植物细胞染色体标本的制作与观察.doc

普通生物学实验课须知1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。 2.每次进入实验室的时间为以课表为准，提前10分钟进入实验室。3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验，不来者，视为旷课。如因特殊情况请假，需在实验开始前至少三天向指导教师说明，在选课平台系统中取消原预约时间，重新预约，一次不做实验或一次不交报告，即按不及格论处。4.预习实验内容和有关知识，写好预习报告（手写）,前四部分内容（一、实验目的，二、实验原理，三、实验器材与试剂，四、实验步骤与操作方法），无预习报告者扣10分。5. 实验过程中应认真操作，仔细观察实验现象，做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照，DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果，请自备拍照工具和U盘)。6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。7. 实验完毕，要将自己使用的仪器刷洗干净，药品按序恢复原位，台面擦净，把自己做实验的一套东西找齐，经指导老师检查合格并签字后方可离开。8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面，检查水、电、门窗是否关好。9. 实验讲义：实验预约系统中可以下载，也可到生命科学与技术学院网站下载。10. 实验报告模板见附件，需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。植物细胞染色体标本的制作与观察上课地点：化学楼120 上课时间：选课时任课教师：陈丽杰 办公地点：生化楼215 电话：84706308课程要求：预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤；手写完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。实验注意事项： 1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐；2、实验废物按实验室管理老师要求收集；3、实验结束后，经老师检查后方可离开。实验纪律： 1、按时上课 2、穿实验服（白大衣） 3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗 4、手机静音 实验成绩： 预习报告： 20分 实验操作： 40分 报告内容：结果和讨论 40分 植物细胞染色体标本的制作与观察1. 实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。压片法操作简单，是常用的植物染色体标本制备的方法。不过，该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。染色体制备的重要环节如下：（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。在植物中通常取根尖，在分裂高峰时取材，可得到大量分裂相细胞。而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。（2）预处理：使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可得到大量分裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观察。（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽量保持细胞原有状态。（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。常用解离方法有酸解法和酶解法。动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。2. 实验目的（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点, 熟练掌握显微镜的使用。（3）理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。3. 实验材料与试剂（1）材料：市售大蒜。 （2）设备与用品：普通光学显微镜，水浴锅，盖玻片，载玻片，异物针，镊子，平皿，滤纸等。（3）药品与试剂：秋水仙胺，甲醇，盐酸等。 l 改良石炭酸品红染液：是近年来观察植物染色体时使用的比较理想的染色剂，染色背景清晰，反差好，使用方便。配制方法如下：原液A：取3 g碱性品红溶于100 mL 70%的酒精中，此液可以长期保存。原液B：取A液10 mL加入90 mL 体积分数为0.05的苯酚（即石炭酸）水溶液中（2周内使用）。原液C：取B液55 mL加入6 mL的冰醋酸和6 mL 37%的甲醛（可长期保存）。染色液：取C液10 mL，加入90 mL 体积分数为0.45的醋酸和1.8 g山梨醇。放置2周后使用，染色效果显著，可普遍用于植物组织的压片法和涂片法，使用23年不变质。山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用。如果没有山梨醇，也能染色，但效果稍差。l 卡诺固定液：甲醇-冰醋酸（体积比3：1），现用现配。4. 实验方法与步骤l 实验内容： 压片法制备大蒜根尖细胞的染色体标本； 观察男人和女人染色体、洋葱细胞有丝分裂的永久标本。l 实验学时：3学时。（1）取材：保持大蒜根部湿润，使根发约11.5 cm即可，不能过长。取大蒜0.51 cm的根尖。（2）预处理：0.52 gL-1（用纯水配制）秋水仙胺处理34 h。（3）固定：卡诺固定液4 下固定30 min后，用蒸馏水洗净。（4）解离：60 水浴下1 mol/L HCl（浓盐酸稀释大约10倍）解离10 min。（5）洗涤：用蒸馏水清洗根尖组织。若洗不净，会影响染色。（6）用改良的石炭酸品红染色5 min，可直接在载玻片上进行，染色前可用异物针去掉分生区以后部分，保留根尖0.20.3 cm即可。染色时用针把组织拨散。（7）压片，敲片：盖上盖玻片，上面垫上一张滤纸，先用手指轻轻均匀地按压盖玻片，使组织初步压散，并且可使盖玻片压牢，防止敲片时盖玻片移动。再用异物针的针柄一端垂直轻轻落下（为防敲碎玻片，可再在盖玻片上垫一张滤纸），进一步敲散组织，使染色体充分散开。敲至组织在玻片上呈现雾状。（8）观察结果：细胞核着色，而细胞质不着色。大蒜有8对16条染色体（2n=16）。好的染色体标本染色体应该分散较好，不重叠，不缺失，染色体形态清晰。大蒜根尖细胞的染色体制片（400，箭头示染色体）5. 实验注意事项（1）若材料不易生根，可把材料在4 低温处理促使其生根，不过注意低温有时也会诱导染色体数目加倍。过长的根尖分裂相会大大减少，所以不要取长度超过1.5 cm的根尖。（2）秋水仙胺，又名脱甲酰秋水仙碱，毒性比秋水仙碱（秋水仙素）小，作用却比秋水仙碱强约10倍。（3）压片、敲片时力量要均匀合适，避免弄碎玻片；载玻片和盖玻片之间也不要移动。（4）可随时镜检判断敲片进行的程度，但要注意整个过程要保持标本的湿润。6. 思考题若染色体标本结果不理想，请分析一下可能的原因有哪些？附件2：大连理工大学实验报告封皮范本大连理工大学本科实验报告课程名称： 普通生物学实验 学院（系）： 专 业： 班 级： 学 号： 学生姓名： 年 月 日附件3：大连理工大学实验报告范本大连理工大学实验报告学院（系）： 专业： 班级： 姓 名： 学号： 组： _ 实验时间： 实验室： 实验台： 指导教师签字： 实验班级号： 成绩： 实验名称：植物细胞染色体标本的制作与观察一、实验目的二、实验原理三、实验材料与试剂四、实验步骤五、实验结果六、实验讨论注：预习报告完成前四项即可。7