针刺对抑郁大鼠海马FKBPs_GR_BDNF信号通路相关因子表达的影响.pdf

环球中医药 2023 年 8 月第 16 卷第 8 期摇 Global Traditional Chinese Medicine,August 2023,Vol郾 16,No郾 81487摇基础研究基金项目:山西省自然科学基金(201901D111399)作者单位:030619摇 晋中,山西中医药大学第二临床学院李佳豪(硕士研究生)、王建云(硕士研究生)、李静兰(硕士研究生)、李北平(硕士研究生)、王海军作者简介:李佳豪(1996-),2019 级在读硕士研究生。研究方向:针灸干预疼痛性疾病的作用机制研究。E鄄mail:通信作者:王海军(1977-),博士,教授。研究方向:针灸优势治疗技术的规范化与临床应用。E鄄mail:针刺对抑郁大鼠海马 FKBPs/GR/BDNF信号通路相关因子表达的影响李佳豪摇 王建云摇 李静兰摇 李北平摇 王海军揖摘要铱摇 目的摇 通过观察针刺腧穴“解郁方冶对慢性应激抑郁大鼠行为学及海马 CA3 区锥体细胞微观结构上的影响,检测大鼠海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、应激伴侣蛋白 FKBP51 和 FKBP52 蛋白表达的变化,探究腧穴“解郁方冶干预抑郁症的作用机制。方法摇 将 40 只 SD 雄性大鼠按照随机数字表分为空白组、模型组、针刺组和药物组,应用不可预知应激刺激来制备大鼠抑郁模型,分别于实验前后对各组大鼠进行各项行为学检测,运用免疫蛋白印迹法比较每一组大鼠海马区中 GR、BDNF、FKBP51 和FKBP52 的总蛋白的含量的差异,通过切片 HE 染色观察各组大鼠海马 CA3 区锥体细胞微观形态学的改变。结果摇(1)模型大鼠体重增长明显变慢,存在极显著差异(P0.05);而针刺组与药物组能够改善应激造成的体重增长减慢的情况,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)模型组大鼠水平与直立运动和糖水消耗量较前所测结果明显减少(P0.05),说明造模成功。针刺和药物治疗对改善大鼠抑郁样行为有统计学意义(P0.05)。(3)模型组大鼠海马 FKBP51 表达提高,而 GR、BDNF、FKBP52 的表达下降;针刺组和药物组与模型组相比,GR、BDNF、FKBP52 蛋白表达显著提升,FKBP51 的表达有所降低(P0.05)。(4)镜下可以观察到模型组大鼠海马 CA3 区锥体细胞间隙明显增大,出现不同程度的损伤;针刺组锥体细胞整体形态要优于模型组和药物组,仅有少许细胞出现损伤。结论摇 运用腧穴“解郁方冶针刺治疗能够帮助大鼠提升生理机能并改善抑郁行为;其作用机制可能与升高海马 FKBP52 的蛋白表达,下调 FKBP51 的蛋白表达,提高 GR、BDNF 的蛋白活性,修复受损的海马神经元有关。揖关键词铱摇 针刺;摇 抑郁症;摇糖皮质激素受体;摇脑源性神经营养因子;摇FKBP51 蛋白;摇FKBP52 蛋白揖中图分类号铱摇 R224摇 揖文献标识码铱摇 A摇 doi:10.3969/j.issn.1674鄄1749.2023.08.001Effects of acupuncture on expression of FKBPs/GR/BDNF signaling pathway related factors in hip鄄pocampus of depressed ratsLI Jiahao,WANG Jianyun,LI Jinglan,LI Beiping,WANG HaijunShanxi University of Chinese Medicine,Jinzhong 030619,ChinaCorresponding author:WANG Haijun,E鄄mail:揖Abstract铱摇 Objective摇Observing the influence of acupuncture acupoint“Jieyu prescription冶 onbehavior and microstructure of pyramidal cells in hippocampal CA3 region of rats with chronic stressdepression and the expression changes of GR,BDNF,FKBP51 and FKBP52 proteins in rat hippocampuswere detected.To explore the action mechanism of“Jieyu prescription冶 on acupoints to intervene in1488摇环球中医药 2023 年 8 月第 16 卷第 8 期摇 Global Traditional Chinese Medicine,August 2023,Vol郾 16,No郾 8depression.Methods摇 According to the random number table,40 male SD rats were divided into blankgroup,model group,acupuncture group and drug group.The depression model of rats was prepared by un鄄predictable stress stimulation.Various behavioral tests were performed on each group of rats before andafter the experiment.Western鄄blot method was used to compare the differences of total protein contents ofGR,BDNF,FKBP51 and FKBP52 in hippocampal region of rats in each group,and the microscopic mor鄄phological changes of pyramidal cells in hippocampal CA3 region of rats in each group were observed by HEstaining.Results摇(1)The body weight of stress and depression model rats was significantly slowed down(P0.05).However,the acupuncture group and the drug group could improve the situation of weight gaincaused by stress,and the difference was statistically significant(P0.05).(2)The horizontal andupright exercise and sugar water consumption of rats in the depression model group were significantlydecreased(P0.05),indicating that the model was successfully constructed.Acupuncture and drugtherapy had statistical significance in improving depression鄄like behavior in rats(P0.05).(3)Theexpression of FKBP51 in hippocampus of stress model group was increased,while the expression of GR,BDNF and FKBP52 was decreased.Compared with the model group,GR,BDNF and FKBP52 protein ex鄄pressions were significantly increased in the acupuncture group and the drug treatment group,whileFKBP51 expression was decreased(P0.05).(4)Under the microscope,it was observed that the spaceof pyramidal cells in hippocampal CA3 region of rats in the stress model group was increased obviously,andthere were different degrees of damage.The overall morphology of pyramidal cells in the acupuncture groupwas better than that in the model group and the drug group,only a few cells were damaged.Conclusion摇Acupuncture treatment with the“Jieyu prescription冶 on the acupoint can improve the physiological functionand depression behavior of rats;its mechanism of action may be related to increasing the expression ofFKBP52 protein in hippocampus,down鄄regulating the expression of FKBP51 protein,improving the proteinactivity of GR and BDNF,and repairing the damaged hippocampal neurons.揖Key words铱摇 acupuncture;摇 depression;摇 GR;摇 BDNF;摇 FKBP51;摇 FKBP52摇 摇 抑郁症是一种临床常见的精神障碍疾病,以持续情绪低落、思维认知障碍、运动减缓为主要临床特征1。不仅严重影响着人们的生活,甚至对整个家庭带来各种程度的伤害。近几年有关抑郁症的研究都紧扣着海马神经元的损伤与修复这一重要环节。海马是一个十分容易受损的边缘结构,长时间的慢性应激刺激会极易导致海马神经元细胞减少,引起情绪和认知的改变,在多数抑郁症发生的过程中扮演着突出作用2。研究发现,海马组织能否实现对神经功能的调节,取决于大脑海马内各个神经因子能否启动神经细胞内的信号传导3。FKBP51 与 FKBP52 是应激蛋白 Hsp90 的分子伴侣蛋白,发挥着调节类固醇激素受体活性的作用,它们能够调控糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)的敏感度,抑制了 GR 的核转移4鄄5,同时,FKBP51 还可以催化 GR 成熟,调在应激反应的中起调节作用6。脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)是神经生长存活的重要分子,研究证据表明 BDNF 参与情绪障碍,在慢性应激活动中,GR/BDNF 通路是引发相关抑郁症发生的关键6。BDNF 的缺失可致使神经元数量减少,多巴胺受体在低水平的 BDNF 介导下,导致神经元发育异常7。此信号通路被视为治疗抑郁的下游靶标,通过将 BDNF 补充到大脑中可以在动物实验中观测到其能够发挥类同与抗抑郁剂样效应8。并且,对于慢性应激模型动物的行为学检测可以证实海马 BDNF 的蛋白表达出现下降趋势,这也体现出在情绪障碍疾病中 BDNF 的重要意义9。通过以上论述,我们有理由认为应激伴侣蛋白FKBP51 和 FKBP52 可以调节 GR 的敏感性,进一步影响着 BDNF 的表达,腧穴“解郁方冶是否可以通过此途径治疗抑郁症,由此我们可以通过动物实验深入观察基于 FKBPs鄄GR鄄BDNF 信号通路,探求腧穴“解郁方冶在治疗抑郁症时发挥的效应机制。1摇 材料与方法1.1摇 实验动物由北京斯贝福生物技术有限公司许可证号:SCXK(京)2019鄄0010提供 SPF 级 SD 雄性大鼠 40只,均重(200依20)g。本实验方案经过本单位伦理委员会批准(批号:2020E2M07)。在山西中医药大学实验中心清洁级动物实验室开展实验饲养观察,环球中医药 2023 年 8 月第 16 卷第 8 期摇 Global Traditional Chinese Medicine,August 2023,Vol郾 16,No郾 81489摇预养 1 周后进行均衡随机化分为 4 组,空白组、模型组、针刺组,药物组,每组 10 只。空白组大鼠同笼饲养,其余 3 组采用单笼孤养的方式进行实验。1.2摇 主要仪器切片机(湖北,亚光 YGQ鄄芋);石蜡包埋机(湖北,亚光 YB鄄6LF);数显恒温水浴锅(上海,邦西HH鄄4);凝 胶 成 像 分 析 仪(美 国,Bio鄄rad U鄄niversalHood);光 学 显 微 镜(日 本,尼 康 NikonH550L);自制旷场实验箱(100 cm伊100 cm);大鼠笼和大鼠固定板(由山西中医药大学实验室提供);一次性针灸针(0.3 mm伊13 mm)由北京中研太和医疗器械有限公司提供。电泳仪(BIO-RAD,mini protean 3 cell);电转仪(HOEFER,TE77XP);酶标 仪(芬 兰 雷 勃,MK3);成 像 系 统(Tanon,Tanon鄄5200)。1.3摇 主要试剂盐酸帕罗西汀(由浙江尖峰药业有限公司生产,201102)。伊红/苏木素染色液(北京雷根生物技术有限公司);AR0030 PBS 缓冲液(博士德);二甲苯/多聚甲醛(天津市北辰方正式试剂厂);裂解液(碧云天);氯化钠注射液(石家庄四药有限公司);BCA 蛋白定量试剂盒(Thermo,PICPI23223);发光液(Millipore,WBKLS0100);RIPA 组织细胞快速裂解液(WKSUBIO,YC0020)。1.4摇 造模方法本实验使用慢性不可预知性的温和刺激法进行模型制备,要保证动物无法预料刺激的发生,同时还需要避免连续使用相同的刺激。经预实验检验能够造模成功,且避免因刺激过于强烈导致动物死亡的情况。实验选取了 7 种不同的温和刺激方式一起配合使用,包括有:4益 冷水游泳 5 分钟、24 小时禁水、24 小时禁食、昼夜颠倒、吹热风 5 分钟、3 小时束缚,夹尾 5 分钟,对模型组三针刺组和药物组大鼠每天随机选择 1 种应激刺激方式,并保证 1 周内平均每一种应激方式均被选择 1 次,按照随机原则将每种应激方式安排在 28 天当中。参考文献进行制备10。1.5摇 干预方法空白组:不施加任何应激刺激因素,每笼五只,正常喂养。模型组:孤养,每笼一只,给予 28天的不可预见应激刺激。针刺组:孤养,每笼一只,施加 28 天的应激刺激,选取燕平教授团队前期通过实验论证治疗抑郁症的经验腧穴组方:“百会冶“神门(双)冶“太冲(双)冶11。参照实验动物针灸穴位图谱取穴。“百会冶位于大鼠头顶骨正中;“神门冶位于大鼠前肢内侧腕部横纹尺骨桡侧缘凹陷中;“太冲冶定位在大鼠足背第一、二跖骨间凹陷处。从造模第 1 天开始行针刺治疗,针刺角度均为平刺,深度为 0.2 0.5 cm,留针 20 分钟,1 次/天。药物组:孤养,每笼一只,进行 28 天的应激刺激,从实验开始当天给予药物盐酸帕罗西汀,给药剂量为 3.3 mg/kg,临用时溶于蒸馏水配成混悬液,以 1 mL/100 g 灌胃给药。1.6摇 观察指标和检测方法1.6.1摇 大鼠体质量的测定和一般情况观察摇在每天上午 8 点安静状态下观察记录大鼠的基本活动情况,对各组大鼠的排便和精神活动状态进行观察记录;并在造模实验开展前 1 天和第 28 天对各组大鼠进行称重。1.6.2摇 行为学检测摇旷场实验:自制敞箱,将箱底等分 5伊5 共 25 格,观察者避免大声惊吓动物,单只单箱开展实验。分别于造模开始的前 1 天及实验第28 天记录各组每只大鼠的水平跨越移动格数与上肢直立的次数。糖水消耗实验:在造模开展的前 3 天适应性给予1%蔗糖水,第一天每笼2 瓶,第二天1 瓶,第3 天禁水 1 晚;造模的前 1 天,每笼分别给 1 瓶 1%蔗糖水和纯水;24 小时后,取出水瓶,称重计量。实验第28 天后,重复此糖水消耗实验,对每只大鼠的糖水消耗量称重记录。1.6.3摇免疫蛋白印迹法检测 GR、BDNF、FKBP51和 FKBP52 表达情况摇大鼠取血完成后,迅速暴露其脑组织,在冰块上小心地将大鼠海马组织完整取出,用生理盐水冲洗后,将海马脑段分成左右两段,将其中一段置入标记好的 EP 管中,置于液氮中速冻备用;另一段海马组织用 4%多聚甲醛固定液固定 6 小时以上(4益),标记。在冰上将组织剪成小碎片,将0.5 mL 裂解液与40 mg 组织放入匀浆器中使组织完全裂解。裂解后的样品 4益 12000 r/min 离心 15 分钟,取上清,进行蛋白质定量。先准备酶标板各孔标好,将配制比例为 50 颐 1 的 BCA 工作液,加入到酶标板中震荡混匀,测定吸光值,并绘制标准曲线。将样品溶液稀释,所得溶液共 20 mL,与 200 mL 的 BCA 工作液混匀,37益下静置 0.5 小时后,以 0 号管做为参照,测定吸光值。再将样品的吸光值代入标准曲线计算1490摇环球中医药 2023 年 8 月第 16 卷第 8 期摇 Global Traditional Chinese Medicine,August 2023,Vol郾 16,No郾 8出相应的蛋白含量(mg),进而得到样品实际蛋白浓度(实际蛋白浓度=蛋白含量伊稀释倍数/20)。然后依据蛋白分子量的大小确定凝胶浓度,配置聚丙烯酰胺下层分离胶与浓缩胶,完成蛋白电泳后进行转模。将 NC 膜放平皿中,加入封闭液,摇床振荡 2小时,用 TBST 洗膜 5 分钟,重复三次,稀释一抗,放至平皿中,放 NC 膜置摇床上,在 4益下过夜,第 2 日取出 NC 膜,使用 TBST 洗涤 3 次,每次 10 分钟,加二抗稀释液稀释二抗,把 NC 膜放置二抗中,室温摇床振荡反应 2 小时,将 NC 膜夹出,TBST 洗涤 3 次,每次5 分钟。配 ECL 显色液,取 ECL 显色液 A 和 B等量混匀加在膜的正面暗室避光 5 分钟,使用 G:BOX chemiXR5 扫描成像;使用 Gel鄄Pro32 软件对结果进行灰度分析。1.6.4摇 HE 染色观察大鼠海马 CA3 区锥体细胞的变化摇 从抗冻缓冲液中选取大鼠脑组织切片,先二甲苯脱蜡,再用酒精梯度浓度浸泡,最后蒸馏水冲洗。然后入苏木精水溶液中进行染色,根据染色程度调整时间,约为 5 分钟。再在乙酸水和氨水中分化颜色,流水冲洗。然后用伊红染色,时间 2 分钟。分别以 70%、80%、90%、纯酒精进行梯度脱水,用二甲苯透明切片,晾干加胶后压盖玻片封固。在光镜下观察海马组织,并用 BX53 荧光显微成像系统拍照记录。1.7摇 统计学处理所有数据均使用 SPSS 22.0 统计软件对数据进行统计分析,实验数据所有计量资料统计分析均符合正态分布且方差齐,以均数依标准差(x依s)表示,组间比较采用单因素方差分析(One鄄way ANOVA),以 P0.05 为差异有统计学意义。2摇 结果2.1摇 各组大鼠的一般情况在进行适应性喂养 1 周以后,各组大鼠的精神体貌和活跃度均表现良好,施加应激前各组大鼠体质量对比无明显差异。在持续的慢性应激过程中:空白组大鼠因未施加任何干预,其毛色、活动度均表现良好,大便无异常;模型组与之进行比较,精神状态、活跃度差,出现焦躁、啃咬鼠笼等情况,大便稀溏时有出现,且毛色欠光;针刺组精神状态相对良好,大鼠反应基本灵敏,毛色尚有光泽,大小便正常;药物组精神状态一般,毛色缺乏光泽,出现大便时干时稀的情况。大鼠实验前后体质量的变化:实验后,模型组与空白组大鼠体质量增长明显降低,存在显著差异(P0.05);针刺组与药物组同模型组相比较,具有统计学差异(P0.05)。见表 1。表 1摇 实验前后各组大鼠体质量的变化(x依s,g)组别鼠只实验前实验后空白组10252.40依9.67363.48依21.62模型组10249.20依11.22307.74依12.83a针刺组10250.70依8.84346.51依23.74ab药物组10251.10依6.77342.12依19.87ab注:与空白组对比,aP0.05;与模型组比较,bP0.05);经过 28 天的应激干预后,空白组大鼠较之前的行为学表现上没有发生明显改变,而模型组大鼠水平与直立运动较第 1 天所测频次明显减少(P0.05),说明造模成功。施加28 天应激刺激并进行治疗干预的针刺组与模型组相比较,水平与直立次数存在差异(P0.05),同时也可以观察到药物组与模型组的行为学检测对比差异具有统计学意义(P0.05)。见表 2。2.2.2摇各组大鼠糖水摄入量的结果比较摇由表 3可见,实验开始前,各组大鼠糖水摄入量对比无明表 2摇 各组大鼠旷场实验水平运动和站立次数应激前后比较(x依s,次)组别鼠只水平运动第 1 天第 28 天直立次数第 1 天第 28 天空白组1061.12依9.2564.62依12.2515.60依4.2015.77依3.66模型组1063.10依8.2829.33依9.23a15.10依3.787.50依2.42a针刺组1062.50依9.3255.50依10.32ab15.50依4.1212.90依3.24ab药物组1059.40依8.6545.86依8.44ab15.40依3.6510.90依3.98ab注:与空白组对比,aP0.05;与模型组比较,bP0.05),施加应激刺激 28 天后,各组大鼠的糖水摄入量发生明显改变,模型组大鼠糖水摄入明显降低,并且显著低于空白组(P0.05),针刺组与药物组糖水摄入量明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。表 3摇 各组大鼠糖水摄入量实验前后比较(x依s,g)组别鼠只实验前治疗后空白组1014.81依2.6415.04依3.03模型组1014.78依4.239.79依4.06a药物组1014.97依3.3814.33依2.85ab针刺组1014.56依4.5913.98依4.01ab注:与空白组对比,aP0.05;与模型组比较,bP0.05。2.3 摇各 组 大 鼠 海 马 的 GR、BDNF、FKBP51 和FKBP52 的蛋白表达结果如表 4、图 1 所示,模型组比空白组大鼠的FKBP51 蛋白表达有所增加,而 GR、BDNF、FKBP52的蛋白表达降低;针刺组与模型组相比,GR、BDNF、FKBP52 平均光密度值显著提升,FKBP51 的蛋白表达有所降低(P0.05)。2.4摇各组大鼠海马 CA3 区锥体细胞的形态结构、数目的影响在 400 倍镜视野下可观察到空白组大鼠海马CA3 区大量的锥体细胞排列有序,细胞核蓝染均匀,核仁明显,胞质均匀,细胞形态结构未见异常改变;与之相对比,模型组的锥体细胞数目明显减少,细胞畸形、间隙增大,且细胞排列不规则。许多的细胞胞浆空泡状明显,细胞核呈脊状、三角形或不规则突起,出现了明显的形态结构病理改变。与模型组比较,药物组大部分椎体细胞相对完整、细胞与周围组织联系较为紧密、虽然有部分胞核出现固缩呈不规则形,但形态优于模型组,有部分胞核出现固缩呈不规则形,细胞核蓝染欠均匀、细胞质较为均匀致密;针刺组锥体细胞整体形态要优于模型组和药物组,偶有胞浆空泡状染色质边集、个别细胞胞核固缩呈三角形,见图 2。图 1摇 各组大鼠海马 GR、BDNF、FKBP51 和FKBP52 的蛋白表达情况注:A 为空白组;B 为模型组;C 为药物组;D 为针刺组。图 2摇 镜下观察各组大鼠海马 CA3 区锥体细胞的形态结构的差异(HE,伊400)表 4摇 各组大鼠海马 GR、BDNF、FKBP51、FKBP52 水平的比较(x依s)组别鼠只GRBDNFFKBP51FKBP52空白组109559.26依105.4311490.92依337.764376.15依70.1811816.15依419.45模型组103181.45依175.46a4826.18依263.33a10320.80依252.25a5920.25依345.17a针刺组104959.28依157.60ab8066.91依60.31ab6656.93依540.97ab8656.91依187.40ab药物组104499.32依336.22ab7389.77依395.68ab6522.43依449.22ab8447.35依777.39ab注:与空白组对比,aP0.05;与模型组比较,bP0.05。1492摇环球中医药 2023 年 8 月第 16 卷第 8 期摇 Global Traditional Chinese Medicine,August 2023,Vol郾 16,No郾 83摇 讨论本实验选用腧穴“解郁方冶由百会、神门、太冲三穴组成,是山西中医药大学燕平教授团队筛选出的对抑郁症有明确疗效的组穴,并且进行了大量的实验论证12鄄14。百会,位巅上,属督脉,称“三阳五会冶,手足三阳经之阳气汇聚之处。宋代铜人腧穴针灸图经中记载:“惊悸健忘针百会二分,得气即泻,可灸又治思虑过多,心下怔仲,或自悲感慨。冶针灸大成中有“百会心烦闷,惊悸健忘,忘前失后,心神恍惚冶。百会从属督脉,督脉为阳脉之海,与大脑关系密切。针刺百会穴可振奋阳气、醒脑开窍、安神定志;神门穴为手少阴心经的输穴、原穴,为心气出入之门户,有益气宁心、通络安神之功,灵枢五邪篇论:“邪在心,则病心痛喜悲,时眩仆,视有余不足而调之其输也。冶心主血脉,又主神明。刺本穴可开心气之郁结,可以减少抑郁焦虑症状,治疗各种情志疾病;太冲穴属阴主血为足厥阴肝经的输穴、原穴,厥阴经多血少气;五脏有疾当取之十二原,针灸该穴可以调整肝脏气机从而起到保护肝脏,平稳情志,发挥“肝主疏泄,调情志冶的作用,使情志和调,气血和畅;三穴相配能振奋心阳,益气和血,疏肝解郁从而治疗抑郁症。本实验通过免疫蛋白印迹法测定各组海马GR、BDNF、FKBPs 蛋白的表达水平情况,动物应激模型中,大鼠海马 GR、BDNF 水平均出现了降低,且比较空白组有明显差异。说明在慢性应激刺激下,导致 GR 受体表达下降,不能完全介入 HPA 轴进行负反馈调节,与此同时 GR 的表达可能会影响脑神经营养因子 BDNF 的表达,我们观察针刺组与药物组可以帮助应激大鼠海马 GR 和 BDNF 的表达增高,这与观察到的行为学抑郁状态的改善是一致的。BDNF 作为非常重要的脑神经营养因子,它对大脑神经元的保护是十分明确的,BDNF 能够通过多种分泌方式与其受体结合,是 5鄄HT 能神经元的生长因子15鄄16。当机体 BDNF 的水平迅速下降,会导致神经元树突状结构异常促使中枢神经神经元减少,进一步导致神经元损伤、神经的可塑性发生改变17鄄18。本次实验结果显示,慢性应激会升高FKBP51 的蛋白表达,降低 GR、BDNF、FKBP52 的蛋白表达,促使海马神经元的可塑性下降,导致海马神经 的 功 能 受 损。针 刺“解 郁 方冶 可 以 提 高FKBP52、GR 和 BDNF 的表达,提高神经元的可塑性,从而发挥抗抑郁效益。海马区是主要调控一些情绪反应与学习记忆的重要脑区,其中海马 CA3 区含有丰富的椎体神经细胞,对神经反射调节极其敏感,同时该区的神经元突触结构也最易发生可塑性改变19鄄20。既往的研究发现 CUMS 干预会引起大鼠脑内海马神经元超微结构出现损伤,导致海马神经元萎缩和凋亡,是抑郁症的重要原因21。通过本实验微观形态上观察可以清楚地看出,慢性应激会使大鼠海马 CA3 区大量的锥体细胞形态结构出现不同程度的损伤,细胞数量减少,出现许多锥体细胞肿胀,胞浆呈空泡状,细胞核呈脊状、三角形或不规则突起。本研究观察到针刺“解郁方冶和给予药物帕罗西汀对应激大鼠海马 CA3 椎体细胞形态有着不同程度的改善。在肯定针刺治疗疗效的同时,我们也应更多的关注海马神经元及其功能的修复在治疗中的重要性,可以基于此方面,进一步挖掘当前有关精神障碍类疾患的发病与治疗机制。参考文献1摇 龚绍麟.抑郁症M.2 版.北京:人民卫生出版社,2010:1.2 摇Sudhof Thomas C.The synaptic vesicle cysleJ.Annu RevNeurosci,2004,27:509鄄547.3摇 李岩,陈俊逾,伊琦忠.抑郁症大鼠模型海马区及前额叶组织 BDNF 因子、Trkb 蛋白表达的实验研究J.中国医药导刊,2015,17(1):94鄄98.4摇 Polman J A,Hunter R G,Speksnijder N,et al.Glucocorticoidsmodulate the mTOR pathway in the hippocampus:differentialeffects depending on stress historyJ.Endocrinology,2012,153(9):4317鄄4327.5摇 Datson N A,van den Oever J M,Korobko O B,et al.Previoushistory of chronic stress changes the transcriptional response toglucocorticoid challenge in the dentate gyrus region of the male 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