培养基和试剂的质控试卷.docx

6 培养基和试剂性能测试方法
6.1 生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制的测试方法

GB 4789.28—XXXX 11
6.1.1 非选择性分离和计数固体培养基的目标菌生长率定量测试方法
6.1.1.1 平板的制备与保存
倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少3 mm厚的琼脂层（直径90 mm的平皿通常要加入18 mL～20 mL琼脂培养基），需添加试剂的培养基，应使培养基冷却至47 ℃～50 ℃后才添加试剂。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或) 2 ℃～8 ℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应对琼脂表面进行干燥，但应注意不要过度干燥。
6.1.1.2 工作菌悬液的制备
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他方法，制备10倍系列稀释的菌悬液。生长率测试常用每平板的接种水平为20 CFU～200 CFU。
6.1.1.3 接种
选择合适稀释度的工作菌悬液0.1 mL，均匀涂布接种于待测平板和参比平板。每一稀释度接种两个平板。可使用螺旋平板法(见附录F)或倾注法进行接种，并按标准规定的培养条件培养平板。
6.1.1.4 计算
选择菌落数适中的平板进行计数，按下列式（1）计算生长率。
PR = „„„„„„„„„„„„„„„（1） osNN
式中：
PR——生长率；
NS——待测培养基平板上得到的菌落总数；
N0——参比培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100CFU）。
参比培养基的选择：一般细菌采用TSA，一般霉菌和酵母采用沙氏葡萄糖琼脂，对营养有特殊要求的微生物采用适合其生长的不含抑菌剂或抗生素的培养基。
6.1.1.5 结果解释
目标菌在培养基上应呈现典型的生长。非选择性分离和计数固体培养基上目标菌的生长率应不小于0.7。
6.1.2 选择性分离和计数固体培养基的测试方法
6.1.2.1 目标菌生长率定量测试方法
6.1.2.1.1 平板的制备与保存
按照6.1.1.1中要求进行。
6.1.2.1.2 工作菌悬液的制备
按照6.1.1.2中要求进行。
6.1.2.1.3 接种
按照6.1.1.3中要求进行。
GB 4789.28—XXXX 12
6.1.2.1.4 计算
按照6.1.1.4中要求进行。
6.1.2.1.5 结果解释
目标菌在培养基上应呈现典型的生长。选择性分离固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.5，最低应为0.1；选择性计数固体培养基上目标菌的生长率一般不小于0.7。参照附录F培养基质量控制标准。
6.1.2.2 非目标菌(选择性)半定量测试方法
6.1.2.2.1 平板的制备与保存
按照6.1.1.1中要求进行。
6.1.2.2.2 工作菌悬液的制备
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。
6.1.2.2.3 接种
用1 μL接种环取选择性测试工作菌悬液1环，在待测培养基表面划六条平行直线（如图1），同时接种两个平板，划线时可在培养基下面放一个模板图，按标准规定的培养条件培养平板。
操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°～30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。
图1 非目标菌半定量划线法接种模式图

6.1.2.2.4 计算
培养后按以下方法对培养基计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1，每个培养皿上最多为6分。如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。记录每个平板的得分总和便得到G。同时接种两个平板。
6.1.2.2.5 结果解释
GB 4789.28—XXXX 13
非目标菌的生长指数G一般小于或等于1，至少应达到小于5。
6.1.2.3 非目标菌(特异性)定性测试方法
6.1.2.3.1 平板的制备与保存
按照6.1.1.1中要求进行。
6.1.2.3.2 工作菌悬液的制备
按照6.1.1.2中要求进行。
6.1.2.3.3 接种
用1 μL接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线。并按标准规定的培养条件培养平板。
6.1.2.3.4 结果解释
非目标菌应有典型的菌落外观、大小和形态。
6.1.3 非选择性增菌培养基的半定量测试方法
6.1.3.1 培养基的制备
将培养基分装试管，每管10 mL。
6.1.3.2 工作菌悬液的制备
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜或采用其他制备方法，制备10倍系列稀释的菌悬液。
6.1.3.3 接种
在装有待测培养基的试管中接种10 CFU～100 CFU的目标菌，每管接种量为1 mL，接种两个平行管。同时将1 mL菌悬液（与试管接种同一稀释度）倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养（如增菌时间为8 h以下，需取10 μL培养后的增菌液倾注到适合的培养基中，再按适合的培养时间和温度进行培养）。
6.1.3.4 结果解释
用目测的浊度值（如0～2）评估培养基：
—— 0表示无混浊；
—— 1表示很轻微的混浊；
—— 2表示严重的混浊。

目标菌的浊度值应为2。
有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。
如增菌8 h以下，10 μL增菌液培养计数结果参照附录D培养基质量控制标准。
6.1.4 选择性增菌培养基的半定量测试方法
6.1.4.1 培养基的制备
将培养基分装试管，每管10 mL。
6.1.4.2 工作菌悬液的制备
GB 4789.28—XXXX 14
按照6.1.3.2中要求进行。
6.1.4.3 接种
6.1.4.3.1 混合菌的接种
在装有待测培养基的试管中接种10 CFU～100 CFU的目标菌（ 特殊接菌量参照附录D培养基质量控制标准），并接种1000 CFU～5000 CFU的非目标菌，接种总量为1 mL，同时接种两个平行管，混匀。同时分别将目标菌菌悬液（与试管接种同一稀释度）和非目标菌菌悬液（比试管接种小10～100倍稀释度）1mL倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.4.3.2 非目标菌的接种
在装有待测培养基的试管中接种1000 CFU～5000 CFU的非目标菌，接种量为1 mL，同时接种两个平行管，混匀。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.4.4 培养液的接种
6.1.4.4.1 混合菌培养液的接种
用10 μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液，划线接种到特定的选择性平板上，同时每管接种一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.4.4.2 非目标菌培养液的接种
吸取10 μL经培养后的非目标菌培养液，均匀涂布接种到非选择性平板（如TSA）上。同时每管接种一个平板。可使用倾注法进行接种，并按标准规定的培养条件培养平板。
6.1.4.5 计算和结果解释
目标菌在选择性平板上的菌落应>10 CFU，则表示待测液体培养基的生长率良好；非目标菌在非选择性平板上的菌落数应<100 CFU，则表示待测液体培养基的选择性为良好。
6.1.5 选择性液体计数培养基的半定量测试方法
6.1.5.1 培养基的制备
将培养基分装试管，每管10 mL。
6.1.5.2 工作菌悬液的制备
按照6.1.3.2中要求进行。
6.1.5.3 接种
6.1.5.3.1 目标菌的接种
在装有待测培养基的试管中接种10 CFU～100 CFU的目标菌，接种总量为1 mL，同时接种两个平行管，混匀。同时将1 mL菌悬液(与试管接种同一稀释度)倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.5.3.2 非目标菌的接种
在装有待测培养基的试管中接种1000 CFU～5000 CFU的非目标菌，接种总量为1 mL，同时接种
GB 4789.28—XXXX 15
两个平行管，混匀。同时将1 mL菌悬液(比试管接种小10～100倍稀释度)倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.5.4 结果解释
用目测的浊度值(如0～2)评估培养基：
—— 0表示无混浊；
—— 1表示很轻微的混浊；
—— 2表示严重的混浊。

并记录小导管收集气体的体积比。
目标菌的浊度值应为2，产气应为1/3或以上；非目标菌的浊度值应为0或1，无产气现象。
注：有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。
6.1.6 悬浮培养基和运输培养基的定量测试方法
6.1.6.1 培养基的制备
将培养基分装试管，每管10 mL(有特殊要求的可选用5 mL)。
6.1.6.2 目标菌工作菌悬液的制备
按照6.1.3.2中要求进行。
6.1.6.3 接种
在装有待测培养基的试管中接种100 CFU～1000 CFU的目标菌，同时接种两个平行管，混匀后，立即吸取1 mL待测培养基混合液，参照附录F培养基质量控制标准选用相应的培养基倾注平板，每管待测培养基接种一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度培养后，进行菌落计数。
剩余已接种菌液的待测培养基置20 ℃～25 ℃放置45min后；再吸取1 mL倾注平板，每管培养基接种一个平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养后，进行菌落计数。如保存条件有特殊要求的待测培养基，参照附录F培养基质量控制标准要求放置或培养后再进行菌落计数。
6.1.6.4 结果观察与解释
待测培养基中的菌落数变化应在±50%内。
6.1.7 Mueller-Hinton血琼脂的纸片扩散测试方法（定性测试方法）
6.1.7.1 平板的制备与保存
倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个厚度为4 mm～5 mm的琼脂层。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）5 ℃±3 ℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应可将平板置35 ℃温箱中或置室温层流橱中对琼脂表面进行干燥，培养基表面应湿润，但不能有水滴，培养皿也不应有水滴。
6.1.7.2 质控菌株的复苏
将质控菌株接种到血平板上，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。检查纯度合格后，用于质控工作菌悬液的制备。
6.1.7.3 质控菌工作菌悬液的制备
GB 4789.28—XXXX 16
将纯度满意的质控菌株培养物悬浮于TSB肉汤中，并调整浊度为0.5麦氏标准（约1×108 CFU/mL～2×108 CFU/mL）。
6.1.7.4 接种
用涂布法将质控工作菌悬液接种于MH平板上，并贴上相应的抗生素纸片(每平板最多贴6片)，将平板翻转后按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。调整菌悬液浊度与接种所有平板间的时间间隔不要超过15 min。
6.1.7.5 结果观察与解释
在无反射黑色背景下，观察有无抑菌环。结果解释参照参照附录D表D.7。
6.1.8 鉴定培养基的测试方法
6.1.8.1 液体培养基
6.1.8.1.1 培养基的制备
将培养基分装试管，再进行灭菌和添加试剂。
6.1.8.1.2 工作菌悬液的制备
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤中或采用其他制备方法，制备成5 McFarland浊度（约109 CFU/mL）的菌悬液。
6.1.8.1.3 接种
吸取0.05 mL～0.08 mL（约1～2滴）至待测培养基内，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.8.1.4 结果观察与解释
需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照附录D表D.8。
6.1.8.2 半固体培养基
6.1.8.2.1 培养基的制备
将培养基分装试管。灭菌后竖立放置，冷却后备用。
6.1.8.2.2 接种
取新鲜质控菌株斜面，用接种针挑取菌苔穿刺接种至待测培养基内。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.8.2.3 结果观察与解释
需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照附录D表D.8。
6.1.8.3 高层斜面培养基和斜面培养基
6.1.8.3.1 培养基的制备
GB 4789.28—XXXX 17
将培养基分装试管。灭菌后摆放成高层斜面（斜面与底层高度约为2:3）和普通斜面（斜面与底层高度约为3:2），冷却后备用。
6.1.8.3.2 接种
高层斜面培养基：取新鲜质控菌株斜面，用接种针挑取菌苔穿刺接种至琼脂高层，穿刺接种完毕后，再在斜面上划“之”字形接种；斜面培养基：取新鲜质控菌株斜面，用接种环挑取菌苔在斜面上划“之”字形接种。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.8.3.3 结果观察与解释
需加指示剂的试验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，再观察结果。结果解释参照附录D表D.8。
6.1.8.4 平板培养基
6.1.8.4.1 培养基的制备
倾注灭菌融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个至少3 mm厚的琼脂层（直径90 mm的平皿通常要加入18 mL～20 mL琼脂培养基）。
6.1.8.4.2 接种
取新鲜质控菌株斜面，用接种环挑取菌苔在平板上划“之”字形接种，或用接种针挑取菌苔在平板上点种接种。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。
6.1.8.4.3 结果观察与解释
参照附录D表D.8。
6.1.9 实验试剂的测试方法
6.1.9.1 实验方法
按试剂说明书进行。
6.1.9.2 结果观察与解释
参照附录D表D.8。
6.2 实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制的测试方法
6.2.1 非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法
6.2.1.1 平板的制备与保存
按照6.1.1.1中要求进行。
6.2.1.2 工作菌悬液的制备
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。
6.2.1.3 接种
GB 4789.28—XXXX 18
用1 μL接种环进行平板划线（如图2）。A区用接种环按0.5 cm的间隔划4条平行线，按同样的方法在B区和C区划线，最后在D区内划一条连续的曲线。同时接种两个平板，划线时可在培养基下面放一个模板图，并按标准规定的培养条件培养平板。
图2 目标菌半定量划线法接种模式图

操作时用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°～30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。
通常用同一个接种环对A～D区进行划线，操作过程不需要对接种环灭菌。但为了得到低生长指数G，在接种不同部分时应更换接种环或对其灭菌。
6.2.1.4 计算
培养后，评价菌落的形状、大小和生长密度，并计算生长指数G。每条有比较稠密菌落生长的划线则G为1，每个培养皿上G最大为16。如果仅一半的线有稠密菌落生长，则G为0.5。如果划线上没有菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。记录每个平板的得分总和便得到G。如，菌落在A区和B区全部生长，而在C区有一半线生长，则G为10。
6.2.1.5 结果解释
目标菌在培养基上应呈现典型的生长。目标菌的生长指数G大于或等于6时，培养基可以接受。非选择培养基的G值通常较高。
6.2.2 选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法
6.2.2.1 目标菌半定量测试方法
按照6.2.1中要求进行。
6.2.2.2 非目标菌(选择性) 半定量测试方法
按照6.1.2.2中要求进行。
GB 4789.28—XXXX 19
6.2.3 非选择性增菌培养基、选择性增菌培养基和选择性液体计数培养基的定性测试方法
6.2.3.1 培养基的制备
将培养基分装试管，每管10 mL。
6.2.3.2 工作菌悬液的制备
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜，进行10倍系列稀释至10-3，或采用其他方法,制备成105 CFU/mL～107 CFU/mL的菌悬液作为工作菌悬液。
6.2.3.3 接种
用1 μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到用于性能测试的液体培养基中，按适合的培养时间和温度进行培养。
6.2.3.4 结果解释
用目测的浊度值(如0～2)评估培养基：
—— 0表示无混浊；
—— 1表示很轻微的混浊；
—— 2表示严重的混浊。

目标菌的浊度值应为2，非目标菌的浊度值应为0或1。
有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。选择性液体计数培养基目标菌应有产气现象，非目标菌无产气现象。
6.2.4 悬浮培养基和运输培养基的定性测试方法
6.2.4.1 培养基的制备
按照6.1.6.1中要求进行。
6.2.4.2 工作菌悬液的制备
将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。
6.2.4.3 接种
用1 μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到装有待测培养基的试管中,混匀后，立即用10 μL接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养；
剩余已接种菌液的待测培养基置20 ℃～25 ℃放置45 min后，再用10 μL接种环取一环工作菌培养物划平行线接种平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养。如保存条件有特殊要求的待测培养基，参照附录G培养基质量控制标准要求放置或培养后再进行划线接种。
6.2.4.4 结果观察与解释
接种前后平板上目标菌的生长情况应均为良好。
6.2.5 Mueller-Hinton血琼脂的测试方法
按照6.1.7中要求进行。
6.2.6 鉴定培养基的测试方法
GB 4789.28—XXXX 20
按照6.1.8中要求进行。
6.2.7 实验试剂的测试方法
按照6.1.9中要求进行。
7 测试结果的记录
7.1 制造商信息
培养基制造商或供应商应按客户的要求提供培养基常规信息和相关测试菌株生长特性信息。
7.2 溯源性
按照质量体系的要求，对所有培养基性能测试的数据归档，并在有效期内进行适当的保存。建议使用测试结果记录单（见附录G）进行文件记录并评价测试结果。
GB 4789.28—XXXX 21
附录A
培养基的不正确配制出现的质量问题及原因分析
培养基的不正确配制出现的质量问题及原因分析见表A.1。
表A.1 常见质量问题与解答
异常现象
可能原因
培养基不能凝固
制备过程中过度加热
低pH造成培养基酸解
称量不正确
琼脂未完全溶解
培养基成分未充分混匀
pH不正确
制备过程中过度加热
水质不佳
外部化学物质污染
测定pH时温度不正确
pH计未正确校准
脱水培养基质量差
颜色异常
制备过程中过度加热
水质不佳
pH不正确
外来污染
脱水培养基质量差
产生沉淀
制备过程中过度加热
水质不佳
脱水培养基质量差
pH未正确控制
原料中的杂质
培养基出现抑制/低的生长率
制备过程中过度加热
脱水培养基质量差
水质不佳
使用成分不正确，如，成分称量不准，添加剂浓度不正确
制备容器或水中的有毒残留物
选择性差
制备过程中过度加热
脱水培养基质量差
配方使用不对
添加成分的加入不正确，例如加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误
添加剂污染
污染
不适当的灭菌
无菌操作技术存在问题
添加剂污染

GB 4789.28—XXXX 22
附录B
标准储存菌株和工作菌株的制备
B.1 图B.1给出了从标准菌株制备标准储存菌株的流程。
验证和文件归档
分装进行冻存d或冻干e
依据生产商指引进行复苏a
在5%的血琼脂、TSA或其他适合的固体培养基上进行分离
验证菌株的纯度和特性b
用合适的培养基制备菌悬液c
否
是
符合
获得标准菌株
标准储存菌株f
a 通常悬浮于营养肉汤中适宜时间进行复苏。
b 验证菌落形态和革兰氏染色或用生化试验进行鉴定。
c 例如，TSB添加10%~15%甘油作为冷冻保护培养基。
d 冻存管可含有多孔的小珠子。
e 在不高于-70℃低温冷冻保存可延长保存的时间。禁止采用较高的温度保存。
f 可作为工作菌株来使用。
图B.1 制作标准储存菌株的流程图
GB 4789.28—XXXX 23
B.2 图B.2给出了从标准储存菌株制备工作菌株的流程。
符合
制备用于测试的工作菌株
验证菌株的纯度和形态
在适合的固体培养基上培养，即为工作菌株
否
标准储存菌株a
迅速解冻
是
否
是
否
是
选择2c
选择1b
在适合的固体培养基上培养
制备用于测试的工作菌株
符合
验证纯度
在合适的培养基上分离=工作菌株
接种到合适的培养基d或冻存菌悬液e
符合
验证菌株的纯度和形态
a 如果标准储存菌株来源于别处，应加以验证及归档。
b 此流程更合适。
c 此流程对某些菌株是必须的，如定量试验。对所有阶段进行归档。
d 例如，可接种到TSA斜面、TSA血琼脂斜面或其他合适的培养基，培养24h，然后在合适的温度(依据不同微生物在18℃~25℃或2℃~8℃)可存放4周。
e 例如，TSB添加10%~15%甘油作为冷冻保护培养基。在不高于-70℃低温冷冻保存可延长保存的时间。禁止采用较高的温度保存。
生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制标准
生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制标准见表D.1～表D.9。
表D.1 非选择性分离和计数固体培养基质量控制标准
培养基
状态
功能分类
质控指标
培养条件
质控菌株
参比培养基
方法
质控评定标准
特征性反应
胰蛋白胨大豆琼脂
固体
非选择性分离
生长率
36℃±1℃
24h±2h
大肠埃希氏菌ATCC 25922
TSA
定量
PR≥0.7
—
粪肠球菌ATCC 29212
—
MC培养基
固体
非选择性计数
生长率
36℃±1℃
48h±2h
嗜热链球菌 IFFI 6038
MC培养基
定量
PR≥0.7
中等偏小，边缘光滑的红色菌落，可有淡淡的晕
MRS培养基
固体
非选择性计数
生长率
36℃±1℃
48h±2h
德氏乳杆菌保加利亚亚种CICC6032
MRS培养基
定量
PR≥0.7
圆形凸起,中等大小，边缘整齐,无色不透明
嗜热链球菌 IFFI 6038
圆形凸起,菌落偏小，边缘整齐,无色不透明
婴儿双歧杆菌 CICC 6069(厌氧培养)
圆形，中等大小，边缘整齐，瓷白色
3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）
固体
非选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
副溶血性弧菌ATCC17802
3%氯化钠TSA
定量
PR≥0.7
无色半透明菌落
创伤弧菌落ATCC 27562
营养琼脂
固体
非选择性分离
生长率
36℃±1℃
24h
大肠埃希氏菌ATCC 25922
TSA
定量
PR≥0.7
—
金黄色葡萄球菌ATCC 6538
枯草芽胞杆菌ATCC6633
含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）
固体
非选择性分离
生长率
30℃±1℃
24h～48h
单核细胞增生李斯特氏菌 ATCC 19115
TSA
定量
PR≥0.7
—
平板计数琼脂（PCA）
固体
非选择性计数
生长率
36℃±1℃
48h±2h
大肠埃希氏菌ATCC 25922
TSA
定量
PR≥0.7
—
金黄色葡萄球菌ATCC 6538
枯草芽胞杆菌ATCC 6633

GB 4789.28—XXXX 26
表D.2 选择性分离和计数固体培养基质量控制标准
培养基
状态
功能分类
质控指标
培养条件
质控菌株
参比培养基
方法
质控评定标准
特征性反应
亚硫酸铋琼脂(BS)
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
40h～48h
伤寒沙门氏菌CMCC(B)50071
TSA
定量
PR≥0.5
黑色菌落，有金属光泽
鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028
黑色或灰绿色菌落，有金属光泽
选择性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
半定量
G≤1
—
粪肠球菌ATCC 29212
HE琼脂
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028
TSA
定量
PR≥0.5
绿-蓝色菌落，有黑心
福氏志贺氏菌CMCC(B)51572
绿-蓝色菌落
选择性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
半定量
G＜5
橙红色菌落，可有胆酸沉淀
粪肠球菌ATCC 29212
G≤1
—
木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂(XLD)
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028
TSA
定量
PR≥0.5
黑色菌落
福氏志贺氏菌CMCC(B)51572
无色菌落，无黑心
选择性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
半定量
G＜5
黄色菌落
金黄色葡萄球菌ATCC6538
G≤1
—
沙门氏菌显色培养基
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028
TSA
定量
PR≥0.5
按说明书判定
特异性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
定性
—
按说明书判定
奇异变形杆菌CMCC(B)49005
—
按说明书判定
选择性
粪肠球菌ATCC 29212
半定量
G≤1
—
PALCAM琼脂
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
24h～48h
单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115
TSA
定量
PR≥0.5
灰绿色菌落，中心凹陷黑色，周围有黑色
选择性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
半定量
G≤1
—
粪肠球菌ATCC 29212
麦康凯琼脂（MAC）
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
20h～24h
大肠埃希氏菌ATCC25922
TSA
定量
PR≥0.5
鲜桃红色或粉红色，可有胆酸沉淀
福氏志贺氏菌 CMCC(B)51572
无色至浅粉红色，半透明棕色或绿色
菌落
选择性
金黄色葡萄球菌ATCC6538
—
半定量
G≤1
—
阪崎肠杆菌显色培养基
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
24h±2h
阪崎肠杆菌ATCC29544
TSA
定量
PR≥0.5
按说明书判定
特异性
普通变形杆菌 CMCC(B)49027
—
定性
－
按说明书判定
大肠埃希氏菌ATCC 25922
－
按说明书判定
选择性
粪肠球菌ATCC 29212
半定量
G≤1
—

GB 4789.28—XXXX 27
表D.2 （续）
培养基
状态
功能分类
质控指标
培养条件
质控菌株
参比培养基
方法
质控评定标准
特征性反应
CIN-1培养基
固体
选择性分离
生长率
26℃±1℃
48h±2h
小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B)52204
TSA
定量
PR≥0.5
红色牛眼状菌落
特异性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
定性
－
圆形、粉红色菌，边缘有胆汁沉淀环
选择性
金黄色葡萄球菌ATCC6538
半定量
G≤1
—
改良Y培养基
固体
选择性分离
生长率
26℃±1℃
48h±2h
小肠结肠炎耶尔森氏菌 CMCC(B)52204
TSA
定量
PR≥0.5
无色透明不黏稠菌落
特异性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
定性
－
粉红色菌落
选择性
金黄色葡萄球菌ATCC6538
半定量
G≤1
—
伊红美蓝琼脂(EMB)
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
大肠埃希氏菌ATCC25922
TSA
定量
PR≥0.5
黑色菌落，具金属光泽
特异性
鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028
—
定性
－
菌落呈无色、半透明
选择性
金黄色葡萄球菌ATCC6538
—
半定量
G＜5
—
改良山梨醇麦康凯琼脂(CT-SMAC)
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
大肠埃希氏菌O157:H7 NCTC12900
TSA
定量
PR≥0.5
无色菌落
特异性
大肠埃希氏菌ATCC25922
—
定性
—
粉红色菌落，周围有胆盐沉淀
选择性
金黄色葡萄球菌ATCC6538
半定量
G≤1
—
O157显色培养基
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
大肠埃希氏菌O157：H7NCTC12900
TSA
定量
PR≥0.5
按说明书判定
特异性
大肠埃希氏菌ATCC25922
—
定性
—
按说明书判定
选择性
粪肠球菌ATCC 29212
半定量
G≤1
—
奇异变型杆菌CMCC(B)49005
—
半定量
G≤1
—
李斯特氏菌显色培养基
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
24h～48h
单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19115
TSA
定量
PR≥0.5
蓝绿色菌落，带白色晕环
特异性
英诺克李斯特氏菌ATCC33090
—
定性
—
蓝绿色菌落，无白色晕环
选择性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
半定量
G≤1
—
粪肠球菌ATCC 29212
志贺氏菌显色培养基
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
20h～24h
福氏志贺氏菌CMCC(B)51572
TSA
定量
PR≥0.5
白色，突起，无色素沉淀圈
痢疾志贺氏菌 CMCC(B)51105
白色，突起，有清晰环，无色素沉淀圈
特异性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
定性
—
黄色，有清晰环，无色素沉淀圈
产气肠杆菌 ATCC13048
绿色菌落，无环和沉淀圈
选择性
金黄色葡萄球菌ATCC 6538
半定量
G≤1
—

GB 4789.28—XXXX 28
表D.2 （续）
培养基
状态
功能分类
质控指标
培养条件
质控菌株
参比培养基
方法
质控评定标准
特征性反应
改良CCD（mCCD）琼脂
固体
选择性分离
生长率
42℃±1℃
24h～48h
微需氧
空肠弯曲菌ATCC33291
无抗生素的CCD
定量
PR≥0.5
菌落有光泽、潮湿、扁平，呈扩散生长倾向
选择性
42℃±1℃
24h～48h
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
半定量
G≤1
—
金黄色葡萄球菌ATCC 6538
Skirrow琼脂
固体
选择性分离
生长率
42℃±1℃
24h～48h，微需氧
空肠弯曲菌ATCC33291
无抗生素的CCD
定量
PR≥0.5
菌落灰色、扁平、湿润有光泽，呈沿接种线向外扩散倾向
选择性
42℃±1℃
24h～48h
大肠埃希氏菌ATCC25922
—
半定量
G≤1
—
金黄色葡萄球菌ATCC 6538
改良纤维二糖-多黏菌素B-多黏菌素E（mCPC）琼脂
固体
选择性分离
生长率
39.5℃±0.5℃或36℃±1℃
18h～24h
创伤弧菌ATCC27562
3%氯化钠TSA
定量
PR≥0.1
圆型扁平,中心不透明，边缘透明的黄色菌落
特异性
霍乱弧菌VBO
—
定性
—
紫色菌落
选择性
副溶血性弧菌 ATCC17802
半定量
G≤1
—
纤维二糖-多黏菌素E（CC）琼脂
固体
选择性分离
生长率
39℃～40℃
或36 ℃±1℃
18h～24h
创伤弧菌ATCC27562
3%氯化钠TSA
定量
PR≥0.5
圆型扁平,中心不透明，边缘透明的黄色菌落
特异性
霍乱弧菌VbO
—
定性
—
紫色菌落
选择性
副溶血性弧菌ATCC17802
半定量
G≤1
—
硫代硫酸钠-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂(TCBS)
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
副溶血性弧菌ATCC17802
3%氯化钠TSA
定量
PR≥0.2
绿色菌落
选择性
大肠埃希氏菌ATCC 25922
—
半定量
G≤1
—
弧菌显色培养基
固体
选择性分离
生长率
36℃±1℃
18h～24h
副溶血性弧菌ATCC17802
3%氯化钠TSA
定量
PR≥0.5
按说明书判定