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生物制药培训心得体会[最终版]
名词解释
1、固定化酶。指固定在载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。
2、生物转化。是利用细胞或酶作为催化剂进行物质转化，大规模生产化学品、医药、能源、材料的科学。
3.包涵体。是外源基因的高表达产物在原核细胞中积累，并致密地聚集在一起形成的一种水不溶性蛋白质结构。
4、胞质体。指不具有细胞核而仅有细胞质的细胞。
5、虚拟筛选。利用计算机技术对先导化合物进行筛选的方法。
6、单克隆抗体。把能分泌某种特异抗体的一个b型淋巴细胞分离出来，通过纯种培养所产生的抗体只有一种，可以特异性地和体内一种抗原结合，这种单一的特异性抗体即为单一b细胞克隆抗体，即单克隆抗体。
7、生源。是强调次级代谢产物分子的装配单位的来源。
8、酶的非水相催化。酶在非水催化介质中进行的催化作用。填空
1、hts：高通量筛选
2、外源dna导入受体细胞的方法：
3、药物发酵培养基通常由碳源、氮源、无机盐类、生长
因子和前体物等组成。
4、哺乳动物细胞培养中，培养基中的葡萄糖为其主要的
能源物质。
5、基因调控理论中，与酶生物合成密切相关的基因有调
节基因、启动基因、操纵基因和结构基因。
6、常用于制备植物原生质体的酶有纤维素酶、果胶酶、
崩溃酶、半纤维素酶、蜗牛酶。
7、组织纤溶酶原激活剂、抗hbsag的单克隆抗体等药
物可用动物细胞培养技术生产。
8、基因工程制药中常用的克隆载体包括质粒载体、λ噬
菌体载体、黏粒载体、m13噬菌体载体、病毒载体。
9、pcr的每一循环通常包括变性、退火、延伸三个步骤。
10、发酵生产中常用的灭菌方法有化学物质灭菌、辐
射灭菌、过滤介质除菌和热灭菌（干热灭菌/湿热灭菌）。
11、用植物细胞培养生产的药物有烟草、人参、洋地
黄、黄连等。
12、目的基因的制取主要有构建基因文库法和酶促
合成法。
13、淄体药物的生物转化工艺中常用的转化方法有
一步发酵转化法，静息细胞、干细胞或孢子悬浮液法，多菌种协同转化法，固定化细胞或固定化酶转化法双水相系统转化法，有机相介质转化法。
简答/问答
1、酶法制药工艺中酶（菌体）固定化方法（p214）①吸附法②包埋法：凝胶包埋法/半透膜包埋法③
结合法：离子键结合法/共价键合成法④交联法
⑤热处理固定法
2、pcr扩增原理（p68）
首先使双链dna在反应液中热变性而分开成单链，然后在低温下与两个引物进行退火，使引物与单链dna配对结合，再在中温下利用taqdna聚合酶的聚合活性及热稳定性进行聚合（延伸）反应。通过变性、退火、延伸三步骤的往复循环约30次，所扩增的特定dna数量可增至1000000倍。
3、溶解氧、ph对发酵的影响及控制措施（p275）
溶解氧对发酵的影响。一般在发酵前期，生产菌大量繁殖导致需氧量大幅增加，如果此时需氧超过了供氧，会使溶解氧明显下降，相应的，生产菌的摄氧率及发酵液黏度同时出现高峰，说明生产菌正处于对数生长期。过了生长阶段，一般需氧量略有减少，溶解氧随之上升，次级代谢产物开始合成。发酵中后期，溶解氧的浓度明显受工艺控制手段的影响。如工艺控制的不合适，使发酵液中的溶解氧浓度低于临界氧浓度，溶解氧就会成为生产的限制性因素。对于分批发酵来说，溶解氧的浓度变化较小。
溶解氧浓度控制。从供氧方面看，凡是使kla和ＣX增加的因素均能改善发酵液供氧。方法有通入掺入纯氧的空气、提高罐压、改变通风速率、增加功率输入、搅拌，改变罐内结构等。从需氧方面看，菌体需氧量可表示为γ（摄氧速率）＝Ｑｏ２（呼吸强度）·ｘ（菌体浓度）。若氧浓度处于暂时稳定状态，则适合kla·（ＣX－Ｃ）＝Ｑｏ２
ＰＨ对发酵的影响。每一类菌都有其最适的和能耐受的ＰＨ范围，另外ＰＨ还对发酵液或代谢产物产生物理化学影响。
ＰＨ的控制。首先要考虑和试验发酵培养基的基础配方，使他们有合适的配比，也可加入缓冲剂使ＰＨ变化在合适范围内。另外，采用补料的方法，利用ＰＨ电极，通过连续测定并记录ＰＨ的变化，将信号输入ＰＨ控制器运作使发酵液ＰＨ控制在预定数值。
４、什么是细胞融合。促进细胞融合的方法有（p114）
细胞融合是指人为地使两种不同的生物细胞在同一培养器中，用无性的人工方法进行直接接触，产生能同时具有两个亲本细胞有益性状的杂交细胞技术。目前普遍采用聚乙二醇（ＰＥＧ）诱导融合。
５、提高药用酶产量的措施（p194）
①选育优良的产酶细胞②工艺条件的优化控制③高效生物反应器的设计与应用④添加诱导物⑤控制阻遏物的浓度⑥添加表面活性剂⑦添加刺激剂⑧添加产酶促进剂
６、杂交瘤细胞筛选原理（p147）
采用ＨＡＴ培养基，当ＨＧＰＲＴ阴性细胞在ＨＡＴ
上生长时，有序细胞合成核苷酸的主要途径被抑制，嘌呤补救途径缺失，细胞中核酸合成所需要的嘌呤核苷酸缺失，细胞不能生长。而正常细胞中由于补救途径存在，可以保证细胞生长。因此当Ｂ淋巴细胞和ＨＧＰＲＴ阴性骨髓瘤细胞在促融剂作用下融合后，在ＨＡＴ培养基中淋巴细胞在组织培养中不能生长繁殖，一般在５～７ｄ内死亡，骨髓瘤细胞由于不能利用培养基中的二次黄嘌呤导致ＤＮＡ合成受阻，只有杂交瘤细胞由于吸收了淋巴细胞中的补救途径，可在阻断核苷酸合成主要途径下仍可利用培养基中的二次黄嘌呤和胸腺嘧啶获得ＨＧＰＲＴ和ＴＫ的产物以供ＤＮＡ合成所需，而且从骨髓瘤细胞中获得了肿瘤细胞在体外不断生长的特点，最终在ＨＡＴ培养基中选择性的存活下来。
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