关中奶山羊睾丸发育和衰老代谢谱分析.pdf

第5 1卷 第9期2 0 2 3年9月西北农林科技大学学报(自然科学版)J o u r n a l o f N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y(N a t.S c i.E d.)V o l.5 1 N o.9S e p.2 0 2 3网络出版时间:2 0 2 3-0 3-0 8 0 9:4 1 D O I:1 0.1 3 2 0 7/j.c n k i.j n w a f u.2 0 2 3.0 9.0 0 3网络出版地址:h t t p s:/k n s.c n k i.n e t/k c m s/d e t a i l/6 1.1 3 9 0.S.2 0 2 3 0 3 0 6.1 7 2 1.0 0 3.h t m l关中奶山羊睾丸发育和衰老代谢谱分析 收稿日期 2 0 2 2-0 4-1 2 项目基金 陕西省农业科技创新驱动项目(NY K J-2 0 2 1-S T-0 2);陕西省农业协同创新与推广联盟项目(LM Z D 2 0 2 0 0 2)作者简介 王 广(1 9 9 7-),男,宁夏灵武人,在读硕士,主要从事动物遗传育种及繁殖学研究。E-m a i l:1 9 7 0 8 8 6 4 5 1q q.c o m 通信作者 李 广(1 9 6 5-),男,陕西蒲城人,研究员,硕士,硕士生导师,主要从事动物营养与繁殖育种研究。E-m a i l:l i g u a n g d k y 1 6 3.c o m王 广,李德娴,张永涛,邹家浩,李雪清,余梦琦,陈 璐,袁宇欣,李 广(西北农林科技大学 动物科技学院,陕西 杨凌 7 1 2 1 0 0)摘 要【目的】对体成熟和老龄关中奶山羊睾丸进行代谢组学分析,探究关中奶山羊睾丸衰老代谢规律,为睾丸衰老症提供代谢标志物。【方法】根据关中奶山羊年龄、体质量和精液质量,选择体成熟(2 4月龄,C组)和老龄(6 0月龄,T组)关中奶山羊公羊各6只,采集双侧睾丸组织样本,使用液相色谱串联质谱(L C-M S/M S)方法对睾丸组织代谢物进行检测分析,利用多维和单维相结合的统计方法对2组不同代谢物进行检测、对比与鉴别,通过富集差异代谢物筛选关中奶山羊睾丸发育和衰老代谢中的潜在关键通路。【结果】L C-M S/M S检测到2组关中奶山羊睾丸中有1 2 9种差异代谢物,与T组相比,C组有7 4种代谢物显著上调,5 5种显著下调;对前3 5个差异代谢物进行比较鉴定发现,2 1个显著上调,1 4个显著下调。通过对不同代谢产物的富集和分析,获得了9条潜在的关键代谢途径,即铁死亡、A B C转运蛋白、谷胱甘肽代谢、精氨酸生物合成、氨基酸糖和核苷酸糖代谢、胆碱在肿瘤中的代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、嘌呤代谢及牛磺酸和亚牛磺酸代谢。【结论】筛选出了与关中奶山羊睾丸发育和衰老相关的1 2 9种差异代谢物,鉴定了前3 5种差异代谢物,获得了9条潜在的关键代谢通路。关键词 代谢组学;睾丸;衰老代谢;关中奶山羊 中图分类号 S 8 2 7.1 文献标志码 A 文章编号 1 6 7 1-9 3 8 7(2 0 2 3)0 9-0 0 2 1-0 8M e t a b o l i c s p e c t r u m a n a l y s i s o f t e s t i c u l a r f u n c t i o n o f G u a n z h o n g d a i r y g o a t s d u r i n g d e v e l o p m e n t a n d a g i n gWAN G G u a n g,L I D e x i a n,Z HAN G Y o n g t a o,Z OU J i a h a o,L I X u e q i n g,YU M e n g q i,CHE N L u,YUAN Y u x i n,L I G u a n g(C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e a n d T e c h n o l o g y,N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y,Y a n g l i n g,S h a a n x i 7 1 2 1 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:【O b j e c t i v e】T h i s s t u d y i n v e s t i g a t e d t h e m e t a b o l i c p a t t e r n o f t e s t i c u l a r s e n e s c e n c e i n G u a n z h o n g d a i r y g o a t s b y m e t a b o l i c a n a l y s i s o n t e s t e s o f m a t u r e a n d o l d G u a n z h o n g d a i r y g o a t s t o p r o v i d e m e t a b o l i c m a r k e r s f o r t e s t i c u l a r s e n e s c e n c e.【M e t h o d】B a s e d o n a g e,b o d y m a s s a n d s e m e n q u a l i t y,s i x r a m s w e r e s e l e c t e d f r o m e a c h g r o u p o f m a t u r e(2 4 m o n t h s o l d,g r o u p C)a n d o l d(6 0 m o n t h s o l d,g r o u p T)G u a n z h o n g d a i r y g o a t s,a n d b i l a t e r a l t e s t i c u l a r t i s s u e s a m p l e s w e r e c o l l e c t e d.T w o g r o u p s o f m e t a b o l i t e s w e r e d e t e c t e d,c o m p a r e d a n d i d e n t i f i e d u s i n g a c o m b i n a t i o n o f m u l t i d i m e n s i o n a l a n d u n i d i m e n s i o n a l s t a t i s-t i c a l m e t h o d s t o s c r e e n p o t e n t i a l k e y p a t h w a y s i n t e s t i c u l a r d e v e l o p m e n t a n d s e n e s c e n c e m e t a b o l i s m b y e n-r i c h i n g d i f f e r e n t i a l m e t a b o l i t e s.【R e s u l t】L C-M S/M S d e t e c t e d 1 2 9 d i f f e r e n t i a l m e t a b o l i t e s i n t e s t e s o f G u a n z h o n g d a i r y g o a t s.C o m p a r e d t o g r o u p T,7 4 m e t a b o l i t e s w e r e s i g n i f i c a n t l y u p-r e g u l a t e d a n d 5 5 w e r e s i g n i f i c a n t l y d o w n-r e g u l a t e d i n g r o u p C.A n a l y s i s o n t h e f i r s t 3 5 d i f f e r e n t i a l m e t a b o l i t e s s h o w e d t h a t 2 1 w e r e s i g n i f i c a n t l y u p-r e g u l a t e d a n d 1 4 w e r e s i g n i f i c a n t l y d o w n-r e g u l a t e d.T h e e n r i c h m e n t a n d a n a l y s i s o f d i f f e r e n t i a l m e t a b o l i t e s o b t a i n e d 9 p o t e n t i a l k e y m e t a b o l i c p a t h w a y s,n a m e l y i r o n d e a t h,A B C t r a n s p o r t e r p r o t e i n,g l u t a t h i o n e m e t a b o l i s m,a r g i n i n e b i o s y n t h e s i s,a m i n o a c i d s u g a r a n d n u c l e o t i d e s u g a r m e t a b o l i s m,c h o l i n e m e t a b o l i s m i n t u m o r s,a r g i n i n e a n d p r o l i n e m e t a b o l i s m,p u r i n e m e t a b o l i s m a n d t a u r i n e/s u b-T a u-r i n e m e t a b o l i s m.【C o n c l u s i o n】A t o t a l o f 1 2 9 d i f f e r e n t i a l m e t a b o l i t e s w e r e s c r e e n e d,t h e f i r s t 3 5 d i f f e r e n t i a l m e t a b o l i t e s w e r e i d e n t i f i e d,a n d 9 p o t e n t i a l k e y m e t a b o l i c p a t h w a y s w e r e o b t a i n e d.K e y w o r d s:m e t a b o l o m i c s;t e s t i s;a g i n g m e t a b o l i s m;G u a n z h o n g m i l k g o a t 关中奶山羊是陕西关中地区的优良奶山羊品种,一般在2 4月龄达到生理成熟,6 0月龄开始衰老。在生产实践中,关中奶山羊公羊常发生睾丸发育不良的问题,出现弱精子、少精子、畸形精子和无精子等症状,尤其是在衰老阶段,这给关中奶山羊产业带来了不必要的损失。睾丸的主要功能是产生精子和分泌雄激素,睾丸老化一方面会引起雄激素缺乏,导致性功能障碍、骨质疏松、肥胖和代谢综合征等全身症状,另一方面会导致生精功能减退和生育力下降1-3。李英英等4研究证明,老化是指机体组织脏器所出现的退行性变化,与年龄呈正相关。贾雪梅等5认为,机体衰老以性功能改变为特点,动物睾丸老化是指睾丸功能随着年龄的增加而逐渐衰退的过程3,6-7。H a n等8比较分析了衰老小鼠睾丸的转录组,结果发现一些与小鼠睾丸衰老相关的mR NA s和l n c R NA s。H u a n g等9通过小鼠衰老试验提供了雄性睾丸组织R NA-s e q资源,探究了雄性生殖衰老和不育的分子机制。M a t z k i n1 0认为,睾丸衰老过程中发生的炎症、氧化和凋亡均与年龄有关。因此,关中奶山羊的身体衰老时,睾丸中的代谢物质也会发生变化,其作用机制值得探究。代谢组学是一门探索代谢产物动态变化与疾病发生关系的新学科,代谢物作为生化反应的终点,反映了生物功能的最终效果,可以作为疾病发生的标志1 1-1 2。目前,生物代谢组学的研究方法较多2,1 3,其中液相色谱串联质谱(L C-M S/M S)技术通过多阶段质谱来测定化合物的结构,在测定低分子量代谢物和微量残留物方面具有重要技术优势2,1 4。为此,本研究采用L C-M S/M S技术,结合多维和单维分析方法,对体成熟和衰老关中奶山羊睾丸的代谢谱进行分析,以探究体成熟到衰老过程中发生显著变化的代谢产物和代谢途径,为进一步研究关中奶山羊睾丸衰老机制提供理论依据。1 材料与方法1.1 试剂与仪器甲醇、甲酸、水和乙腈,购自赛默公司;L-2-氯苯丙氨酸,购自上海恒创生物科技有限公司。其他化学试剂均为国产分析纯级或色谱纯级试剂。全自动样品快速研磨仪(W o n b i o-E),购于上海万柏生物科技有限公司;超声波清洗机(F-0 6 0 S D),购于深圳福洋科技集团有限公司;台式高速冷冻离心机(T G L-1 6 M S),购于上海卢湘仪离心机仪器有限公司;冷冻浓缩离心干燥器(L NG-T 9 8),购于太仓市华美生化仪器厂;高分辨率质谱仪(Q E p l u s)和超高效液相色谱仪(D i o n e x U 3 0 0 0 UH P L C),购于赛默飞世尔科技公司;色谱柱(A C QU I T Y U P L C H S S T 3(1 0 0 mm2.1 mm,1.8 m),购于W a-t e r s公司。1.2 动物分组与样品采集试验于2 0 2 1年5月至2 0 2 2年2月在陕西省宝鸡市陇县和氏羊场进行,试验羊的处理严格按照西北农林科技大学动物福利委员会的有关规定进行。选择体成熟(2 4月龄,C组)和老龄(6 0月龄,T组)关中奶山羊公羊各6只,健康状况良好,饲养环境相同,C组公羊体质量(6 2.0 01.5 0)k g,射精量为(2.0 90.3 3)m L,精子活力为0.7 90.1 2;T组体质量为(5 8.0 01.7 5)k g,射精量 为(0.9 50.3 8)m L,精子活力为0.4 00.1 8。利用手术去势法分别采集C组和T组公羊睾丸组织,立即用生理盐水洗去表面血渍,随即在超净台下对睾丸组织进行切割,然后迅速投入-1 9 6 液氮中保存,3 h后取出,放入-8 0 冰箱储存备用。1.3 睾丸样品的前处理室温下解冻睾丸样本后,用天平准确称取3 0 m g组织样品放入1.5 m L E P管中,添加内标(甲醇配制的0.3 m g/m L L-2-氯苯丙氨酸)2 0 L,加4 0 0 L甲醇-水(V(甲醇)V(水)=41)溶液,然后加入2个小钢珠,在-2 0 冰箱中预冷2 m i n后,放入研磨机研磨(6 0 H z,2 m i n);在冰水浴中超声提取1 0 m i n,-2 0 下静置1 0 m i n;离心1 0 m i n(1 3 0 0 0 r/m i n,4),取3 0 0 L上清液放入L C-M S进样瓶中蒸发;用3 0 0 L甲醇-水(V(甲醇)V(水)=14)溶液重新溶解(涡旋3 0 s,超声处理3 m i n),在22西北农林科技大学学报(自然科学版)第5 1卷-2 0 低温下静置约2 h;1 3 0 0 0 r/m i n离心1 0 m i n(4),用注射器吸取1 5 0 L上清液,通过0.2 2 m的有机相针孔过滤器过滤后,转移至L C进样小瓶,用于L C-M S分析。试验中,每种提取试剂使用前均在-2 0 冰箱中预冷。质量控制样本(Q C)的制备:从C组和T组中随机各取2个样本的提取液等量混合作为一个Q C样本,共组成3个Q C样本,每个Q C样本的总体积与原样本提取液体积一致。1.4 样品的L C-M S检测L C-M S检测在超高效液相色谱仪串联Q E p l u s高分辨率质谱仪组成的液相色谱-质谱系统中进行。色谱条件:色谱柱(A C QU I T Y U P L C H S S T 3(1 0 0 mm2.1 mm,1.8 m);柱温4 5,流动相a为体积分数0.1%的甲酸水溶液,流动相b为体积分数0.1%的甲酸乙腈溶液,流速0.3 5 m L/m i n,进样标准体积2 L。采用正离子和负离子扫描模式采集关中奶山羊睾丸样品的质谱数据,质谱条件:离子源(E S I)电喷雾电离,喷雾电压3 8 0 0-3 0 0 0 V,毛细管温度3 2 0,辅助气体加热器温度3 5 0,鞘流气体流速为3 5 A r d,辅助气流速8 A r d,S-l e n R F 水平5 0,质量范围1 0 01 2 0 0,全分辨率7 0 0 0 0,M S/M S分辨率1 7 5 0 0,N C E/s t e p p e d N C E(1 0,2 0,4 0)。1.5 数据处理与统计分析1.5.1 原始数据的预处理与有效数据的提取 原始数据采用代谢组学处理软件P r o g e n e s i s Q I v 2 3(N o n l i n e a r D y n a m i c s,N e w c a s t l e,UK)进行基线过滤、峰识别、积分、保留时间校正、峰对齐和归一化处理,化合物鉴定采用精确的质量电荷比(m/z)、二级片段 和 同 位 素 分 布,使 用 人 类 代 谢 组 数 据 库(HMD B)、L i p i d m a p s(V 2.3)和ME T L I N数据库以及自建数据库进行定性分析,并通过检测化合物的定量结果进一步处理提取的数据。对提取到的数据,删除组内缺失值均(0值)5 0%的离子峰,并将0值用最小值的一半替换,根据化合物定性结果打分(S c o r e),对定性得到的化合物进行筛选,筛选标准为3 6分(满分6 0分),3 6分以下视为定性结果不准确并删除,最后将采用正、负离子扫描模式得到的质谱数据合并成一个数据矩阵表,该矩阵包含了由原始数据提取到的所有可以用于分析的信息,后续分析均以此为基础。1.5.2 有效数据的检验 对获得的有效数据进行多元统计分析和单变量统计分析,以检验2组关中奶山羊睾丸组织代谢物是否存在差异,有无必要进行进一步的代谢谱分析。(1)多 元 统 计 分 析。将 所 得 数 据 矩 阵 输 入S I MC A 1 4.0软件系统(Um e t r i c s A B公司)完成模式识别,先使用主成分分析(P C A)鉴定2组样品区间的总体分布情况及整个分析流程的稳定性,对2组代谢物进行主成分分析还能从总体上反应组间和组内的变异度。为弥补P C A方法的不足,再采用有监督的正交偏最小二乘判别分析(O P L S-D A)区分2组样品间的代谢物组分差异,然后根据O P L S-D A模型得到变量权重值(v a r i a b l e i m p o r t a n c e o f p r o-j e c t i o n,V I P),依据V I P1的原则找到潜在生物标记物,为了防止O P L S-D A模型过拟合,再通过7次交互验证(7-f o l d c r o s s v a l i d a t i o n)和2 0 0次响应排序检验(r e s p o n s e p e r m u t a t i o n t e s t i n g,R P T)来评估模型的拟合度和质量。(2)单变量统计分析。根据F i e h n数据库对2组关中奶山羊睾丸组织代谢物进行分配,计算C组代谢物相较于T组同种代谢物的差异倍数(F C),进一步计算l b F C,l b F C0表示上调,l b F C1且P1.3 0表示差异显著,-l g P1.3 0表示差异不显著,最后将MB R o l e(h t t p:/c s b g.c n b.c s i c.e s/m b r o l e/)与K E G G(京都基因百科全书)相结合,对T组和C组关中奶山羊睾丸组织代谢谱进行代谢途径富集分析。2 结果与分析2.1 2组关中奶山羊睾丸组织L C-M S检测结果的多元统计分析2.1.1 P C A分析 从图1可以看出,第1主成分(P C 1)的贡献率为3 7.7%,第2主成分(P C 2)的贡献率为1 2.6%,总贡献率为5 0.3%。从第2主成分方向看,C组样本大多在P C 2负轴上,T组样本全部在P C 2正轴上,2组样本在P C 1表现出组内聚32第9期王 广,等:关中奶山羊睾丸发育和衰老代谢谱分析集,在P C 2表现出组间差异,表明C组和T组代谢物存在一定差异;质控组(Q C)样本密集分布在P C 2正轴上。P C 1轴累积解释率(R2X)为0.5 3 4,样本在9 5%的置信区间内,表明C组和T组代谢物存在差异,P C A分析模型可靠,分析方法稳定,数据可靠。2.1.2 O P L S-D A分析 从图2可以看出,C组分布在置信区间的左侧,T组分布在置信区间的右侧,说明O P L S-D A模型能够对2组样本代谢物进行有效区 分。O P L S-D A模 型 交 叉 验 证 参 数R2X为0.8 2,Y轴累积解释率R2Y为0.8 9 7,累积预 测率Q2=0.5 6 1,均大于0.5,说明模型的可解释度和可预测性良好,能够有效解释2组睾丸样本之间的代谢物组分差异。2.1.3 O P L S-D A模型的检验 如图3所示,对O P L S-D A模型进行响应排序检验的参数q2值呈向上趋势,说明置换检验可靠,O P L S-D A模型不存在过度拟合的现象,可用于分析2组睾丸样本之间的代谢物差异。每个点代表一个样本,所有样本都在9 5%的置信区间内E a c h p o i n t r e p r e s e n t s a s a m p l e,a n d a l l s a m p l e s a r e w i t h i n t h e 9 5%c o n f i d e n c e i n t e r v a l图1 基于体成熟(C组)和老龄(T组)关中奶山羊睾丸L C-M S获得的P C A得分图F i g.1 P C A s c o r e s o b t a i n e d b y L C-M S o f t e s t i s o f G u a n z h o n g d a i r y g o a t b a s e d o n b o d y m a t u r i t y(C g r o u p)a n d a g i n g(T g r o u p)图2 基于体成熟(C组)和老龄(T组)关中奶山羊睾丸L C-M S获得的O P L S-D A得分图F i g.2 O P L S-D A s c o r e s o b t a i n e d b y L C-M S o f t e s t i s o f G u a n z h o n g d a i r y g o a t b a s e d o n b o d y m a t u r i t y(C g r o u p)a n d a g i n g(T g r o u p)图3 基于体成熟(C组)和老龄(T组)关中奶山羊睾丸L C-M S的P e r m u t a t i o n图F i g.3 P e r m u t a t i o n d i a g r a m o f L C-M S o f G u a n z h o n g d a i r y g o a t t e s t i s b a s e d o n s o m a t i c m a t u r i t y(C g r o u p)a n d a g i n g(T g r o u p)2.2 2组关中奶山羊睾丸组织L C-M S检测结果的单变量统计分析计算结果表明,C组关中奶山羊睾丸组织共有1 2 9种代谢物与T组相比差异显著,其中7 4种显著上调,5 5种显著下调。2.3 2组关中奶山羊睾丸组织的差异代谢物鉴定从1 2 9种差异代谢物中选取差异较大的前3 5种代谢物进行鉴定,结果见表1。由表1可知,3 5种代谢物分属于7大类物质,其中有机酸及其衍生物有1 3种,脂质和类脂质分子有9种,核苷、核苷酸和类似物有8种,有机氧化合物有2种,苯丙烷和聚酮化合物、有机氮化合物、有机杂环化合物各有1种;与T组相比,C组奶山羊4-(谷氨酰胺)丁酸酯、5-L-谷氨酰-L-丙氨酸、L-谷氨酸、N-琥珀酰-L,L-2,6-二氨基庚二酸酯、P C(1 6:1(9 Z)/P-1 8:1(1 1 Z)、3,5 -二磷酸腺苷、G D P-L-岩藻糖、UD P-葡萄糖、尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖、葡萄糖胺、鸟嘌呤等2 1种代谢物上调,乙醇酸、胍乙酸、菜油甾醇、牛磺胆酸、半乳糖1-磷酸、2-羟基肉桂酸、左旋肉碱等1 4种代谢物下调。42西北农林科技大学学报(自然科学版)第5 1卷表1 体成熟和老龄关中奶山羊睾丸的差异代谢物T a b l e 1 D i f f e r e n t i a l m e t a b o l i t e s i n t e s t e s o f m a t u r e a n d a g e d G u a n z h o n g d a i r y g o a t s代谢物分类M e t a b o l i t e s t y p e代谢物名称M e t a b o l i t e s n a m e保留时间/m i nR e t e n t i o n t i m e l b(F C)变量权重值V I P v a l u eP值P v a l u e差异倍数F C离子模式l o n m o d e有机酸及其衍生物O r g a n i c a c i d s a n d d e r i v a t i v e s4-(谷氨酰胺)丁酸酯4-(G l u t a m y l a m i n o)b u t a n o a t e1.0 9 10.9 0 02.0 9 10.0 0 21.8 6 6+5-L-谷氨酰-L-丙氨酸5-L-G l u t a m y l-L-a l a n i n e0.7 5 00.7 2 63.8 0 50.0 0 71.6 5 4+乙醇酸G l y c o l i c a c i d1.0 8 5-0.3 9 32.1 3 400.7 6 1-胍乙酸G u a n i d i n e a c e t i c a c i d0.6 6 7-0.9 5 91.0 1 600.5 1 4+L-精氨酸L-A r g i n i n e0.6 5 3-0.6 1 12.8 3 20.0 1 70.6 5 4+L-胱氨酸L-C y s t i n e0.6 6 7-1.1 5 51.3 2 20.0 2 60.4 4 9+L-谷氨酸L-G l u t a m a t e0.6 6 70.2 4 94.5 1 10.0 2 71.1 8 9+L-组氨酸L-H i s t i d i n e0.5 9 7-0.5 4 61.4 9 70.0 0 70.6 8 4+L-缬氨酸L-V a l i n e0.6 9 5-0.3 0 94.3 9 80.0 1 10.8 0 6+N-乙酰鸟氨酸N-A c e t y l o r n i t h i n e0.7 2 21.1 6 61.1 4 50.0 0 42.2 4 4+N-琥珀酰-L,L-2,6-二氨基庚二酸酯N-S u c c i n y l-L,L-2,6-d i a m i n o p i m e l a t e1.3 0 11.6 4 41.3 3 90.0 0 73.1 2 6+氧化谷胱甘肽 O x i d i z e d g l u t a t h i o n e0.7 5 41.2 8 33.4 4 30.0 1 52.4 3 3-G l u-C y s0.7 6 41.9 4 23.1 0 60.0 4 43.8 4 3+脂质和类脂质分子L i p i d s a n d l i p i d-l i k e m o l e c u l e s3 a,7 a,1 2 a-三羟基-5 b-胆甾烷-2 6-a l3 a,7 a,1 2 a-T r i h y d r o x y-5 b-c h o l e s t a n-2 6-a l1 1.2 3 60.8 4 31.1 8 10.0 4 41.7 9 5+5 b-胆甾烷-3 a,7 a,1 2 a,2 3 R,2 5-戊醇5 b-C h o l e s t a n e-3 a,7 a,1 2 a,2 3 R,2 5-p e n t o l1 1.0 8 11.2 8 61.8 6 50.0 0 82.4 3 9+菜油甾醇C a m p e s t e r o l1 5.0 5 0-8.3 4 71.4 0 40.0 1 40.0 0 3+二十碳五烯酸E i c o s a p e n t a e n o i c a c i d1 1.4 3 6-0.8 4 01.1 4 80.0 1 90.5 5 8+P C(1 6:1(9 Z)/P-1 8:1(1 1 Z)1 3.7 6 03.0 9 31 2.8 7 008.5 3 4+P C(1 8:1(9 Z)/2 2:5(4 Z,7 Z,1 0 Z,1 3 Z,1 6 Z)1 3.7 6 00.7 9 61 1.5 4 00.0 0 11.7 3 7+P C(2 2:5(4 Z,7 Z,1 0 Z,1 3 Z,1 6 Z)/0:0)1 1.1 9 7-0.4 0 41.7 8 40.0 3 40.7 5 5-牛磺胆酸T a u r o c h o l i c a c i d7.3 1 1-3.6 9 01.5 6 70.0 0 70.0 7 7-反式脱氢雄酮t r a n s-D e h y d r o a n d r o s t e r o n e 9.2 0 6-3.9 1 13.2 9 20.0 0 60.0 6 6+核苷、核苷酸和类似物N u c l e o s i d e s,n u c l e o t i-d e s,a n d a n a l o g u e s腺苷A d e n o s i n e1.1 4 60.5 6 03.9 3 70.0 2 41.4 7 4+3,5 -二磷酸腺苷A d e n o s i n e 3,5 -d i p h o s p h a t e0.7 8 21.3 8 61.1 2 70.0 1 02.6 1 4-脱氧胞苷酸d CMP 0.6 6 70.5 4 01.3 8 50.0 4 21.4 5 4+G D P-L-岩藻糖G D P-L-f u c o s e1.0 8 51.3 0 01.0 1 802.4 6 3-鸟苷G u a n o s i n e1.1 9 90.2 2 11.4 8 70.0 2 81.1 6 5-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NA D0.7 5 41.4 0 01.3 0 00.0 1 32.6 3 9-UD P-葡萄糖UD P-g l u c o s e0.7 2 63.3 8 41.2 3 101 0.4 4 3-尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖U r i d i n e d i p h o s p h a t e-N-a c e t y l g l u c o s a m i n e0.7 4 03.0 5 61.2 4 20.0 0 18.3 1 8-有机氧化合物O r g a n i c o x y g e n c o m p o u n d s半乳糖1-磷酸G a l a c t o s e 1-p h o s p h a t e0.6 7 1-0.4 0 93.2 2 90.0 0 60.7 5 3-葡萄糖胺G l u c o s a m i n e0.7 5 00.9 2 02.4 9 20.0 0 71.8 9 3+苯丙烷和聚酮化合物P h e n y l p r o p a n o i d s a n d p o l y k e t i d e s2-羟基肉桂酸2-H y d r o x y c i n n a m i c a c i d1.1 3 2-0.6 1 65.0 3 70.0 2 00.6 5 2+有机氮化合物O r g a n i c n i t r o g e n c o m p o u n d s左旋肉碱L-C a r n i t i n e0.6 8 1-0.8 1 33.4 3 700.5 6 9+有机杂环化合物O r g a n o h e t e r o c y c l i c c o m p o u n d s鸟嘌呤G u a n i n e0.7 5 00.7 7 62.4 2 00.0 0 11.7 1 2+2.4 2组关中奶山羊睾丸组织的代谢通路富集分析对1 2 9种差异代谢物的K E G G I D与代谢物生物学(MB R O L E)途径进行分析,富集睾丸组织发育代谢过程中潜在的差异代谢通路,结果如表2所示。由表2可知,2组睾丸差异代谢物主要富集在2 0条代谢通路上,在这些通路中,真核生物参与的极显著的代谢通路有1 0条(P0.0 1),分别是铁死亡、A B C转运蛋白、谷胱甘肽代谢、精氨酸生物合成、氨52第9期王 广,等:关中奶山羊睾丸发育和衰老代谢谱分析基酰-t R NA生物合成、酒精中毒、氨基酸糖和核苷酸糖代谢、胆碱在肿瘤中的代谢、精氨酸和脯氨酸代谢以及肌萎缩侧索硬化症。真核生物参与的显著的代谢通路有1 0条(P1.5的原则,从上述2 0条通路中筛选出睾丸衰老过程中的潜在代谢通路有9条,详见表3。表3 体成熟和老龄关中奶山羊睾丸衰老代谢潜在通路及相关代谢物T a b l e 3 P o t e n t i a l p a t h w a y s a n d r e l a t e d m e t a b o l i t e s o f a g i n g m e t a b o l i s m i n t e s t e s o f m a t u r e a n d a g e d G u a n z h o n g d a i r y g o a t s潜在代谢通路 P o t e n t i a l m e t a b o l i c p a t h w a y相关代谢物R e l a t e d m e t a b o l i t e s铁死亡F e r r o p t o s i s氧化谷胱甘肽(C 0 0 1 2 7),L-谷氨酸(C 0 0 0 2 5),L-胱氨酸(C 0 0 4 9 1),-G l u-C y s(C 0 0 6 6 9)O x i d i z e d g l u t a t h i o n e(C 0 0 1 2 7),L-G l u t a m a t e(C 0 0 0 2 5),L-C y s t i n e(C 0 0 4 9 1),-G l u-C y s(C 0 0 6 6 9)A B C转运蛋白A B C t r a n s p o r t e r s腺苷(C 0 0 2 1 2),L-精氨酸(C 0 0 0 6 2),L-组氨酸(C 0 0 1 3 5),L-缬氨酸(C 0 0 1 8 3)A d e n o s i n e(C 0 0 2 1 2),L-A r g i