培养基的制备消毒与灭菌.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,培养基的制备消毒与灭菌,培养基的制备消毒与灭菌,第1页,培养基配制试验原理,培养基是人工配制适合微生物生长繁殖或积累代谢产物营养基质。,人工制备培养基目标，在于给微生物创造一个良好营养条件。,培养基的制备消毒与灭菌,第2页,培养基配制要素,营养：碳源、氮源、能源、生长因子、水分和无机盐；,适宜酸碱度,(pH,值,),和一定缓冲能力；,一定氧化还原电位；,培养基的制备消毒与灭菌,第3页,培养基分类,依据微生物种类和试验目标不一样，培养基分类能够按以下方式：,按,成份,不一样分,按培养基,物理状态,分,按培养基,用途,分,培养基的制备消毒与灭菌,第4页,按照培养基成份来分,天然培养基,:,主要成份是复杂天然有机物质：如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基、,LB,等。,合成培养基,:,用化学成份完全了解纯化合物药品配制而成培养基：高氏一号培养基和査氏培养基等。,培养基的制备消毒与灭菌,第5页,按照培养基物理状态,固体培养基,：加入凝固剂，如,1.5%2.0%,琼脂,半固体培养基,：加入少许凝固剂，如,0.2%0.7%,琼脂,液体培养基,：不含任何凝固剂,培养基的制备消毒与灭菌,第6页,按照培养基用途分,基础培养基：如牛肉膏蛋白胨培养基。,营养培养基（加富培养基）：如添加血清、血液等。,判别培养基,：含有特定化合物或试剂。某种微生物在这种培养基上培养后，它所产生某种代谢产物与这种特定化合物或试剂能发生某种显著特征性反应，依据这一特征性反应能够将某种微生物与他种微生物区分开来。,如酪素培养基、伊红美蓝培养基等,选择培养基,：利用微生物对某种化学物质敏感性不一样，在培养基中加入这类物质，抑制不需要微生物生长，而利用所需分离微生物生长，从而到达分离或判别某种微生物目标。,如无氮培养基、马丁氏培养基等。,培养基的制备消毒与灭菌,第7页,加富培养基是用来增加所要分离微生物数量，使其形成生长优势，从而分离到该种微生物；,选择培养基则普通是抑制不需要微生物生长，使所需要微生物增值，从而到达分离所需微生物目标。,加富培养基与选择培养基区分,培养基的制备消毒与灭菌,第8页,牛肉膏蛋白胨培养基制备,应用最广泛细菌基础培养基，普通培养基,牛肉膏：,3 g,蛋白胨：,10 g,NaCl,：,5 g,琼脂：,15-20 g,水：,1000 mL,pH,：,7.47.6,培养基的制备消毒与灭菌,第9页,马铃薯培养基,（,PDA,）,制备,用来培养真菌,马铃薯：,200 g,蔗糖（葡萄糖）,20 g,琼脂：,15-20 g,水：,1000 mL,pH,：自然,马铃薯去皮，切成块煮沸,30,分钟，然后用纱布过滤；,滤液中加入糖和琼脂，溶化后补足水至,1000 mL,。,培养基的制备消毒与灭菌,第10页,高氏,号培养基制备,用来培养放线菌,可溶性淀粉：,20 g,KNO,3,：,1 g,NaCl,：,0.5 g,K,2,HPO,4,3H,2,O,：,0.5 g,MgSO,4,7H,2,O,：,0.5 g,FeSO,4,7H,2,O,：,0.01 g,琼脂：,20 g,水：,1000 mL,pH,：,7.27.4,培养基的制备消毒与灭菌,第11页,无氮培养基制备,用来培养固氮菌,葡萄糖：,10 g,KH,2,PO,4,：,0.2 g,MgSO,4,7H,2,O,：,0.2 g,NaCl,：,0.2 g,CaSO,4,2H,2,O,：,0.2 g,CaCO,3,：,5 g,琼脂：,20 g,水：,1000 mL,pH,：,7.07.2,培养基的制备消毒与灭菌,第12页,豆芽汁培养基制备,用来培养酵母菌,黄豆芽：,10 0 g,蔗糖（葡萄糖）：,50 g,琼脂：,20 g,水：,1000 mL,pH,：自然,称取新鲜黄豆芽,100 g,，放入烧杯中加水煮沸约,30 min,，用纱布过滤。滤液中加入糖和琼脂，溶化后补足水至,1000 mL,，最终灭菌。,培养基的制备消毒与灭菌,第13页,麦氏（,Meclary,）培养基制备,用来培养酵母菌，利于酿酒酵母子囊孢子形成,葡萄糖：,1 g,K,Cl,：,1.8 g,酵母浸膏：,2.5 g,醋酸钠：,8.2 g,琼脂：,20 g,水：,1000 mL,pH,：自然,培养基的制备消毒与灭菌,第14页,操作步骤,称量,溶化,补足水分，调,pH,（过滤）,分装,6.,加塞,7.,包扎,8.,灭菌,9.,搁置斜面,10.,无菌检验,培养基的制备消毒与灭菌,第15页,称量药品时，严防药品混杂。称完一个药品后需要将牛角匙洗净、擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。,药品不要弄错。如：,K,2,HPO,4,和,KH,2,PO,4,、水合形式和无水形式化合物要注意分辨。,培养基的制备消毒与灭菌,第16页,培养基中各种无机盐可能相互作用而产生沉淀。所以，在混合培养基成份时，普通是按配方次序,依次溶解,各成份，甚至有时还需要将二种或各种成份分别灭菌，使用时再按百分比混合。,对于微量成份，可先配制成高浓度贮备液，按百分比换算后再加入。,琼脂溶化过程中，要,控制火力并不停搅拌,，以免沸腾溢出或琼脂糊底烧焦。,不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基。,培养基的制备消毒与灭菌,第17页,调,pH,值以前，先补足水分。,pH,值不要调过头，以免回调影响个离子浓度。,培养基的制备消毒与灭菌,第18页,固体分装：不超出试管高度,1/5,；不超出三角烧瓶容积二分之一为宜。,分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免污染棉塞而引发污染。,培养基的制备消毒与灭菌,第19页,配好培养基后要贴上标签，写清培养基类型、组别、配制时间。,培养基的制备消毒与灭菌,第20页,培养基灭菌,在微生物试验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，所以对所用器材、培养基和工作场所都要进行严格消毒和灭菌。,配制培养各类营养物质和容器等含有各种微生物,微生物生长繁殖：,消耗养分,改变培养酸碱度,产生毒素或者抑制物,培养基的制备消毒与灭菌,第21页,消毒与灭菌,消毒,是普通指采取物理、化学和生物方法消除物体表面病原菌和有害微生物营养体过程。,灭菌,则是指采取物理、化学和生物方法杀灭一切微生物营养体、芽孢和孢子过程。,培养基的制备消毒与灭菌,第22页,消毒与灭菌方法,加热灭菌,干热灭菌,湿热灭菌,过滤除菌,辐射灭菌,放射线辐照灭菌,紫外线灭菌,培养基的制备消毒与灭菌,第23页,干热灭菌,干热灭菌是利用高温使微生物细胞内蛋白质凝固变性而到达灭菌目标,.,干热灭菌有火焰灼烧灭菌和热空气灭菌两种。,培养基的制备消毒与灭菌,第24页,细胞内蛋白质凝固性与其含水量相关。在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之凝固迟缓。,所以，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（,160,170,），时间要长（,1,2h,），但干热灭菌温度不能超出,180,，不然，包器皿纸或棉塞就会烧焦，甚至引发燃烧。,培养基的制备消毒与灭菌,第25页,高压蒸气灭菌,高压蒸气灭菌是将待灭菌物品放在一个密闭灭菌锅内，经过加热，使灭菌锅隔套间水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀，继续加热。因为水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内压力，从而使沸点增高，得到高于,100,温度。造成菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌目标。,普通培养基在,0.1 MPa,下，,121,维持,15,30 min,可到达彻底灭菌目标。灭菌温度及维持时间随灭菌物品性质和容量等详细情况而有所改变。,培养基的制备消毒与灭菌,第26页,在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大,。,其原因有三：,一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；,二是湿热穿透力比干热大；,三是湿热蒸气有潜热存在。,1 g,水在,100,时，由气态变为液态时可放出,2.26 kJ(,千焦,),热量。这种潜热，能快速提升被灭菌物体温度，从而增加灭菌效力。,培养基的制备消毒与灭菌,第27页,在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气排除是否完全极为主要，因为空气膨胀压大于水蒸气膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气温度低于饱和蒸气温度。,当含盐类液体和含盐琼脂中大量盐类泼洒在工作腔体，要马上换水，冲洗腔体，仔细擦干锅盖垫圈上水滴。不然它们会带来腐蚀和变质。,要检验压力表上指数为,“,0 Mpa,”,后才能打开锅盖。,外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，不然会引发装置故障、起火、短路。,培养基的制备消毒与灭菌,第28页,培养基的制备消毒与灭菌,第29页,过滤除菌,过滤除菌是经过机械作用滤去液体或气体中细菌方法。依据不一样需要选取不一样滤器和滤板材料。,此法除菌最大优点是能够不破坏溶液中各种物质化学成份，但因为滤量有限，所以普通只适合用于试验室中小量溶液过滤除菌。,培养基的制备消毒与灭菌,第30页,培养基的制备消毒与灭菌,第31页,紫外线灭菌,紫外线灭菌是用紫外线灯进行。波长为,200300 nm,紫外线都有杀菌能力，其中以,260nm,杀菌力最强。,在波长一定条件下，紫外线杀菌效率与强度和时间乘积成正比。,紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体形成和,DNA,链交联，从而抑制了,DNA,复制。另首先，因为辐射能使空气中氧电离成,O,，再使,O,2,氧化生成臭氧（,O,3,）或使水（,H,2,O,）氧化生成过氧化氢（,H,2,O,2,）。,O,3,和,H,2,O,2,都有杀菌作用。,培养基的制备消毒与灭菌,第32页,紫外线穿透力不大，所以，只适合用于无菌室，接种箱，手术室内空气及物体表面灭菌。紫外线灯距照射物以不超出,1.2m,为宜。,为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯前，可在无菌室内,(,或接种箱内,),喷洒,3%,5%,石炭酸溶液，首先使空气中附着有微生物尘埃降落，另首先也能够杀死一个别细菌。,无菌室内桌面、凳子可用,2%,3%,来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，到达灭菌目标。,培养基的制备消毒与灭菌,第33页,灭菌试管培养基冷至,50,左右再搁置，以防斜面上冷凝水太多。,斜面长度不超出试管总长二分之一。,培养基的制备消毒与灭菌,第34页,将灭菌培养基放入,37,温室中培养,24,48,小时，以检验灭菌是否彻底。,培养基的制备消毒与灭菌,第35页,试验任务,每组配制,1400 mLPDA,培养基（,P242,）,趁热将培养基分装至,12,把试管（,12,7,支,，,不超出管高,1/5,）；剩下培养基装入锥形瓶中（每瓶约,100 mL,）,对试管、锥形瓶进行包装，贴上标签（培养基名称、配制时间、组别）,高压蒸汽灭菌,取出，搁置斜面，无菌检验,培养基的制备消毒与灭菌,第36页,