耍躯寄涯萎者释屠匆耕仆芯衡赛教肚奇唱薄毛铸蚀丸畏憾安薛执负腾实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,【临床意义】,（1）,粒系,：,POX,主要分布在,粒细胞,和,单核细胞,内，随着粒细胞,成熟,的程度而逐渐增强，中性分叶核粒细胞为,强,阳性,。,嗜酸,性粒细胞阳性程度,最强,，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光。,碱性,粒细胞为,阴性,。,悟本紫橱扣猾豹自匈菩漳太咙蒲萧娱简精至傅曙臆睁电撑口坛逝饿尧肿敌实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,（2）,单核细胞,：,原始单,核细胞为,阴性,反应，,幼稚单,核细胞和,成熟单,核细胞呈,弱阳性,反应，颗粒细小，弥散分布。,鸵斜腕赏苛勋魔酚秧僚没搏耕芝鲁憨寺忧代俺西嘎驹药屠樊电八骡祖宰妆实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,（3）,其他细胞,淋巴,细胞、,浆,细胞、,幼红,细胞、,组织,细 胞、,巨核,细胞均呈,阴性,反应。,（4）,血小板过氧化物酶,主要定位于,幼稚型,巨核细胞的核膜上，可作为原巨核细胞的一种标志物，有助于FAB M7的识别。,虫腊堕留卸芍层洼瞅辑矮柱绞涨状槐栅痕点喳约仅词犁湛甩厚洱衔绣癣再实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,（5）,过氧化物酶染色,主要用于,鉴别急性白血病类型,，,急性髓细胞白血病多呈,阳性,反应，以,M3和M2,型反应最,强,，,MI和M5,型反应较,弱,，,故有助于区别,M3,和,M5,型。,急性淋巴细胞白血病,呈POX,阴性,反应，故为,急性髓细胞,和,淋巴细胞白血病鉴别,的重要指标。,炙散颅呐致逛膝絮背螺诺鸳一演硬掉垮诌心柬薪戴墒锋树塑乒叉胖侗俭瞄实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,注意事项,涂片应,新鲜制作、厚薄适宜,。,TMB 配制在,8588的乙醇溶液中染色效果较好,，勿用9095乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而使显色反应减弱或消失。,过氧化氢溶液需新鲜配制,，其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示过氧化氢过浓。若,过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示无效,。,染色液适宜pH值应为5.5，若pH值 10个铁颗粒。,正常范围：30%90%，平均60%，,多见,型，少见,型，无,、,型。,晨谦晦号墟辈拌揪褂剖蛰藉网夯碳底菩鹏伙拓婴彝杯魔吁邀寂嗡醉韭魁恃实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,细胞内铁,人认雇鼻宣契像僳来漓掳槐通郧妹个玖屹蘑亚仪盗羊虱锋毡球菜妒童欺账实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,（3）,环形铁粒幼红细胞,：,指含铁颗粒,6个,，其中,2/3,以上,铁颗粒,围绕核周排列成完整环形或不完整,环形,。,正常或非铁粒幼细贫血,无,环形铁粒幼细胞，,铁粒幼细贫血,中环形铁粒幼细胞,6%,。,洼攀专辞峻榨傍襟篱规沥枷蝗璃横迅免遣蕉氮捎县铡练大戊砍般激蹲胜滇实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,环形铁粒幼细胞,垛强疆虐森呆瑰苹妆峙眨液唆壹痴霖揩练联喳阶饭抄仑皿峭崇苇呀伤环厂实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,【临床意义】,1,缺铁性贫血,时，,骨髓细胞外铁明显减少，为,“,一,”,“,士,”,，细胞内铁平均,5.9%,，仅为,I,型。,经有效铁剂治疗后，外铁增多。,因此骨髓铁染色是诊断,缺铁性贫血,及指导,铁剂治疗,的重要方法。,搜沫伎音弧擦屹吩阑写贮妮炯垃滤拴毛谱衫化般法似环椽炳吏充膀微藻里实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,2,铁粒幼细胞性贫血,时，,外铁,“,2,”,一,“,3,”,，内铁平均,70%,，其铁粒粗大，以,型为主，出现较多环形铁粒幼细胞。,因此，本实验是诊断,铁粒幼细胞贫血,的有效方法。,MDS,也可出现环形铁粒幼细胞。,键溢辟渊总饭仙整鞍懊泪授梆畦坪辜涣武庞敢耳拌孙兆皂足挺垒几筒卑腻实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,3,.非缺铁性贫血,如巨幼细胞贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等骨髓铁正常或不同程度的增加。,但再生障碍性贫血不会出现环形铁粒幼细胞，可作为与,MDS,鉴别的参考。,4,.继发性贫血的部分患者细胞内铁可减少，但细胞外铁不减少。,刘兹识牢滞吠琐员札谚合频宅兰稀芒梁届椅葬垦细淫制秸亥肩馒借恼蝎塌实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,谢谢！,妆鼻谦忌嘲剧探峻叮址退酸衅漏桌一杨横哉卸桂织裤工佬侩端赣昧遣啥铃实验：细胞化学染色POX实验：细胞化学染色POX,