凝胶渗透色谱异常问题系列讲座_6页.pdf

!技术交流凝胶渗透色谱异常问题系列讲座（!）异常峰形于志勇（北京龙智达公司，北京!#$）在进行凝胶色谱实验的时候经常会碰到一些峰形异常情况，这些异常峰形究竟如何引起，如何解决这些峰形异常情况并使实验顺利进行，是摆在每个实验者面前的一个问题。通过多年的实验积累，我们掌握了一些关于这些异常峰形出现的规律，找到了一些解决方法，并汇总成下表，供大家参考。%&第!期高分子通报凝胶色谱柱的填料主要有硅基和聚合物基（如聚羟基甲基丙烯酸酯、苯乙烯!二乙烯基苯共聚物、高交联聚乙烯醇和聚次亚乙烯等）。水溶性色谱柱的填料一般用硅基和聚羟基甲基丙烯酸酯。硅基的色谱柱适合用来分离蛋白质等样品。聚羟基甲基丙烯酸酯的色谱柱，适合于各种水溶性聚合物和多糖。苯乙烯!二乙烯基苯共聚物的色谱柱主要应用于油溶性的流动相，如四氢呋喃、氯仿、二甲基甲酰胺等有机溶剂。高交联聚乙烯醇的色谱柱可以用于水溶性油溶性两项体系。一些特殊的填料如聚乙烯苯，则因其特殊的性能（耐高压）被应用于一些粘度较大的有机流动相。在理论上，凝胶色谱实验中的样品在填料上是完全没有保留的，可实际上样品和填料之间可能会存在一些相互作用，这就要求我们在使用不同凝胶色谱柱时不仅要注意流动相的应用范围，还要注意填料对样品的吸附。一旦填料对样品有吸附，就超出了凝胶色谱的分离机理的范畴。一般的凝胶色谱冲洗的方法：所有凝胶色谱柱的清洗方法是将凝胶色谱柱的进口和出口反接，用与分析时相同的流动相以试验流速的#$%的流量进行冲洗。这个方法可以将一部分吸附在柱子里的杂质冲洗掉，但不能保证百分之百的冲洗干净。凝胶色谱柱的性能测试一般我们用理论塔板数来评价色谱柱。式中：!为理论踏板数；#为峰位德尔保留时间；$为二分之一峰高处的峰的宽度（半峰宽）。凝胶柱子有一定的使用寿命，如果发现峰形异常并怀疑柱子性能降低，实验者应测试色谱柱的理论塔板数。当柱子的理论塔板数低于一定指标，且不能通过再生手段使其恢复到正常指标时，该柱子即行报废，实验者应使用新的色谱柱进行样品测试。对流动相的要求采用有机相做流动相时，要求最好使用分析纯的有机试剂，一般情况下用$&!(的过滤器过滤一下就可以。对于水相)*+，要求使用二次重蒸水，$&!(的滤膜过滤。对于流动相，尤其是在夏天，一般要求使用新鲜水。因为水久置会产生菌，造成色谱柱的堵塞。使用纯水保存色谱柱也会有菌滋生污染的风险，所以我们通常建议用户在水中添加$&%左右的,-,.，从而起到抑菌的作用，这样使得柱子被滋生菌污染的风险降到最低。一根凝胶色谱柱，如果操作正确，保养得当，一般能使用 /.年，甚至是更长时间。01高分子通报$2 年 3 月!技术交流凝胶渗透色谱异常问题系列讲座（!）基线波动于志勇（北京龙智达公司，北京!#$）在凝胶色谱的使用过程中，有很多因素都会引起基线的波动。在这里，我们将一些可能引起凝胶色谱基线波动的原因以及解决方法汇总成下表，供大家参考。$%第&期高分子通报示差检测器的池子是由样品池（!#$）和参比池（%&）两部分构成的。在实验过程中，参比池里装有流动相。当有样品经过样品池时，由于样品的折光指数与流动相的折光指数不同，穿过样品池和参比池的光束发生偏转，样品的浓度越大，偏转角度的越大。示差检测器的的结构示意图从示差检测器的结构和原理上看，我们在实验中要注意几个方面：（）首先是温度。这个温度包括室温和实验温度。一般要求室温比实验温度低()为最佳。在夏天尤其要注意空调器的出风口不能直接吹向仪器；（*）流动相要脱气后再进入仪器。脱气的最佳方法是用在线脱气机。在线脱气机能够保证在+,-./的流量时，出口处的含氧量为*#。没有在线脱气机的用户，可以每*个小时把流动相放入超声波仪做脱气处理。再次进样前，示差检测器要做一次清洗，即置换参比池中旧的流动相；（+）当检测器中有气泡时，可以用改变流速的方法，来冲洗检测器；（0）如果检测器中有污染，用流动相冲洗不出来时，可以采用 12的硝酸溶液清洗检测器。此方法应在有经验的工程师的指导下进行；（1）如果使用含盐的流动相做实验。一定要在实验后用无盐的流动相冲洗检测器+(分钟以上。绝对不能让盐保存在检测器的池子里，否则一旦池子里的流动相挥发，盐会沉积在池子的表面。池子污染后，再处理清洗是很麻烦的。(3高分子通报*(4 年+月