灭菌方法与生物指示剂省名师优质课赛课获奖课件市赛课一等奖课件.ppt

*,harmony,本资料仅供参考，不能作为科学依据。谢谢,上海汉尼生物技术有限企业,李燕燕 产品经理,灭菌方法与生物指示剂,第1页,概要,灭菌法和生物指示剂,生物指示剂形式,无菌确保水平,灭菌工艺验证,惯用灭菌方法,制药工业惯用灭菌方法,生物指示剂使用,孢子数测定,第2页,灭菌法和生物指示剂,灭菌法,系指用适当物理或化学伎俩将物品中活微生物杀灭或除去，从而使物品残余活微生物概率下降至预期无菌确保水平方法。,生物指示剂,系一类特殊活微生物制品，可用于确认灭菌设备性能、灭菌程序验证、生产过程灭菌效果监控等。用于灭菌验证中生物指示剂普通是细菌孢子。,第3页,生物指示剂形式,一定数量孢子附着在,惰性载体,上，,如滤纸条、玻片、不锈钢、塑料制品等,孢子悬浮液密封于安瓿中,第4页,无菌确保水平,无菌确保水平,一批物品无菌特征只能相对地经过物品中活微生物概率低至某个可接收水平来表述，即SAL（sterility assurance level）。,我国及欧美药典都把,SAL,不得大于百万分之一作为最终灭菌产品无菌确保要求，即,SAL,10,6,第5页,灭菌工艺验证,验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后到达无菌要求,通常认为灭菌后微生物残余概率小于,110,-6,。,物理性验证,：经过得到热分布与热穿透数据,来估测一个灭菌程序对微生物致死性。,化学指示剂验证,：物品包外用化学指示剂用于验证物品是否经过灭菌处理，物品包内中心部位化学指示剂才可作为物品是否到达灭菌参考标志。,生物指示剂验证,：将已知其耐热性生物指示剂直接接种在产品溶液或相同溶液中进行验证,是评判灭菌工艺杀灭效果最直观有效方法,也是灭菌工艺验证必不可少试验。,第6页,惯用灭菌方法,湿热灭菌法,干热灭菌法,气体灭菌法,辐射灭菌法,过滤除菌法,第7页,不一样灭菌方式不一样菌种种类选择,灭菌方法,生物指示剂,保藏号,D,值,备注,湿热灭菌法,嗜热脂肪芽孢杆菌,Bacillus stearothermophilus,NCTC 10007,NCIMB 8157,ATCC 7953,1.5-3.0min,生孢梭菌孢子,Clostridium sporogenes,NCTC 8594,NCIMB 8053,ATCC 7955,0.4-0.8min,干热灭菌法,枯草芽孢杆菌,Bacillus subtilis,NCIMB 8058,ATCC 9372,1.5min,去热原验证时加大肠杆菌内毒素,(Escherichia coli endoxin),辐射灭菌法,短小芽孢杆菌,Bacillus pumilus,NCTC 10327,NCIMB 10692,ATCC 27142,3kGy,短小芽孢杆菌孢子可用于监控灭菌过程，但不能用于灭菌辐射剂量建立,气体灭菌法,枯草芽孢杆菌,Bacillus subtilis,NCTC 10073,ATCC 9372,2.5min,环氧乙烷灭菌,嗜热脂肪芽孢杆菌,Bacillus stearothermophilus,NCTC 10007,NCIMB 8157,ATCC 7953,12980,气态过氧化氢灭菌,过滤除菌法,缺点假单胞菌,Pseudomonas diminuta,ATCC 19146,用于滤膜孔径为0.22m滤器,黏质沙雷菌,Serratin marcescens,ATCC 14756,用于滤膜孔径为0.45m滤器,第8页,湿热灭菌法,指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等伎俩使微生物菌体中蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物方法。,须确保物品灭菌后,SAL10,-6,对热稳定物品，可采取过分杀灭法，,其,SAL,应,10,-12,第9页,适用范围,药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其它遇高温和潮湿不发生改变或损坏物品,第10页,惯用生物指示剂,嗜热脂肪芽孢杆菌孢子,(,Spores of,Bacillus stearothermophilus,，,NCTC 10 007,、,NCIMB 8157,、,ATCC 7953,),D,值为,1.5,3.0min,生孢梭菌孢子,(,Spores of,Clostridium sporogenes,，,NCTC 8594,、,NCIMB 8053,、,ATCC 7955,）,D,值为,0.4,0.8min,第11页,生物指示剂选择,第12页,干热灭菌法,指物品于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气到达杀灭微生物或消除热原物质方法。,确保灭菌后产品其,SAL10,-6,干热过分杀灭后产品,SAL,应,10,-12,第13页,耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌物品灭菌，如玻璃器具、金属制容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等,适用范围,第14页,枯草芽孢杆菌孢子,(Spores of,Bacillus subtilis,，,NCIMB 8058,、,ATCC 9372),惯用生物指示剂,D,值大于,1.5min,第15页,生物指示剂选择,第16页,气体灭菌法,指用化学消毒剂形成气体杀灭微生物方法。在充有灭菌气体高压腔室内进行。,惯用气体：环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等,第17页,环氧乙烷法,灭菌原理,：强氧化，其分子作用于菌体后，能与菌体蛋白、核酸和酶中,COOH,、,NH2,、,SH,、,OH,等基团起反应，而使菌体死亡。,含有杀菌谱广，灭菌能力强特点，对微生物繁殖体、芽孢有较强杀灭效果。,第18页,适用范围,塑料包装原料粉末、散剂、颗粒等固体药料及医疗器械类固体器具等不能采取高温灭菌物品灭菌,含氯物品及能吸附环氧乙烷物品则不宜使用,第19页,惯用生物指示剂,枯草芽孢杆菌孢子,(Spores of,Bacillus subtilis,，,NCTC 10073,、,NCIMB 8058,、,ATCC 9372),D,值大于,2.5min,第20页,气态过氧化氢法,是利用过氧化氢在低浓度气体状态下比液体状态更具杀孢子能力优点，经生成游离,-OH,，用于进攻细胞成份，包含脂类、蛋白质和,DNA,，到达完全灭菌要求一个技术。,第21页,应用：,隔离器验证,新设备或灌装线调整和认证,大型或组装设备评定,未知气体分布动力学研究,含有多个装载配置设备认证,设备中最难灭菌位置日常检测,生物指示剂：嗜热脂肪芽胞杆菌孢子,(,Spores of Bacillus stearothermophilus,，,NCTC 10007,、,NCIMB 8157,、,ATCC 7953),第22页,生物指示剂选择,第23页,辐射灭菌法,应用,射线、,射线杀灭细菌方法，又称电离辐射，前者由钴,-60,或铯,-137,发出，穿透力强；后者由电子加速器产生，带电荷，穿透力弱，灭菌效果差。,射线灭菌机理：,射线直接作用于微生物蛋白质、核酸和酶等，促使化学键断裂，杀死微生物；又可间接作用于微生物体内水分子，引发水电离和激发，生成自由基，再作用于微生物活性分子，使微生物死亡。,对于辐射灭菌，无芽孢菌比有芽孢菌敏感得多；无芽孢菌中革兰氏阴性菌比阳性菌敏感；而病毒敏感性很差。,第24页,适用范围,不耐热药品灭菌，医疗器械、容器、高分子材料、包装材料、生产辅助用具、不受辐射破坏原料药及成品等均可用本法灭菌。,第25页,惯用生物指示剂,短小芽孢杆菌孢子,(Spores of,Bacillus pumilus,，如,NCTC 10 327,、,NCIMB 10 692,、,ATCC 27 142),。,置于放射剂量,25kGy,条件下，,D,值约,3kGy,。,第26页,过滤除菌法,系利用细菌不能经过致密具孔滤材原理以除去气体或液体中微生物方法。,适用范围：,对热不稳定药品溶液、气体、水或原料除菌。,第27页,惯用生物指示剂,滤膜孔径为,0.22m,滤器：缺点假单胞菌,(,Pseudomonas diminuta,如,ATCC19 146),滤膜孔径为,0.45m,滤器：黏质沙雷菌,(,Serratinmarcescens,如,ATCC 14 756),第28页,制药工业惯用灭菌方法,原料药：,化学合成药,较高熔点药品惯用于干热灭菌法，对较低熔点则用湿热灭菌法，对不耐热药品，如是晶体，可溶解后过滤除菌；,植物提取物,若是用常规或高温提取单一成份流浸膏，惯用压力蒸汽法、流通蒸汽法消毒灭菌；若是低温提取物，则优先考虑过滤除菌；,生化药品,化学消毒灭菌剂，如低温乙醇法、低温间歇法和过滤法等,。,第29页,药品制剂,：,输液剂和水针剂,压力蒸汽灭菌法；,热不稳定药品如冻干粉针剂,过滤法；,多数药液,射线灭菌。,软膏等半固体制剂,：干热法或辐射法,中药,：,大部份药材,压力蒸汽法；,除含挥发油、对热不稳定成份药材和生、熟功效不 同药材,热力法和辐射法。,第30页,抗生素生产,：,培养基、种子罐和发酵罐,压力蒸汽法；,无菌空气,过滤法；,最终产品,过滤法。,水和空气,：,过滤法、甲醛蒸气法。,包装材料,：,玻璃材质安瓿、西林瓶,干热法；,聚乙烯、聚丙烯等塑料包装材料等,100,蒸汽；,橡胶塞等,湿热法。,第31页,厂房设施、设备和工器具,：,不锈钢制密闭设备、管道,压力蒸汽；,小设备零部件、工器具和容器,干热法或湿热法；,耐酸碱而不耐高温塑料材质物品,过氧化氢法；,洁净工作服、清洁工具,压力蒸汽法。,第32页,惯用灭菌方法汇总,灭菌方法,适 用 范 围,湿热法,(,压力蒸汽、流通蒸汽,),设备、釜罐、管道、器械、耐热液体制剂、生药、无菌衣、清洁工器具等,干热法,(170),一些设备、器械、耐热干粉粉剂、安瓿和西林瓶等包装容器,射线法,耐辐射药剂、生药、包装容器等,环氧乙烷,包装材料、器械、生药等,过氧化物类,(,过氧化氢、二氧化氯,),一些设备表面、工作台、器械、空气、水等,醛类,(,甲醛、戊二醛,),器械、工作台、包装台、空气,过滤除菌法,空气、水、不耐热液体药剂、生化药剂,第33页,灭菌方法,孢子,生物指示剂产品,蒸汽,嗜热脂肪芽孢杆菌孢子、生孢梭菌孢子,Smart-ReadEZTest System,（,SEZS/5,SEZS/6,）,EZTest(EZS/5,EZS/6),EZTest Test Pack(STP),Releasat(RS5/100,RS6/100),SGMStrip (SGMS,SGMD),环氧乙烷,枯草芽孢杆菌孢子,EZTest(EZG/6),EZTest Test Pack(ETP),Releasat(RG/100),SGMStrip(SGMG,SGMD),低温甲醛蒸汽,嗜热脂肪芽胞杆菌孢子,SGMStrip(SGMLF/6),第34页,灭菌方法,孢子,生物指示剂,液体蒸汽,嗜热脂肪芽孢杆菌孢子、枯草芽孢杆菌孢子,SterilAmp II(SA/4,SA/5,SA/6),SterilAmp II“5230”(SASU/6),MagnaAmp(MA/5,MA/6),辐射,短小芽孢杆菌孢子,SGMStrip(SGMR),干热,枯草芽孢杆菌孢子,DriAmp Culturing Set(DH/50),环氧丙烷,嗜热脂肪芽孢杆菌孢子,EZTest(EZP/5),过氧化氢,嗜热脂肪芽孢杆菌孢子,Apex,EZTest(EZH/6),二氧化氯,枯草芽孢杆菌孢子,SGMStrip(SGMG,SGMD),第35页,生物指示剂使用,选择适当生物指示剂,正确使用生物指示剂,放置位置、数目、放置方式,使用之后处理,第36页,选择适当生物指示剂,第37页,生物指示剂放置位置,应放在灭菌最困难地方：,在灭菌器中最大包装中心；,灭菌器排气口，往往不易到达灭菌温度；,靠灭菌器门口和底部；,不一样生物指示剂摆放要求不一样。,第38页,依据设备规格调整指示剂数量，提议不少于,2,支，普通每个灭菌周期使用不少于,10,支。,冷藏保留生物指示剂使用前须室温放置,1-2,小时。,生物指示剂放置数目,第39页,最少一支未灭菌作为阳性对照,阳性结果都要高压灭菌后才可丢弃,有些BI含有阴性对照，需要一同灭菌后培养,正确使用生物指示剂,第40页,孢子数测定,1.,涡旋振荡仪将纸片浸渍混匀直至成匀浆,2.,热击,10-15min,、冰浴,2min,3.,系列稀释，每次移液前需振荡混匀,4.TSA,浇注法适宜温度倒置培养,48h,5.,计数,为验证说明书上孢子数，依据美国药典及,ISO 11138,，恢复孢子数所占百分比应为,50%+300%,。,第41页,枯草芽孢杆菌孢子数测定,恢复率=94%,第42页,Thank You!,shharmony,第43页,