实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/8,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/8,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/8,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/8,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/8,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/8,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2022/1/8,#,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第1页,试验一,ABO,、,Rh,血型判定,目标：,掌握,ABO,正反定型原理、方法及,Rh,血型判定,原理：,通常利用红细胞凝集试验，经过正定型和反定型判定,ABO,血型。,正定型,是用已知血型特异性抗体（抗,-A,、抗,-B,、抗,-D,等分型血清）来测定红细胞上有没有对应抗原；,反定型,是用已知血型试剂红细胞测定血清中有没有对应抗体。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第2页,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第3页,器材,:,小试管、滴管、试管架、离心机、,判定纸板、载玻片、,记号笔、显微镜。,试剂,:,1.ABO,血型抗体：抗,A,、抗,B,；,Rh,血型抗体：抗,D,、抗,C,、抗,c,、抗,E,、抗,e,。,2,3,5,A,型、,B,型及,O,型试剂红细胞。,3.,生理盐水。,标本,:,抗凝静脉血,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第4页,操作,（试管法）,(1),标识试管：,正定型：取洁净小试管,2,支，分别标明,A,、,B,；反定型：取,3,支小试管分别标识,Ac,、,Bc,、,Oc,。,(2),配,5%,悬浮红细胞：,取静脉血,2,滴于小试管中，加,2ml,生理盐水，混匀，,2500r/min,离心,3,分钟，弃上清；重复,3,次。取管底,1,滴压积加,19,滴生理盐水，即为,5%,悬红。,(3),加样：,正定型管,中分别加入,1,滴试剂和,1,滴悬红，,反定型管,中分别加入,2,滴血清和,1,滴试剂红细胞。,（,4,）离心：,3000r,min,离心,15,秒（,1000g,）。,(5),结果：,轻摇试管,观察有没有凝集或溶血现象。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第5页,操作：玻片法,(,判定纸板,),(1),洁净玻片,(,判定纸板,),一张。标,A,、,B,，分别用滴管滴加,A,、,B,试剂,1,滴，再加受检者,3,5,红细胞悬液,l,滴，混匀。,(2),另取洁净玻片,(,或判定纸板,),一张。标,Ac,、,Bc,、,Oc,，各加受检血清,2,滴，再分别滴加,Ac,、,Bc,、,Oc,悬红,1,滴。,(3),室温轻转动玻片,(,或判定纸板,),，使血清与细胞充分混匀连续约,2min,，肉眼观察凝集,(,溶血,),反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第6页,表,l ABO,血型正反定型结果,试剂血清,+,受检红细胞,受检血清,+,试剂红细胞,（正定型）,（反定型）,-A -B,受检血型,Ac Bc Oc,A,B,O,AB,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第7页,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第8页,注意事项,1.,试剂,2.,悬红,3.,蛋白,4.,溶血,5.,冷抗体,6.,老年、儿童,7.,污染,作业,简述,ABO,血型判定正反不一致原因,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第9页,4+,红细胞凝集成一大块，血清清楚透明。,3+,红细胞凝集成大小块，血清清楚。,2+,红细胞凝块分散成许多小块，血清清楚。,l+,肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。,镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。,mf,混合凝集外观（,mixed field,）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。,表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。,红细胞凝集强度判断标准,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第10页,目标,掌握,Rh,血型判定原理、方法。,原理,Rh,血型系统，包含四十几个抗原，通常使用对应抗,C,、抗,c,、抗,D,、抗,E,、抗,e,五种,Rh,分型血清来检验红细胞抗原。,在临床输血中普通只做,D,抗原判定，被检红细胞和抗,D,血清凝集者为,Rh,阳性，不凝集者为,Rh,阴性。,二、,Rh,血型判定,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第11页,器材,小试管、滴管、试管架、记号笔、载玻片、显微镜、离心机。,试剂,1.Rh,抗血清：常见为,IgM,抗,D,。,2.,己知,Rh,阳性和阴性,5,红细胞悬液各,1,份,3.,盐水溶液。,标本,静脉血,。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第12页,操作,(,盐水试管测试法,),1.,取单克隆抗,-D,（,IgM,）,-C,、,-c,、,-E,、,-e,试剂各,1,滴到,5,支试管中。,2.,每管各加,1,滴,3,5,待检红细胞悬液。,3.,充分混匀，以,1000 g,离心,15,秒。,4.,观察结果：轻摇散开试管底部细胞扣，用肉眼观看凝集。,5.,判定结果,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第13页,注意事项,1,如临床上只检验是否为,Rh,阳性，只需用抗,D,血清进行判别，如结果为阴性，应深入检验,排除,Du,型。,2,因抗,e,血清难以得到，故临床上常见四种,Rh,抗血清来定型。,3,Rh,血型判定应严格控制温度与时间，因,Rh,抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇。,4,如判定结果只与抗,D,血清起反应，而与抗,C,、,-c,、,-E,、,-e,都不凝集，则受检者为,Rh,缺失型，以,-D-,表示。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第14页,唾液中,HAB,血型物质测定,【,目标,】,了解唾液,HAB,血型物质测定原理、方法。,【,原理,】,HAB,血型物质也存在于一些人分泌液中。唾液中,HAB,血型物质为半抗原，能特异性地与对应抗体结合，从而抑制抗体与对应红细胞发生凝集。所以利用凝集抑制试验，可测定唾液中,HAB,血型物质，它有利于,ABO,亚型分类及其特殊情况下血型判定,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第15页,【,器材,】,小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机,【,试剂,】,1.,A,、,B,和,O,型红细胞盐水悬液。,2.,最适稀释度抗血清制备（标化血清）,【,标本,】,受检者唾液,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第16页,1.,被检者漱口后留取自然流出唾液,2ml,，将留取唾液,1000g,离心，取上清液置于大试管中，煮沸,10min,，再离心,10min,，留取上清液备用。,2.,排列试管,3,支，分别标明,-A,、,-B,、,-H,，,3,管各加唾液,1,滴，每管加对应,标化血清,1,滴。,3.,混匀，置室温，中和,10min,。,4.,每管加对应悬红,1,滴,.,5.,混匀，离心,15,秒，观察结果,.,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第17页,标化血清,1.,标识,试管,：,3,排,18,支，分别抗,A,、,抗,B,及抗,H,。每排再标,2,、,4,、,8,、,16,.,稀释,：,每管加盐水,50,l,。每排第,1,管,对应,加抗,A,抗,B,及抗,H,血清,50,l,，倍量稀释成,2,、,4,、,8,、,16,稀释液。,.,加,3,悬红：,每,排各管,对应,加,悬红,50,l,，振摇混匀，,1000g,，离心,15,秒。,.,结果：,以,+,为标化血清最适稀释度。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第18页,操作步骤,反应物,抗管,抗管,抗管,受检唾液,d,d,d,标化抗,d,标化抗,d,标化抗,d,混匀，室温中和,10min,%,红细胞,d,%,红细胞,d,%,红细胞,d,混匀室温放置,10min,，离心后观察,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第19页,抗,A,管,抗,B,管,抗,H,管,非分泌型,4,+,4,+,4,+,A,型分泌型,4,+,1 4+,B,型分泌型,4,+,1 4+,0,型分泌型,4,+,4,+,AB,型分泌型,1 3+,结果判定,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第20页,6.,取试管两支分别作阳性及阴性对照管，各加分泌型和非分泌型唾液,l,滴再加抗,H,最适稀释度血清,l,滴，以,3,0,型红细胞作指示，同时进行试验，阳性对照应不凝集，阴性对照应凝集。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第21页,【,注意事项,】,1,假如加热前不离心并,除去沉淀,，任何可能存在细胞可释放,H,物质，使非分泌造成假阳性。,2,欲得到清楚,不含粘液液体,，最好方法是将唾液冰冻保留数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰冻唾液活性可保留几年。,3,可用,5%,白蛋白,代替盐水标化。,.,为预防弱分泌型漏检，同时,盐水对照试验,，比较二者凝集强度。,实验一abo正反定型及rh定型唾液血型物质检测,第22页,