脉动中维生素C的检测.docx

脉动中维生素C的检测1 实验仪器与试剂1.1 仪器岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机1.2 试剂维生素C标准品、醋酸、超纯水、脉动2实验方法与原理维生素C是机体正常生命活动所必需的有机化合物，作为一种理想的保健食品功能因子，被添加于各种保健食品及饮料中，因此对维生素C含量测定方法的研究也较多。目前常规的维生素C含量测定方法有紫外分光光度法、碘量法等，但是维生素C具有较强的还原性，在中性和碱性环境下不稳定，遇热迅速分解，检测方法操作步骤复杂，具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时等缺点，尤其是有颜色的试样，其溶液颜色背景干扰大，对最终数据有影响。高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点，且适用范围广，特别对高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析具有极大的优势。能在较短时间内完成对维生素C含量的测定。在以维生素C标准品保留时间定性，采用外标法定量维生素C含量。（1）标准曲线方程式为：Y=aX+b（2）根据标准曲线方程得到计算公式 ：X1=(Y1-b)/a（X1为样品中维C浓度，Y1为样品峰面积）（3）最后求出：C1=X1N（C1为1ml脉动的维C含量，N为所取脉动稀释倍数=100ml/所取脉动体积）3 实验步骤3.1 标准液的制备维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C，用0.1%醋酸溶液溶解，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至50mL，为标准溶液。分别吸取标准溶液0.05，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00mL于10mL容量瓶中，用0.1%醋酸溶液定容，进样测定。3.2 样品的前处理试样处理试样为液体时，吸取适量体积试样原液用20mL0.5%醋酸溶液作为稀释液，再用水定容至100mL;试样为固体时，称取试样1g用0.1%醋酸溶液溶解(按照试样液中维生素C含量0.5700mg/L换算)，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至100mL，过滤，用0.45m滤膜过滤，进样。3.3 实验条件的选择(1)色谱柱C18(250mm*4.6mm)(2)流动相含甲醇：含0.1%醋酸的水（10：90），流量1mLmin-1(3)检测器紫外检测器，262nm(4)进样量20L3.4 测定(1)将配制好的流动相甲醇、0.1%醋酸的水置于超声波发生器上脱气20min。(2)根据实验条件，将高效液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡时即可进样。(3)依次分别吸取20L的标准混合使用液和未知试液进样，记录各色谱图。4 实验结果4.1 维生素C标品色谱图4.2 维C标准曲线4.3 样品色谱图根据色谱图，我们得知峰面积为2535692，代入标准曲线：y = 22028x + 31017，得x1=113.704g/mL，因此1ml脉动的维C含量为C1=113.7045=568.52g/mL所以100mL脉动中含有56852g/100mL即56.852mg/100mL5 实验结果分析本次实验测得脉动中维生素C含量约为57mg/100mL，比脉动营养声称上的20mg/100mL高出了近三倍，如果先不考虑仪器、操作误差，那极大的可能是商家为了预防储藏中损失，额外添加了比标签上多的维生素C。例如资料显示一个标明每100mL中维生素C含量在2550mg之间的产品，部分产品的实测数值和标注数值可能相差23倍之多，实测维生素C含量为62毫克。因此我们消费者在购买这类维生素C饮料时也要多留个心眼，警惕吸收量超标。因此我们测得57mg/100mL的维生素C含量也不是没有道理。通过本次实验，我了解到，液相色谱法具有许多优点，比如分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广； 与气相色谱法相比不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广；且流动相种类多，可通过流动相的优化达到高的分离效率；一般在室温下分析即可，不需高柱温。 但它的分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比气相长。 在实际操作中，也会有不少因素影响液相色谱仪实验结果的准确性。如手动进样的使用方法不当，就会引起色谱图问题，标准曲线无线性，重复性差等问题。通过师兄介绍，手动进样的方法应该是要缓慢地将样品打入，再快速地抽出。此外还应定期对进样阀清洗和保养，避免由进样阀引起的污染和堵塞，排除干扰峰，提高准确性。进样量要大于定量环的3倍以上，这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。另外，液相色谱仪给我最大的感受就是，它对于样品、泵中的流动相都有着非常高的要求，流动相是不能有杂质的，都是要通过抽滤才能使用，否则一些尘埃、垃圾等污染物会堵塞泵，且会进入输液流道内，引起配管堵塞，单向阀污染引起压力不稳，密封垫损坏导致系统漏液，柱塞干损坏引起无流动相流出，压力波动。因此保证输液泵的稳定和正常运行对分析结果的准确性、降低误差是非常重要的。此外如果色谱柱上没有恒温装置，通常会因温度引起保留时间的变化，应使用柱温箱，另外保持室内最小温差。实验中我们并没有使用柱温箱，因此温度可能会对实验结果造成影响。