毛细管电泳法测定解酒类保健液中葛根素的含量.pdf

65刘芳等：毛细管电泳法测定解酒类保健液中葛根素的含量|检验检测毛细管电泳法测定解酒类保健液中葛根素的含量刘芳，赵晓冬，李宁，袁昕蓉（沈阳市食品药品检验所，辽宁沈阳110 12 2）【摘要】应用毛细管电泳法快速测定解酒类保健液中葛根素的含量。采用毛细管电泳法，以2 0 mmol/L硼砂-2 0 mmol/L磷酸二氢钠溶液（pH8.5）-10%甲醇为缓冲液，未涂层的熔融石英毛细管柱（56 cm50m），检测波长2 54nm，电压2 0 kV，柱温20,进样压力30 mbar，进样时间6 s。葛根素在10 30 0 g/mL的浓度范围内与峰面积线性关系良好（R=0.9952)。本方法简便快速、准确、经济性好，可用于测定解酒类保健液中葛根素的含量。【关键词】毛细管电泳法；解酒类保健液；葛根素【D O I编码】10.396 9/j.issn.1674-4977.2023.04.020Determination of Puerarin inAnti-alcohol Health Liquid by Capillary ElectrophoresisLIU Fang,ZHAO Xiaodong,LI Ning,YUAN Xinrong(Shenyang Institute for Food and Drug Control,Shenyang 110122,China)Abstract:To establish a rapid method for the determination of puerarin in anti-alcohol health liquid by capillary electrophoresis.Theseparation was performed on a uncoated fused silica capillary column(56 cm 50 m),the detection wavelength was 254 nm,theseparation voltages were 20 kV,the column temperature was 20 C,the injection pressure was 30 mbar,injection time was 6 s,and 20mmol/L sodium borate-20 mmol/L sodium dihydrogen phosphate(pH8.5)-10%methanol was selected as the running buffer.Puerarinhad a good linear relationship within the concentration ranges of 10300 g/mL(R=0.9952).This method is simple,rapid,accurate andvery economical,and can be used for the determination of puerarin in anti-alcohol health liquid.Key words:capillary electrophoresis;anti-alcohol health liquid;puerarin毛细管电泳（CapillaryElectrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis,HPCE），是2 0 世纪8 0 年代后期迅速发展起来的一项新型液相分离技术。CE把经典电泳技术与现代微柱分离技术完美结合，是分析领域继HPLC之后的又一重大进展葛根有解肌退热、生津止渴、解酒毒等功效,葛根素是葛根中的主要成分。葛根及葛根素在临床中被广泛应用。葛根素常用于治疗糖尿病、心脑血管疾病、动脉粥样硬化、心肌缺血、腹泻、发热等，还可对抗乙醇中毒的各种并发症。在解酒类保健品中葛根素也有着广泛的应用 3-6。本文采用毛细管电泳法测定解酒类保健食品中葛根素的含量。与HPLC相比，CE实验成本低、缓冲液用量小、出峰快、效率高，是一种高效环保的分析方法。1材料与方法1.1仪器与试药毛细管电泳仪（Agilent,G7100A）；未涂层的熔融石英毛细管柱（Agilent,56cmx50m）；电子天平(Sartorius，MS A 12 5P);pH计(Mettler,S210-K)。葛根素（中国食品药品检定研究院，批号：110 7 52-201816，含量：95.4%）；福禄寿三喜牌克劳克液（沈阳永大制药，批号：2 0 2 10 8 0 3）；力克保健液（辽宁力克制药，批号：20211122)。1.2实验方法1.2.1电泳条件未涂层的熔融石英毛细管柱（56 cm50m）；缓冲液为66BRAND&STANDARDIZATION品牌与标准化2023年第4期20mmol/L硼砂-2 0 mmol/L磷酸二氢钾溶液（pH8.5-10%甲醇；检测波长为2 54nm；电压为2 0 kV;温度为2 0 C;进样压力为30 mbar,进样时间6 s。每次测定前用缓冲液冲洗2 min。1.2.2溶液配制1)对照品溶液精密称取葛根素对照品10.0 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。葛根素浓度为1.0 mg/mL2）样品溶液取样品5mL，置具塞锥形瓶中，精密加人甲醇2 0 mL，超声提取5min，摇匀静置，取上清液经0.45m微孔滤膜过滤备用。2结果与分析2.1专属性取上述对照品溶液和供试品溶液以及溶剂，分别在上述条件下测定，记录色谱图（见图1）。样品中葛根素与相邻峰分离度均大于1.5，说明本方法专属性良好。DAD1AS4m254.4Re-360.100100款根系一8 92 44020/anDAD1A.Sg=254.4Ref=360:100100B80-Dy/惠根素-8.52 1#6040205891011时间/inDAD1A5ig-254.,4Ret=360.t0070号60C慧根素8.32 3030元2010456891011时间/inA.葛根素对照品；B.克劳克液；C.力克保健液。图1毛细管电泳色谱图2.2校准曲线精密量取对照品溶液，用8 0%甲醇稀释制得标准系列溶液，使葛根素浓度为10 g/mL、2 0 g/mL、40 g/mL、10 0 g/mL、2 0 0 g/mL、30 0 g/mL，按本文1.2.1规定的电泳条件进样。以浓度（g/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=1.2598X+77.864，R=0.9952。结果表明：在10 30 0 g/mL浓度范围内，线性关系良好。2.3精密度取浓度为10 0 g/mL的对照品溶液，连续进样6 次，响应值RSD为1.53%2.4检测限与定量限将标准曲线最低点的溶液继续稀释，以信噪比=3计算检测限，以信噪比=10 计算定量限，测得葛根素的检测限为0.5g/mL,定量限为1.3g/mL2.5重复性试验取同一批次克劳克液，按本文1.2.2 给出的样品溶液制备方法，平行制备6 份溶液，按上述电泳条件进样，计算得到葛根素的含量为0.2 0 13mg/mL,RSD为1.8%，表明本法重复性良好。2.6回收率试验精密量取2 种样品各6 份，每份5mL，每种样品分别加人葛根素对照品储备液0.5mL、1m L、1.5m L，每个浓度2 份，用甲醇稀释至2 5mL，超声提取5min，摇匀静置，取上清液经0.45m微孔滤膜滤过，按上述电泳条件进样，计算回收率。葛根素在高中低3个浓度的平均回收率及RSD见表1。2.7样品含量测定取克劳克液及力克保健液，按本文1.2.2 给出的样品溶液制备方法制备样品溶液，每批平行制备2 份，按上述电泳条件进样，计算2 批样品平均含量（见表1）。表12个厂家的样品结果葛根素含量/回收率/序号名称生产厂家(mg/mL)RSD福禄寿三喜牌1沈阳永大制药0.201397.5%/2.5%克劳克液2力克保健液辽宁力克制药0.083697.2%/2.1%3结论与讨论磷酸盐与硼砂是常用的缓冲溶液7,仅用磷酸盐与硼砂作为缓冲液，样品峰无法达到很好的分离效果。有机溶剂作为增溶剂可以调整电渗流(Electro-Osmotic Flow，E O F)大小，一般会引起迁移时间的延长。在缓冲液中加入10%甲醇后，葛根素与相邻峰的分离度达到2.5，可以较好分离。本试验考察了不同浓度缓冲液对结果的影响，增大浓度67（编辑：李加鹏）刘芳等：毛细管电泳法测定解酒类保健液中葛根素的含量|检验检测可以改善葛根素与样品中其他峰的分离度，但浓度过大会延长迁移时间且峰型变差，最终确定缓冲液浓度为2 0 mmol/L。缓冲液的pH值是影响迁移时间和分离度的另一个重要因素。pH值的改变会影响电渗流，从而改变迁移时间 18-9)。本试验考察了不同pH值缓冲液（pH值7.0 9.0)对结果的影响，发现迁移时间随pH值增大而减小，在pH值为8.5时，有较好的峰型与分离效果。CE法与HPLC相比，节约了时间与试剂用量，毛细管柱也比昂贵的液相色谱柱要经济得多。唯一的不足之处在于毛细管系统的稳定性相较于液相系统差，这主要是毛细管电泳的分析机理所致10-1。为克服这个问题，本试验在每5 6 针样品之间用0.1mol/L氢氧化钠溶液、纯水和运行缓冲液分别冲洗3min,迁移时间和响应值都可以达到较好的重复性。因此本方法采用外标法而未采用常用于CE分析的内标法。利用二极管阵列检测器全光谱扫描功能(190 6 0 0 nm)分别采集标准溶液和样品溶液的光谱图。保留时间定性，通过比较标准溶液中葛根素的光谱图（见图2)与样品溶液中可疑色谱峰光谱图的重合性，进一步定性确证样品中可疑色谱峰是否为葛根素。80-7060Y/5040-302010200225250275300325350375波长/nm图2葛根素光谱图该方法采用保留时间和光谱图信息两方面进行综合定性分析，可有效避免在检测工作中因定性失误而出现假阳性样品1415。在光谱库中添加葛根素对照品的光谱为参比光谱，将品样品峰的光谱进行比对，可以在缺少对照品的情况下快速定性样品中是否含葛根素。本方法可以定性定量分析力克保健液中葛根素的含量，为解酒类保健品功效成分的检测提供了新思路。品【参考文献】1刘春叶.毛细管电泳在药物分析中的应用 M.陕西：西北工业大学出版社，2 0 13.2国国家药典委员会.中华人民共和国药典2 0 2 0 年版（一部）S.北京：中国医药科技出版社,2 0 2 0.3 吕丽华，荣晓慧.葛根活性成分的药理作用及其现代临床应用 J.社区医学杂志，2 0 14,12(19：35+8 1.4】黄雄峰，汪建民.葛根素的神经保护作用机制研究进展.中国实验方剂学杂志，2 0 15,2 1(4)：2 2 4-2 30.5李睿，郝鑫龙，刘俊池，等.葛根及其活性成分对心血管疾病的改善作用机制研究进展 J.人参研究,2 0 2 1,3(4)：59-61.6郑瑶瑶.解酒类功能保健食品的作用 1.现代食品，2 0 2 0(6):50-52.7吕思瑶，陈兴明，黄立归，等.解酒类功能食品的研究进展.吉林医药学院学报，2 0 19,40(4):2 8 6-2 8 7.8 王玲娇，孙国祥，郑玉玲，等.木香顺气丸毛细管电泳指纹图谱研究 J.中国药业，2 0 19,2 8(1)：35-39.9】丁晓静，郭磊.毛细管电泳实验技术 M.北京：科学出版社，2 0 15.10魏波，马遥，田文哲，等.2 0 2 0 年毛细管电泳技术年度回顾.色谱,2 0 2 1,39(6):559-56 6.11王烜.毛细管电泳法测定感冒清热颗粒中葛根素的含量.化工时刊,2 0 13,2 7(1):14-16.12陈丽霞，赵志毅，杨森，等.毛细管电泳在食品安全检测中的应用进展 J.食品安全质量检测学报，2 0 2 0 11（2 0)：7189-7195.13杨直，林丽琴，汪霞，等.毛细管区带电泳法测定盐酸雷尼替丁注射液的含量和有关物质.药物分析杂志，2 0 17，37(11):2025-2030.14毛敏，赵慧明，孙小龙.食品添加剂糖精钠、山梨酸的假阳性判定研究.食品安全质量检测学报，2 0 2 0,11(14)：4829-4835.15马长海，于明明，间吉昌，等.液相色谱-光谱图法定性确证食品中苯甲酸、山梨酸 J.化学分析计量，2 0 2 2,31（1)：45-48.【作者简介】刘芳，198 3年出生，女，主管药师，学士，研究方向为药品及保健食品质量分析。赵晓冬，197 9年出生，男，主任药师，硕士，研究方向为药品及保健食品质量分析。