超高效液相色谱荧光法检测调味品中罗丹明B残留量_5页.pdf

第3 6卷第3期 2 0 1 1 年9月 广 州 化 学 Gu a n g z h o u Ch e mi s t r y 、bl _ 3 6 No 3 S e p t 2 01 1 文章编号：1 0 0 9 2 2 0 X(2 0 1 1)0 3 0 0 1 7 0 5 超高效液相色谱荧光法检测调味品中罗丹明 B残留量 缪璐，郭振 华，莫佳琳，c，温韬，干宁军(国家食糖及加工食 品质量监督检验 中心，广西 南 宁 5 3 0 0 0 7)摘要：建立 了固相萃取净化超高效液相荧光测定调味品中罗丹 明 B的方法。样 品 中的罗丹明B经水提取，S t r a t a X C W S P E柱萃取净化，用超高效液相色谱(荧光检 测器)进行测定。结果表 明：罗丹 明 B在 0 1 1 0 0 0 0 n g mL范围内呈现 良好 的线性 关系，相关系数为 O 9 9 9 8 6；在 1 0 1 0 0 0 tx g k g添加水平时，平均回收率为 7 2 O 9 6 5，相对标准偏差为 1 9 5 2 (n-6)；定量检出限为O 1 Ix g k g。该方法灵敏 度高，重 复性好，快速，适用于调味 品中罗丹 明 B的检测。关键词：超高效液相色谱；荧光检测器；罗丹明 B 中图分类号：0 6 5 7 7 2；T S 2 0 7 3 文献标识码：A 罗丹 明 B(R h o d a mi n e B)又称玫瑰红 B，或碱性玫 瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的 染料，其化学结构式如图 l所示。经老 鼠试验发现，罗 丹明 B会引致皮下组织生肉瘤，被怀疑是致癌物质L 1 J。罗丹 明 B在溶液 中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧 光染色剂及有色玻璃、特色烟花爆竹等行业【2 。中国卫 生部将其列于 食品中可能违法添加的非食用物质和易 图 1 罗丹明 B结构式 滥用的食 品添加剂品种名单(第一批)中，禁止在食品中使用【3】。然而，一些企业为了降 低成本将其作为食用色素使用。为了保障人民的健康安全，建立快速可靠的检测方法至关 重要。目前对罗丹 明 B 的检测方法有紫外一可见分光光度法【4 J、高效液相色谱法(H P L C)J 和液相色谱 一串联质谱法(L C MS MS)6-7 。罗丹明 B 为酸碱两性化合物，易溶于水。本 研究采用水提取，经 S P E小柱净化并浓缩后，用超高效液相色谱(HP L C，配荧光检测器)测定，外标峰面积法定量，以建立适用于调味品中罗丹 明 B 的检测方法。收稿 日期：2 0 1 1-0 7 2 0 作者简介：缪 璐(1 9 8 2 )，女，硕士研究生，工程师；主要从事食品检测研究。通讯作者 ma g g i e mo 1 6 3 c o m l 8 广州化 学 第 3 6 卷 1 实验 0 1 仪器与试 剂 Wa t e r s U P L C配荧光检测器(美国 Wa t e r s公司)；固相萃取装置(美国 Wa t e r s公司)：D C1 2 H恒温氮吹装置(上海安谱科技有限公司)；T D L 4 0 B离心机(上海安亭科学仪器厂)；KS 5 0 1圆周振荡摇床(德国 I K A公司)。罗丹明 B标准物质，纯度为 9 5 O (德国 Dr E h r e n s t o r f e r 公司)；乙腈，色谱纯(美国 F i s h i e r S c i e n t i f i c公司)；乙酸铵，色谱纯(天津市光复科技发展有限公司)；实验用水为超 纯水。1 2 标准溶液的配制 准确称取 0 0 1 0 0 g罗丹明 B标准物质，用 甲醇溶解后转移至 1 0 0 mL容量瓶中，用甲醇 定容，振荡摇匀，配制成罗丹明 B质量浓度为 1 0 0 0 Ix g mL的标准储备液。使用时用流动相 稀释至所需浓度。1 3 样品处理 1 3 1 提取 1)少油或不含油调味品(例如：辣椒粉、花椒等)，将样 品粉碎、匀浆，称取 5 0 0 g 于 1 5 mL离心管中，加水至 1 5 mL，以 3 0 0 r mi n速率水平振荡 1 5 mi n，以 4 0 0 0 r mi n速率 离心 1 0 mi n。取上清液用于固相萃取柱的净化。2)含油调味品(例如：辣椒油，火锅底料等)，将样品匀浆，称取 5 0 0 g于 1 5 mL离 心管中，加入 5 m L石油醚(6 0 9 0 C)，摇匀，弃去石油醚层，重复一次 N2 吹去剩余的 石油醚，加水至 1 5 mL，以3 0 0 r m _ i n速率水平振荡 1 5 r a i n，以4 0 0 0 r mi n速率离心 1 0 mi n。取上清液用于固相萃取柱的净化。1 3 2 净化 将 S t r a t a-X C W S P E柱用 3 m L甲醇活化，用 3 m L水平衡后，将上清液 5 0 m L分两次 注入 S P E柱，依次用 3 m L水和 3 m L甲醇淋洗，再用 5 mL 5 甲酸 甲醇洗脱，收集洗脱液，在 5 0 C 水浴中N 2 吹干，用 l m L流动相溶解，过0 2 2 k t m有机滤膜，滤液供 U P L C测定。1 4 液相色谱条件 液相色谱条件：A c q u i t yO p l c B e h C1 8 1 7g m2 1 1 0 0 I n l i l 柱温 3 5 0*C；流动相：乙腈 0 0 2 mo l L 乙酸铵(体积 比)=5 5：4 5；流速 0 1 5 mL mi n：激发波长 5 5 0 n m，发射波长 5 8 0 n r l；进样量 2 。2 结果与讨论 2 1 提取条件的选择 罗丹明 B 是酸碱两性化合物，易溶于水、甲醇和 乙腈。实验中选择 了水、甲醇、乙腈 第3期 缪 璐等：超高效液相色谱荧光法检测调味品中罗丹明B残 留量 1 9 提取。结果表明，水、甲醇、乙腈均能完全提取样品中的罗丹 明 B。考虑到方便、快速、低 毒，采用水作为提取溶液。2 2 净化条件的选择 通过固相萃取柱净化是实验室常用净化手段。分别采用 WC X S P E柱、MC X S P E柱和 S t r a t a X C W S P E柱对样品进行净化试验。结果表明弱阳离子的 S t r a t a X C W S P E柱对提取 液 中的目标化合物保留较好。考察 了水和不同比例的甲醇一水(体积分数分别为 5 0、8 0、1 0 0)作为淋洗液时去除杂质和回收率 的情况，发现 以 3 mL水和 3 mL甲醇作淋洗液时的 淋洗效果好且回收率高。2 _ 3 检测器的比较 液相色谱检测罗丹 明 B 可 以用紫外检测器、荧光检测器和质谱。紫外检测器的检 出限 为 0 5 mg k g，而荧光检测器和质谱的检 出限均能达到 1 0 t g&g。综合考虑检 出限、检测器 价格及普遍性等因素，选用荧光检测器。2 4 流动相的选择 分别采用甲醇一水溶液体系、乙腈一乙酸铵溶液体系作为流动相对罗丹 明 B 进行分离 分析，实验发现乙腈乙酸铵溶液体系作为流动相等度洗脱罗丹明 B 的峰形较好，如图 2 和 图 3所示。因此最终选择用乙腈一0 0 2 mo l L乙酸铵溶液体系作流动相，等度洗脱。t|mi n 图2 甲醇一水体系罗丹明B液相色谱图 t|m i n 图3 乙腈一乙酸铵体系罗丹明B液相色谱图 2 5 线性关系和检 出限 2 5 1 线性 关 系 罗丹明 B在 0 1 1 0 0 0 0 n g mL范围内线性关系 良好。取质量浓度为 0 1、1 0、1 0 0、1 0 0 0、1 0 0 0 0 n g mL的罗丹 明B标准溶液，用上述“1 4”的液相色谱条件进行测定，得到 罗丹明 B峰面积和浓度。以峰面积 对浓度 Y(n g mL)进行线性分析，线性方程为 Y-2 0 3 7 X 1 0 5 2 4 8 X 1 0 (一0 9 9 9 8 6 7)。2 5 2检 出 限 按所确定的实验条件，对标准混合溶液逐级稀释进行测定，按 3倍信噪比计算该方法的 2 0 广 州 化 学 第 3 6卷 定量检测限，得 出调味品中罗丹明 B的方法检测限为 0 1 g g k g(S N3)。2 6 精密度及回收率 2 6 1空 白样 品测定 空白样品的液相色谱如图 4所示。空 白样品的液相色谱图未见 目标物质特征峰，表明整 个检测过程中试剂、仪器的干扰可忽略不计。图4 空白样品液相色谱图 图 5 加标试验液相色谱图 2 6 2 回收率和精密度 回收率实验选用不含罗丹明B的样品为基质，设定了3个添加质量浓度：1 0 0、1 0 o 0和 1 0 0 0 0 lx g k g。按“1 3、1 4”所述的实验条件，对每个浓度进行6次平行的添加、回收实验 测定，回收率和精密度实验结果见表 1。其中一个样品添加罗丹 明 B后的液相色谱如图 5 所 示。添加质量浓度为 1 0 0 1 0 0 0 0,g l k g时，罗丹明 B的回收率为 7 2 0 9 6 5，相对标 准偏差(RS D)为 1 9 5 2。表 1 罗丹 明 B的添加 回收率和精密度测定结果(一6)3 结论 t 经方法学验证，在低浓度和高浓度范围内，罗丹明 B的相关系数 r=0 9 9 9 8 6 7。回收率 为 7 2 0 9 6 5，R S D 为 1 9 5 2。采用超高效液相色谱仪，检测 时间缩短 3倍 以上，节约流动相，为实际检验缩短了大量时问及成本。综上所述，本法可适用于调味品中罗丹明 B残 留量的测定，具有快速、准确、灵敏度高等优 点，较以往方法检验时间大大缩短。第 3 期 缪 璐等：超高效液相色谱荧光法检测调昧品中罗丹明 B残留量 21 参考文献：【1】卢 士英，邹 明强食品中常见的非食用色素的危害与检测 J 中国仪器仪表，2 0 0 9(8)：4 5 5 0 2】李小燕，李梅，陈其锋，等 固相萃 取高效 液相色谱检测 葡萄酒中罗丹 明 B J 食品科 学，2 0 1 1，3 2(8)238 2 43 3 中华人 民共和 国卫生部 食 品中可能违法添加 的非食用物质和易滥用 的食 品添加剂品种名单(第一批)s 2 0 0 8：1 2 【4】王传现，韩丽，方晓明，等 食 品中罗丹 明的高效液相色谱荧光检测 J 分析仪器，2 0 0 8(1)：2 7-3 0 5】林长虹，胡书玉，黄达 锴，等辣椒及 其制 品中罗丹 明 B 的超高效液 相色谱荧光 检测 J 广 东化工，2 0 1 1(4)：1 4 0-1 4 1 6 胡侠，肖光，潘炜，等高效液相色谱一串联质谱法同时测定辣椒粉及辣椒油中的 7种罗丹明染料 J 色 谱，2 0 1 0(6)：5 9 0 5 9 5 7 程慧，李兵，占春瑞腊肠中罗丹明 B 的高效液相色谱串联质谱检测方法 J _ 食品科学，2 0 1 0，3 1(4)：223 2 25 De t e r m i na t i o n o f Rho da mi n e B i n Co nd i m e n t by Ul t r a Pe r f o r m a nc e Li qu i d Chr o m a t o g r a phy 一1 n一一 wi t h l uo r e s c e nc e D e t e c t or MI AO L u，G UO Z h e n h u a，MO J i a-l in 木，WE N T a o，GA N Ni n g-j u n (Na t i o n a l S u p e r v i s i o n&T e s t i n g C e n t e r f o r Q u a l i t y o f S u g a r a n d P r o c e s s e d F o o d，Na n n i n g 5 3 0 0 0 7，C h i n a)A b s t r a c t：S o l i d p h a s e e x t r a c t i o n f o l l o we d b y u l t r a p e r f o r ma n c e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y(U P L C)wi t h flu o r e s c e n c e d e t e c t o r me t h o d wa s de v e l o p e d f o r t h e a na l ys i s o f Rho d a mi n e B i n c o n di me n t Th e s e p a r a t i o n of Rho d a mi n e B f r om s a mpl e s wa s e x t r a c t e d b y wa t e r,a nd p ur i fie d by S tr a t a X C W S P E c o l u mn，a n d d e t e r mi n e d b y U P L C wi t h f l u o r e s c e n c e d e t e c t o r(F L D)T h e c a l i b r a t i o n c u r v e o f t he me t ho d wa s l i ne a r o v e r the r a n ge o f 1 0 t o 1 0 0 0 0 ng mL wi th a c o r r e l a t i o n c o e ffi c i e nt o f 0 9 9 9 8 6 The r e c o ve r i e s f o r Rh od a m i ne B s t a n d a r d s p i k e d i n t he r a n g e o f 1 0 t o 1 0 0 0 g g k g w e r e b e t we e n 7 2 0 a n d 9 6 5 wi t h a r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a t i o n(R S D)b e i n g b e tw e e n 1 9 a n d 5 2 一6)T h e d e t e c t i o n l i mi t w a s 0 1 t g k g Ow i n g t o a d v a n t a g e s o f go o d l i ne a r i t y，l o w l i mi t o f de t e c t i o n，hi g h p r e c i s i o n a n d r a p i di t y，t h i s me t ho d i s s ui t a b l e f o r t h e d e t e r m i na t i o n of Rho da mi n e B i n c o n d i m e n t Ke y wo r ds：ul t r a p e r f o rm a n c e l i q u i d c h r o m a t og r a p h y；fluo r e s c e n c e d e t e c t o r；Rhod a mi ne B