流式图入门.doc

流式数据可以用一维直方图、二维散点图、等高线图、密度图等来表示，下面逐一附图说明。
　　1.单参数直方图：
　　每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数，可以是线形（line）或者对数（log）。纵坐标一般是细胞数（count）！如下图：

　　上图中2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图。
　　下图为含有大量非整倍体细胞G0/G1(2.8N)和G2/M(5.6N)。

　　直方图当然不仅仅是用来表示DNA含量的，例如：

　　上图中101～102（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞。
　　这里有一个在常见的问题：如何做M1阴性界限？！实际上，这个M1的划分完全是根据阴性对照来的！如下图：红色部分代表阴性对照，即：您所检测 的物质在阴性组中的基础表达量，可以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。蓝色部分即阳性组，也就是接受刺激后，功能状态下、药物作用后等。

　　如果您还要问：怎么这么巧，正好在101这儿划分？？呵呵，原来偶也这么“傻傻”地问过！
　　因为我们可以人为地将电压，放大调到相应的大小以达到阴性的右边界在某一个值上，这样后期做sample时好看！当然您也可以调到10的2次方，3次方。
　　只要机器电压允许，阳性组还有地方放得下。
　　2.散点图：
　　用一个例子来说明：

　　左上：CD4＋
　　右下：CD8＋
　　左下：CD4－/CD8－
　　右上：CD4＋/CD8＋
　　散点图常被用来分析多参数数据，如上面CD分子的表达，以及凋亡周期特异性，早期凋亡的检测等！如下图：AnnexinV-FITC/PI染色。

　　关于AnnexinV-FITC/PI染色右上角的意义，现在有几种说法：
　　1）坏死＋晚期凋亡
　　2）晚期凋亡
　　3）坏死（如下图）

　　4）其它：（如下图）

　　我们实验室倾向与第一种说法！大家做实验时要注意！！
　　散点图可以用来进行多参数分析，上面已经提到。至于参数选择，就可以自己选择了，也许您可以发明一种新的方法来作为试验平台呢！
　　3.等高线图和密度图
　　这两种图其实就是密度图的变化，等高线图和地图一样。密度图则与等高线图密切联系，密度高的地方颜色就偏红些。