灰树花多糖对胃溃疡大鼠肠激素及氧化因子的影响.pdf

收稿日期：基金项目：河 南 省 高 等 学 校 重 点 科 研 项 目（）；河 南 省 高 校 省 级 大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划 项 目（）；河南省高校教学名师（豫教【】）；郑州市名师工作室（郑教师函【】号）作者简介：刘勇华（），男，河南郑州人，副教授，硕士，主要从事中医学、中药学教学与研究。通信作者：马俊远，讲师，：。灰树花多糖对胃溃疡大鼠肠激素及氧化因子的影响刘勇华，李高申，马俊远（黄河科技学院 医学院，河南 郑州 ）摘要：探讨灰树花多糖对胃溃疡大鼠胃泌素（，）、生长抑素（，）、胃动素（，）、超氧化物歧化酶（，）、丙二醛（，）和谷胱甘肽过氧化物酶（，）含量的影响。选取 级健康 雄性大鼠 只，随机分为空白组 只、实验组 只，实验组采用“乙酸灌胃法”制作大鼠胃溃疡模型，周后将造模成功的 只大鼠随机分为模型组、奥美拉唑组和灰树花多糖低、中、高剂量组，每组各 只。奥美拉唑组灌胃 （）、灰树花多糖组大鼠灌胃低剂量 （）、中剂量 （）、高剂量 （），次 ，连续 周，观察各组大鼠状态，记录体质量和进食量、溃疡面积、溃疡指数；采用 法检测大鼠血清 （）、（）、（）水平；采用胺法测定 的活力、比色法测定 、的含量。模型组大鼠较空白对照组 、升高（或 ），、降低（或 ），药物干涉组随着灰树花多糖浓度的提高 、升高（或 ），、指标降低（或 ），灰树花多糖具有降低胃肠激素分泌以及提高抗氧化酶（、）含量的作用。关键词：灰树花多糖；胃溃疡；胃肠激素；抗氧化中图分类号：文献标识码：文章编号：（）：，（，）：（），（），（），（），（）（）（）（），（）（），（）（），；第 卷第 期 黄河科技学院学报 年 月 （），（）（）；，（），（），（），（）（，）：；引言胃溃疡（，）是一种常见的消化系统病症，该病病程长、易反复发作 。研究表明，其发病率在人群中高达 ，主要临床表现是节律性上腹部疼痛、反酸、呕吐、病情反复发作、严重者消化道出血。目前，消化性溃疡患者治疗一般以胃黏膜保护剂和质子泵抑制剂为主，如胃肠激素类、奥美拉唑、铋剂类、柱状细胞稳定剂和其他类 ，虽然可以缓解症状和改善胃黏膜炎症和溃疡面，但是远期效果并不理想，治疗用药有一定的局限性和一些不良反应。近些年，关于灰树花药理活性的抗炎和提高抗氧化能力方面报道甚多，本文探讨灰树花多糖对胃溃疡大鼠模型肠激素分泌、氧化应激的影响，揭示灰树花多糖对胃溃疡大鼠模型肠激素及氧化应激的调控作用，并探讨灰树花多糖防治胃溃疡的量效关系，为临床进一步研究灰树花多糖防治胃溃疡提供参考。灰树花（）是药食两用珍稀菌，研究表明灰树花多糖常用作辅助治疗糖尿病和各种癌症，灰树花具有较强的药理和生物活性，如有增强免疫力、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等作用。实验材料 实验动物清洁级 周龄的 大鼠 只，体质量 ，购自河南省实验动物中心，存放于黄河科技学院动物房，光照 ，温度 ，相对湿度 ，许可证编号（豫 ），自由饮水及摄食（普通饲料 北京环宇中科生物科技有限公司）。实验药品、试剂及仪器 灰树花多糖提取物（批号：）购自西安汇林生物科技有限公司，奥美拉唑肠溶片（山东新时代药业有限公司 批号：）。丙二醛（）试剂盒、谷胱甘肽过氧化酶（）试剂盒、超氧化物歧化酶（）试剂盒（上 海 酶 联 生 物 科 技 有 限 公 司，批 号 、）；胃动素（）试剂盒、胃泌素（）试剂盒、生长抑素（）试剂盒（南京建成生物 技 术 有 限 公 司，批 号：、）；紫外可见分光光度计（上海仪电分析仪器有限公司）、冷冻台式高速离心机（德国 公司），全自动酶标仪（上海伯乐公司）、电子分析天平（沈阳龙腾电子有限公司）。实验步骤与方法 分组方法健康 雄性大鼠 只，体质量 ，采用随机数表法分为空白组 只（全程普通饲料喂养）、实验组 只（全程普通饲料喂养，自由饮食饮水）。实验组随机抽取 只，随机分为模型组、奥美拉唑组（阳性对照组）和灰树花多糖低、中、高、剂量组，每组 只。造模方法除空白组 只正常饮水，其余各组均采用“乙酸灌胃法”制备胃溃疡模型大鼠。造模前先进行预实验，取预实验中最佳造模冰乙酸剂量，即 的冰乙酸溶液灌胃 次 ，灌胃前 禁食不禁水，连续灌胃 次，空白组大鼠用等体积的生理盐水灌胃 。每天观察大鼠的一般情况（皮毛、耳尾颜色、活动度、摄食量、体重、对刺激反应等）。灌胃后，随机抽取造模组和空白对照组大鼠各 只处死，染色观察大鼠胃黏膜出血点、水肿等病理变化。给药方法自造模结束之日起，开始灌胃给药。药物剂量的给予参考王玉芳等主编的 机能实验学 中“人和大鼠按体表面积折算的等效剂量比率表”，将等效剂量的 、倍作为低、中、高剂量，灰树花多糖刘勇华，等：灰树花多糖对胃溃疡大鼠肠激素及氧化因子的影响低、中、高剂量分别给药是 （）、（）、（）；奥美拉唑组（阿斯利康）按人剂量的 倍计算大鼠有效剂量，即 （）灌胃；空白组和模型组大鼠则以等体积生理盐水灌胃。给药方式均为灌胃，各组每日给药 次，给药时间持续 周。大鼠血清 、检测空白组和药物干预的大鼠称重，应用 水合氯醛（）腹腔注射麻醉，固定，腹腔静脉取血。采用 法测定 、，实验操作严格参照 试剂盒说明，检测各组大鼠血清 （）、（）、（）水平。大鼠血清氧化指标检测空白组和药物干预的大鼠称重，应用 水合氯醛（）腹腔注射麻醉，固定，腹腔静脉取血。应用 比色法测定 ，采用胺法测定 的活力，应用化学比色法测定大鼠 。统计学方法应用 软件处理实验数据，结果以均数 标准差（珋 ）表示，比较各组间均数采用方差分析，组间两两比较采用 检验（组间比较用最小显著性差异法（，），以 为有统计学差异，为有显著性差异。结果与分析 实验大鼠一般情况观察空白组大鼠摄食饮水及二便均正常，耳爪尾颜色正常，毛色光滑，活动良好，抓持时剧烈挣扎；与空白组比较，模型组大鼠摄食饮水及二便均有所下降，耳爪尾颜色略苍白，毛发无光泽，活动迟缓，抓持时仅轻微挣扎，抓力明显下降；与模型组相比，药物干预组较模型组大鼠上述情况均有所好转。实验过程中大鼠死亡记录：造模组大鼠因胃黏膜严重出血死亡 只，另取 只解剖 染色观察胃黏膜病理变化，造模成功 只大鼠，随机取 只纳入正式实验。灰树花多糖对胃溃疡大鼠血清 、和 的影响由表 可见：模型组较空白组大鼠血清中 和 水平显著降低（），水平有升高趋势，但无统计学意义（）。和模型组相比，灰树花多糖低、中、高剂量组、奥美拉唑组的 水平显著升高（或 ），奥美拉唑组、灰树花多糖中、高剂量组的 水平显著降低（）；灰树花多糖中、高剂量组的 水平显著升高（），低剂量组的 、水平无统计学意义（）；奥美拉唑组、灰树花多糖高剂量组的 含量相当（）。表 灰树花多糖对急性胃损伤大鼠血清 、和 的影响（珋 ）组别 （）（）（）空白组 模型组 奥美拉唑组 灰树花多糖低剂量组 灰树花多糖中剂量组 灰树花多糖高剂量组 注：与空白组比较，；与模型组比较，；与奥美拉唑组比较，。灰树花多糖对胃溃疡大鼠血清 、和 的影响由表 可见：和空白组相比，模型组大鼠血清中 、水平显著升高（），奥美拉唑组、灰树花多糖中、高剂量组 、水平降低（或 ）；和模型组相比，药物干预组 、水平降低（或 ），灰树花多糖高剂量组的 水平显著降低（）；灰树花多糖中、高剂量组的 、水平较低剂量组降低（）。黄河科技学院学报表 灰树花多糖对急性胃损伤大鼠血清 、和 的影响（珋 ）组别 （）（）（）空白组 模型组 奥美拉唑组 灰树花多糖低剂量组 灰树花多糖中剂量组 灰树花多糖高剂量组 注：与空白组比较，；与模型组比较，；与奥美拉唑组比较，。讨论胃溃疡是一种常见多发的消化系统溃疡性疾病，往往因为一些物理及化学因素的诱导刺激，引起胃黏膜的氧化应激反应、细胞炎性因子增多、血液流动减少等表现，使患者出现上腹节律性疼痛、恶心呕吐以及消瘦，严重者导致消化道出血。胃肠激素主要是指胃肠道的黏膜细胞分泌的激素，可通过血液循环对靶细胞产生作用。在神经系统作用下，胃肠激素发挥调理消化器官的功能，主要包括调节消化腺的分泌和胃肠的运动，有利于调节胃肠功能。血清胃泌素（）是研究最多的一种胃肠激素，是由胃窦和十二指肠近端黏膜中 细胞分泌的胃肠激素，促进胃酸分泌是它重要的生理功能之一，并且能促使胃窦的收缩以及下食管括约肌的收缩，进而刺激胆囊、胃及胰腺分泌，促进消化 。血清生长抑素（）能抑制胃酸和胃蛋白酶的分泌 ，在消化性溃疡或应激性胃黏膜损伤治疗中发挥重要作用。生长抑素主要通过抑制胃窦 细胞释放胃泌素；直接抑制壁细胞分泌 的功能等途径来抑制胃酸分泌。同时生长抑素能有效抑制胃蛋白酶的释放，促进血小板凝集，并且可以改善微循环促进黏膜修复。主要存在于胃肠道黏膜的 细胞中，其中胃体和胃窦部的含量最高，可抑制胃泌素、胃动素、胰高血糖素等的释放 ，可抑制胃蛋白酶、胃泌素的释放，减少胰腺的内外分泌以及胃小肠和胆囊的分泌，降低酶活性，影响胃肠道吸收和营养功能。胃动素（）可以促进和影响胃肠运动及胃肠道对水、电解质的运输，其主要通过激发消化间期肌电活动相，促进胃收缩和小肠分节运动。另外胃动素尚有增加结肠运动的作用，故血浆胃动素水平升高，肠道蠕动加速，使肠内容物通过加快。本研究数据显示，和空白组相比，模型组大鼠血清中 水平显著降低（），药物干预组 水平降低（或 ），模型组 、水平显著升高（或 ），药物干预组 、水平降低（或 ）；和模型组相比，奥美拉唑组、灰树花多糖中剂量、高剂量组的 、水平降低（或 ），水平降低（）；灰树花多糖高剂量组的 、水平显著降低（）。说明灰树花多糖干预组血清 、水平与模型组比较降低程度更明显，可见灰树花多糖能明显降低胃溃疡大鼠 、和 分泌，延缓胃排空，抑制胃肠动力，达到治疗胃溃疡目的，且灰树花多糖高剂量效果更明显。是存在于生物体内抑制和防御自由基损伤的主要酶类之一，其功能是催化氧自由基的歧化反应，消除超氧阴离子自由基的作用 ，降低自由基对不饱和脂肪酸的作用，减少脂质过氧化物的生成，对机体起到保护作用 。是过氧化物脂质代谢的产物，其水平升高可破坏胃细胞膜的双分子脂质结构 。谷胱甘肽过氧化物酶是机体内的催化过氧化氢分解的酶，它特异的催化还原型谷胱甘肽等肽对过氧化氢的还原反应 ，可以起到保护细胞膜结构和功能完整的作用 。本研究实验结果显示：模型组 的表达升高（），、的表达降低（或 ），药物干预组 、的水平较模型组升高，但 水平较模型组降低（或 ）。说明模型组 的水平表达升高，、刘勇华，等：灰树花多糖对胃溃疡大鼠肠激素及氧化因子的影响的水平表达降低可以使自由基对胃黏膜造成损伤。灰树花多糖通过提高细胞内 、水平的表达，降低细胞内 水平的表达，从而预防和阻止自由基对胃黏膜的损伤起到保护胃黏膜的作用。且随着灰树花多糖浓度的提高 、都趋于升高。结论灰树花多糖具有降低肠激素 、的含量，提高 、的活力作用，为灰树花多糖治疗胃溃疡和胃肠功能异常提供新思路。参考文献：凌云 中药联合奥美拉唑治疗胃溃疡的临床观察 中医临床研究，（）：吕帅宜，林开文，邓雨婷，等 山奈素对小鼠乙醇型胃溃疡的影响及其机制 江苏大学学报（医学版），（）：，牛美兰，夏康康，梁亚双，等 黄精多糖对急性胃黏膜损伤大鼠肠胃功能的影响 黄河科技学院学报，（）：，王玉芳，金宏波 机能实验学 北京：高等教育出版社，：黄铭涵，王文荣，黄健，等 中药复方清化饮对慢性萎缩性胃炎大鼠血清 、及血浆 的影响 西安交通大学学报（医学版），（）：王关林，李丹琪 黄芪建中汤加减治疗脾胃虚寒型胃溃疡的疗效及血清胃泌素、生长抑素水平的影响 白求恩医学杂志，（）：冀渤海，梁靓靓 柴枳夏及汤对胆汁反流性胃炎大鼠血清及血浆中胃动素、血管活性肠肽、生长抑素表达的影响 陕西中医，（）：，（）：，：胡雨峰，俞晶华，陈亮，等 加味半夏厚朴汤对 模型大鼠血 、含量变化的影响 南京中医药大学学报，（）：余二伟，张连贵，赵平丽，等 加味阳和汤治疗慢性上颌窦炎合并胃溃疡的临床疗效观察 中医临床研究，（）：，：，（）：许朝霞，丁明桥，陈瑞 化纤方对肺纤维化模型大鼠肺组织匀浆中 活性及 含量的影响 中华中医药学刊，（）：黄河科技学院学报