响应面法优化酶解-超声双辅助双水相体系制备五味子提取物.pdf

w w w h x y s w g c c o m ,V o l N o 化学与生物工程C h e m i s t r y&B i o e n g i n e e r i n g 收稿日期:作者简介:宋皓瑜(),女,黑龙江大庆人,研究方向:本草化妆品,E m a i l:q q c o m;通讯作者:张彬锋,男,河南平顶山人,博士,研究方向:中药化妆品,E m a i l:z b f h o t m a i l c o m.D O I:/j i s s n 宋皓瑜,张彬锋,MA E NGY o oJ a e 响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物J化学与生物工程,():S ON G H Y,Z HAN GBF,MA E NGYJ O p t i m i z a t i o n i ne n z y m o l y s i s u l t r a s o n i c a s s i s t e da q u e o u s t w o p h a s e s y s t e mf o r p r e p a r a t i o no fS c h i s a n d r a c h i n e n s i s(T u r c z)B a i l l e x t r a c tb yr e s p o n s es u r f a c em e t h o d o l o g yJ C h e m i s t r y&B i o e n g i n e e r i n g,():响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物宋皓瑜,张彬锋,MA E N GY o oJ a e(乐金生活健康化妆品研发(上海)有限公司,上海 )摘要:在单因素实验的基础上,以五味子乙素得率为响应值,采用响应面法优化了酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物的工艺条件,并比较了双水相体系、酶辅助双水相体系、超声辅助双水相体系及酶解超声双辅助双水相体系等方法对五味子乙素的提取效果.结果表明,酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物的最佳条件为:乙醇体积分数 、硫酸铵质量分数 、超声时间 m i n、液固比 (m Lg),在此条件下,五味子乙素得率为 m gg,与模型预测值(m gg)接近;酶解超声双辅助双水相体系制备的五味子乙素得率显著高于双水相体系、酶辅助双水相体系及超声辅助双水相体系,说明前处理可有效促进双水相体系对五味子乙素的富集.关键词:五味子;五味子乙素;双水相体系;响应面法中图分类号:T Q R O p t i m i z a t i o ni nE n z y m o l y s i s u l t r a s o n i c a s s i s t e dA q u e o u sT w o p h a s eS y s t e mf o rP r e p a r a t i o no fS c h i s a n d r a c h i n e n s i s(T u r c z)B a i l l E x t r a c tb yR e s p o n s eS u r f a c eM e t h o d o l o g yS O N GH a o y u,Z H A N GB i n f e n g,J A EM a e n g y o o(S h a n g h a iR&DC e n t e r,L GH o u s e h o l d&H e a l t hC a r eL t d,S h a n g h a i ,C h i n a)A b s t r a c t:T a k i n gt h ey i e l do fs c h i s a n d r i nBa sar e s p o n s ev a l u e,w eo p t i m i z e dt h ep r e p a r a t i o np r o c e s so fS c h i s a n d r a c h i n e n s i s(T u r c z)B a i l l e x t r a c tb yr e s p o n s es u r f a c em e t h o d o l o g i e so nt h eb a s i so f s i n g l e f a c t o re x p e r i m e n t s M o r e o v e r,w ec o m p a r e dt h ee x t r a c t i o ne f f i c i e n c yo fs c h i s a n d r i nBb ya q u e o u st w o p h a s es y s t e m,e n z y m e a s s i s t e da q u e o u s t w o p h a s es y s t e m,u l t r a s o n i c a s s i s t e da q u e o u s t w o p h a s es y s t e m,a n de n z y m o l y s i s u l t r a s o n i c a s s i s t e da q u e o u s t w o p h a s es y s t e m T h er e s u l t ss h o wt h a t t h eo p t i m a lp r o c e s so fe n z y m o l y s i s u l t r a s o n i c a s s i s t e da q u e o u s t w o p h a s es y s t e mi sd e t e r m i n e da s f o l l o w s:t h ee t h a n o l v o l u m e f r a c t i o no f ,t h ea mm o n i u ms u l f a t em a s s f r a c t i o no f ,t h eu l t r a s o n i c t i m eo f m i n,a n dt h e l i q u i d s o l i dr a t i oo f (m Lg)U n d e ra b o v ec o n d i t i o n s,t h ey i e l do f s c h i s a n d r i nBc a nr e a c h m gg,w h i c h i s c l o s e t o t h ep r e d i c t e dv a l u e(m gg)T h ey i e l do f s c h i s a n d r i nBb ye n z y m o l y s i s u l t r a s o n i c a s s i s t e da q u e o u s t w o p h a s es y s t e mi ss i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a nt h a tb ya q u e o u st w o p h a s es y s t e m,e n z y m e a s s i s t e da q u e o u st w o p h a s es y s t e m,a n du l t r a s o n i c a s s i s t e da q u e o u s t w o p h a s es y s t e m,i n d i c a t i n gt h a tp r e t r e a t m e n tc a ne f f e c t i v e l yp r o m o t et h ee n r i c h m e n to f s c h i s a n d r i nBb yt h ea q u e o u s t w o p h a s es y s t e mK e y w o r d s:S c h i s a n d r a c h i n e n s i s(T u r c z)B a i l l;s c h i s a n d r i nB;a q u e o u s t w o p h a s es y s t e m;r e s p o n s es u r f a c e宋皓瑜,等:响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物/年第期 m e t h o d o l o g y五味子是木兰科植物五味子S c h i s a n d r a c h i n e n s i s(T u r c z)B a i l l 的干燥成熟果实,广泛分布于我国东北部、韩国以及日本,具有止咳、镇静、保肝的功效.目前,已从五味子中分离鉴定出 种化合物,其中木脂素类有 种,是五味子的主要化学组分及重要药理活性成分.五味子乙素是一种联苯环辛烯木脂素,具有保护肝脏、抑制UV B导致的自由基累积、缓解P r o p i o n i b a c t e r i u ma c n e s引发的痤疮相关炎症、减少细胞及胚胎中黑色素合成等功效 ,常被作为功效成分添加在化妆品中.双水相体系是一种液液分离技术,利用不同大分子在互不相溶的两个液相间分配系数的较大差异进行分离.双水相体系两相的主要成分为水且反应条件温和,不仅有利于维持化合物结构和性质的稳定,也展现出环保、低成本、易于放大生产等优势.目前关于五味子的研究多集中在利用双水相体系结合超声技术提取五味子活性成分,而前处理过程与双水相体系相结合的研究较少.酶法具有高效、环保、易操作等特点,是有效的前处理手段,可与双水相体系相结合.鉴于此,作者采用酶解超声双辅助乙醇/硫酸铵双水相体系制备五味子提取物,在单因素实验的基础上,采用响应面法优化制备工艺,并通过比较双水相体系、酶辅助双水相体系、超声辅助双水相体系及酶解超声双辅助双水相体系等方法对五味子乙素的提取效果,验证前处理对双水相体系的积极作用,拟为五味子在化妆品领域的应用提供理论基础.实验 材料、试剂与仪器五味子(批号 ),购于辽宁,经鉴定为木兰科植物五味子S c h i s a n d r ac h i n e n s i s(T u r c z)B a i l l 的干燥成熟果实.粉碎后置于阴凉干燥处,备用.五味子乙素标准品(批号R D D W ,纯度),成都瑞思芬德丹生物科技有限公司;纤维素酶(Ug);乙腈,色谱纯;无水乙醇、硫酸铵、甲醇,分析纯.A g i l e n t I n f i n i t y型高效液相色谱仪,美国A g i l e n t公司;型台式离心机,上海医疗器械(集团)有限公司手术器械厂;U C H型加热超声波清洗器,上海泰坦科技股份有限公司;J P C型高速多功能粉碎机,永康久品工贸有限公司;HWS 型电热恒温水浴锅,上海一恒科学仪器有限公司;S K型p H计,上海亚津电子科技有限公司;R C 型磁力搅拌机,上海久然仪器设备有限公司;ME 型电子天平,瑞士梅特勒托利多集团.酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物精密称取一定量的五味子粉末于具塞锥形瓶中,加入(以五味子质量计)纤维素酶及一定量的水,调节p H值至,于 水浴h后再沸水浴 m i n;冷却至室温,加入一定量的无水乙醇及硫酸铵,置于超声波清洗器中,于、W处理一定时间;反应液于 rm i n离心 m i n,分别记录上相、下相体积,收集上相.五味子乙素得率的测定 五味子乙素对照溶液的配制称取 m g五味子乙素标准品,用甲醇溶解并定容至m L,摇匀,即得 m gm L五味子乙素对照溶液.供试溶液的制备精密吸取 m L上相于 m L容量瓶中,用 乙醇定容至刻度,摇匀,经 m滤膜过滤,即得供试溶液.色谱条件P o r o s h e l lH P H C 色谱柱(mm mm,m);流动相为乙腈(A)水(B),梯度洗脱程序:m i n,A;m i n,A;m i n,A;m i n,A;m i n,A;m i n,A;二极管阵列检测器(D A D),检测波长 n m;流速m Lm i n;柱温;进样量L.标准曲线的绘制移取一定体积的 m gm L五味子乙素对照溶液,用甲醇稀释至浓度分别为 gm L、gm L、gm L、gm L、gm L、gm L,按 色谱条件进样分析;以五味子乙素浓度(x)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线,拟合得线性回归方程为:y x ,R ,表明五味子乙素浓度在 gm L范围内与峰面积线性关系良好.五味子乙素得率及相比的计算取供试溶液,按 色谱条件进样分析,分别按式()、()计算五味子乙素得率及相比:五味子乙素得率cVnm ()宋皓瑜,等:响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物/年第期 相比VV()式中:c为 供 试 溶 液 中 五 味 子 乙 素 浓 度,gm L;V为上相体积,m L;n为稀释倍数;m为五味子粉末质量,g;V为下相体积,m L.五味子提取物制备工艺的优化采用单因素实验,分别考察乙醇体积分数(、)、硫酸铵质量分数(、)、超声时间(m i n、m i n、m i n、m i n、m i n)及液固比(、,m Lg,下同)对五味子乙素得率及相比的影响.在单 因 素 实 验 的 基 础 上,使 用D e s i g n E x p e r t 软件设计因素水平响应面实验,以五味子乙素得率为响应值,进一步对五味子提取物制备工艺进行优化.数据统计与分析每组实验做个平行,数据以平均值标准偏差表示.使用S P S S软件进行数据显著性分析,使用O r i g i n软件绘图.结果与讨论 H P L C图谱五味子乙素对照溶液及供试溶液的H P L C图谱如图所示.24020016012080400mAU5 10 15 20 25 30 35 40t/min?5 10 15 20 25 30 35 40t/minmAU5004003002001000?()a()b图五味子乙素对照溶液(a)及供试溶液(b)的H P L C图谱F i g H P L Cs p e c t r ao f s c h i s a n d r i nBc o n t r o l s o l u t i o n(a)a n ds a m p l e s o l u t i o n(b)单因素实验结果 乙醇体积分数对五味子乙素得率及相比的影响(图)2.01.81.61.41.21.00.8?(mgg-1/)1520 25 30 35?/%?EDCBAdcbba543210?反应条件:硫酸铵质量分数、液固比、超声时间 m i n注:字母不同表示具有显著性差异(P ),下图同图乙醇体积分数对五味子乙素得率及相比的影响F i g E f f e c t o f e t h a n o l v o l u m e f r a c t i o no ny i e l do fs c h i s a n d r i nBa n dp h a s e r a t i o由图可知,随着乙醇体积分数的增加,五味子乙素得率及相比均逐渐升高;当乙醇体积分数从 增至 时,五味子乙素得率从 m gg升至 m gg.这是因为,随着乙醇体积分数的增加,上相体积增加,且其中乙醇含量增加,有利于富集醇溶性的五味子乙素.但得率并非评价双水相体系功效的唯一参数,合适的相比同样重要.在制备五味子提取物时,相比过高不利于两相分离,其维持在 对成分富集及实验操作更为有利.当乙醇体积分数为 时,相比为 ,处于合理范围内,此时五味子乙素得率与乙醇体积分数为 时的得率无显著性差异(P ).因此,综合考虑五味子乙素得率、提取成本及实验可操作性,选取 作为响应面实验乙醇体积分数的中心点.硫酸铵质量分数对五味子乙素得率及相比的影响(图)由图可知,随着硫酸铵质量分数的增加,五味子乙素得率先升高后保持不变,相比则逐渐下降;当硫酸铵质量分数为 时,五味子乙素得率达到最高,为 m gg,此时相比为 ,处于合理范围内.这是因为,增加硫酸铵质量分数会促进水分子在下相的聚集,使上相中乙醇含量增加,促进五味子乙素在上相聚集;当硫酸铵饱和后,继续增加其质量分数不会对体系产生影响.综合考虑五味子乙素得率及宋皓瑜,等:响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物/年第期 2.01.81.61.41.21.00.8?mgg-1/()2022 24 26 28?/%?BBAcba1.81.61.41.21.00.80.6?abABC反应条件:乙醇体积分数、液固比、超声时间 m i n图硫酸铵质量分数对五味子乙素得率及相比的影响F i g E f f e c t o fa mm o n i u ms u l f a t em a s s f r a c t i o no ny i e l do f s c h i s a n d r i nBa n dp h a s e r a t i o提取成本,选取 作为响应面实验硫酸铵质量分数的中心点.超声时间对五味子乙素得率及相比的影响(图)2.01.81.61.41.21.00.8?mgg-1/()3045 60 75 90?/min?AAAcb1.81.61.41.21.00.80.6?adABd反应条件:乙醇体积分数、硫酸铵质量分数、液固比 图超声时间对五味子乙素得率及相比的影响F i g E f f e c t o fu l t r a s o n i c t i m eo ny i e l do f s c h i s a n d r i nBa n dp h a s er a t i o由图可知,随着超声时间的延长,五味子乙素得率先升高后降低,相比先稳定不变后下降;当超声时间为 m i n时,五味子乙素得率达到最高,为 m gg,此时相比为 ,处于合理范围内.这是因为,超声波可破碎五味子细胞壁,加速成分溶出;同时促进双水相体系中上、下两相的分相过程,使溶出的五味子乙素在乙醇中充分富集,因此在超声处理前期五味子乙素得率升高;在较高超声频率下,超声时间过长会使五味子乙素得率降低,与C o r b i n等 的研究结果相吻合,可能是由于超声导致五味子乙素的降解及异构化.综合考虑,选取 m i n作为响应面实验超声时间的中心点.液固比对五味子乙素得率及相比的影响(图)由图可知,随着液固比的增大,五味子乙素得率先升高后降低,相比逐渐升高;当液固比为 时,2.01.81.61.41.21.00.8?mgg-1/()10 1：?：/(mL g)?BABCba1.81.61.41.21.00.80.6?cdBAe20 1：30 1：40 1：50 1：反应条件:乙醇体积分数、硫酸铵质量分数、超声时间 m i n图液固比对五味子乙素得率及相比的影响F i g E f f e c t o f l i q u i d s o l i dr a t i oo ny i e l do f s c h i s a n d r i nBa n dp h a s e r a t i o五味子乙素得率达到最高,为 m gg,此时相比为 ,处于合理范围内.这是因为,足量的溶剂可使五味子粉末充分溶胀,从而促进溶剂渗入细胞内部,细胞内有效成分扩散至细胞外,且溶剂与五味子粉末的充分接触可强化超声能量传递效率,促进有效成分溶出;但是液固比过大时,过多的溶剂吸收了超声能量,使得作用于五味子粉末的能量相对降低,导致五味子乙素得率下降,且会耗费大量的乙醇与硫酸铵.综合考虑,选取 作为响应面实验液固比的中心点.响应面实验结果 响应面实验设计与结果响应面实验的因素与水平见表,设计与结果见表.表响应面实验的因素与水平T a b F a c t o r sa n d l e v e l so f r e s p o n s e s u r f a c em e t h o d o l o g i e s水平因素A乙醇体积分数B硫酸铵质量分数C超声时间m i nD液固比m Lg 使用D e s i g n E x p e r t 软件对表数据进行拟合,得 到 二 次 多 项 回 归 模 型 方 程 为:Y A B C D A B A C AD B C B D C D A B C D.方差分析对回归模型进行方差分析和显著性检验,结果见表.由表可知,模型P ,即该回归模型极显宋皓瑜,等:响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物/年第期 表响应面实验设计与结果T a b D e s i g na n dr e s u l t so f r e s p o n s e s u r f a c em e t h o d o l o g i e s实验号ABCDY五味子乙素得率m gg 著;失拟项不显著(P ),说明实验结果不易受其它因素干扰;精密度为 ,远大于,说明模型合理;变异系数C V ,说明精确度高,实验结果可信;相关系数R ,校正相关系数Ra d j ,说明回归方程拟合度良好,能较准确地反映各因素与响应值之间的关系,可用于分析及预测五味子乙素得率.一次项A、B、D,交互项A B、AD,二次项A、D对五味子乙素得率的影响极显著;一次项C、二次项B的影响显著.由F值可知,各因素对五味子乙素得率影响的大小依次为:乙醇体积分数(A)硫酸铵质量分数(B)液固比(D)超声时间(C).响应面分析表方差分析T a b A n a l y s i so f v a r i a n c e方差来源平方和自由度标准误差F值P值显著性模型 E A B E E C E E D E E A B E E A C E E AD E E B C E E BD E E C D E E A B E E C E E D 残差 E E 失拟项 E E 纯误差 E E 总和 注:表示P ,差异显著;表示P ,差异极显著.各因素交互作用对五味子乙素得率影响的响应面图及等高线图如图所示.响应曲面越陡峭、等高线近似椭圆形说明两因素交互作用对五味子乙素得率的影响较大;反之则说明影响较小.图 a和图 c的响应曲面对角走势陡峭,等高线变化范围大,且近似椭圆形,说明乙醇体积分数与硫酸铵质量分数的交互作用、乙醇体积分数与液固比的交互作用对五味子乙素得率的影响显著,与方差分析结果相吻合.最佳工艺的确定及验证通过D e s i g n E x p e r t软件分析,酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物的最佳条件为:乙醇体积分数 、硫酸铵质量分数 、超声时间 m i n、液固比 ,此时五味子乙素的理论得率为 m gg.考虑到实际操作可行性,将超声时间调整为 m i n,其它条件不变,进行次平行验证实验,五味子乙素平均得率为 m gg,相 对 标 准 偏 差 为 ,说明模型拟合准确,所得最佳工艺稳定、可行.多种制备方法的比较在确定的最佳条件下,分别采用双水相体系、酶辅助双水相体系、超声辅助双水相体系及酶解超声双辅宋皓瑜,等:响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物/年第期(a)?(b)?(c)?(d)?(e)?(f)?1.801.751.701.651.601.551.5028.0027.0026.0025.0024.00?/%24.0026.0028.0022.0020.0030.00?/%1.801.751.701.651.601.551.50?/min60.0054.0048.0042.0036.0030.0024.0026.0028.0022.0020.0030.00?/%1.801.701.601.501.4024.0026.0028.0022.0020.0030.00?/%20 1：?：/(mL g)25 1：30 1：35 1：40 1：?/%28.0027.0026.0025.0024.0020.0022.00 24.0026.00 28.0030.0051.701.651.751.60?/%20.0022.00 24.0026.00 28.0030.00?/%?/min60.0054.0048.0042.0036.0030.001.701.651.755?：/(mL g)40 1：35 1：30 1：25 1：20 1：20.0022.00 24.0026.00 28.0030.00?/%51.701.751.651.601.551.801.701.601.501.40?/min60.0054.0048.0042.0036.0030.00?/%28.0027.0026.0025.0024.001.801.701.601.501.401.801.701.601.501.4020 1：?：/(mL g)25 1：30 1：35 1：40 1：?/%28.0027.0026.0025.0024.0020 1：?：/(mL g)25 1：30 1：35 1：40 1：?/min60.0054.0048.0042.0036.0030.00?/min60.0054.0048.0042.0036.0030.0051.701.721.741.681.661.74?/%28.0027.0026.0025.0024.00?/%28.0027.0026.0025.0024.0060.0054.0048.0042.0036.0030.00?/min?：/(mL g)40 1：35 1：30 1：25 1：20 1：?：/(mL g)40 1：35 1：30 1：25 1：20 1：51.751.651.701.681.721.741.701.681.661.64?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)?(mgg-1/)1.701.65图各因素交互作用对五味子乙素得率影响的响应面图及等高线图F i g R e s p o n s e s u r f a c ep l o t sa n dc o n t o u rp l o t s f o re f f e c t so f i n t e r a c t i o nb e t w e e nv a r i o u s f a c t o r so ny i e l do f s c h i s a n d r i nB助双水相体系制备五味子提取物,五味子乙素得率(m gg)大小依次为:酶解超声双辅助双水相体系()超声辅助双水相体系()酶辅助双水相体系()双水相体系().这是因为,纤维素酶作用于纤维素 D 葡萄糖苷键,催化植物细胞壁中纤维素降解,促进有效物质释放;超声波削弱五味子细胞壁强度,同时加速双水相体系的分相过程,使五味子粉末位于上、下两相中间,形成液固液的萃取体系,促进五味子乙素在上相的富集;酶解超声双辅助双水相体系同时具备酶解、超声、双水相提取的协同作用,可有效提高五味子乙素得率.结论在单因素实验的基础上,以五味子乙素得率为响应值,采用响应面法优化了酶解超声双辅助双水相体宋皓瑜,等:响应面法优化酶解超声双辅助双水相体系制备五味子提取物/年第期 系制备五味子提取物的工艺条件,确定最佳条件为:乙醇体积分数 、硫酸铵质量分数 、超声时间 m i n、液固比 (m Lg),在此条件下,五味子乙素 得率 为 m gg,与 模 型 预 测 值(m gg)接近.酶解超声双辅助双水相体系制备的五味子乙素得率显著高于双水相体系、酶辅助双水相体系及超声辅助双水相体系,说明前处理可有效促进双水相体系对五味子乙素的富集.该研究建立的酶解超声双辅助双水相体系易操作、成本低,是制备五味子提取物的有效方式.参考文献:YANGSY,YUANC HS c h i s a n d r ac h i n e n s i s:ac o m p r e h e n s i v er e v i e wo n i t sp h y t o c h e m i c a l sa n db i o l o g i c a l a c t i v i t i e sJ A r a b i a nJ o u r n a l o fC h e m i s t r y,():Y I M SY,L E E YJ,L E E Y K,e ta l G o m i s i n Ni s o l a t e df r o mS c h i s a n d r ac h i n e n s i ss i g n i f i c a n t l yi n d u c e sa n t i p r o l i f e r a t i v ea n dp r o a p o p t o t i ce f f e c t s i nh e p a t i cc a r c i n o m aJ M o l e c u l a rM e d i c i n eR e p o r t s,():HOU W,GA O W,WAN GDT,e t a l T h ep r o t e c t i n ge f f e c to f d e o x y s c h i s a n d r i na n ds c h i s a n d r i nBo nH a C a Tc e l l s a g a i n s tUV B i n d u c e dd a m a g eJ P L o SO n e,():e GUO M M,ANFL,WE IX,e t a l C o m p a r a t i v e e f f e c t so f s c h i s a n d r i nA,B,a n dCo na c n e r e l a t e di n f l a mm a t i o nJ I n f l a mm a t i o n,():C HA EJK,S U B E D IL,J E ON GM,e t a l G o m i s i nNi n h i b i t sm e l a n o g e n e s i s t h r o u g h r e g u l a t i n g t h eP I K/A k t a n dMA P K/E R Ks i g n a l i n gp a t h w a y s i nm e l a n o c y t e sJ I n t e r n a t i o n a lJ o u r n a lo fM o l e c u l a rS c i e n c e s,():XU EYB,L IXF,D UX,e t a l I s o l a t i o na n da n t i h e p a t i t i sBv i r u sa c t i v i t y o f d i b e n z o c y c l o o c t a d i e n e l i g n a n s f r o m t h e f r u i t s o fS c h i s a n d r a c h i n e n s i sJ P h y t o c h e m i s t r y,:I Q B A LM,T A OYF,X I ESY,e ta l A q u e o u st w o p h a s es y s t e m(A T P S):a no v e r v i e wa n da d v a n c e s i n i t sa p p l i c a t i o n sJ B i o l o g i c a lP r o c e d u r e sO n l i n e,:Z HA OCJ,L IS,L ICY,e ta l F l a v o n o i d sf r o mf i g(F i c u s c a r i c aL i n n)l e a v e s:t h ed e v e l o p m e n to f an e we x t r a c t i o nm e t h o da n d i d e n t i f i c a t i o nb yU P L C Q T O F M S/M SJ A p p l i e dS c i e n c e,():Z HAN G W,Z HUD,F ANHJ,e t a l S i m u l t a n e o u s e x t r a c t i o na n dp u r i f i c a t i o no fa l k a l o i d sf r o mS o p h o r af l a v e s c e n sA i t b ym i c r o w a v e a s s i s t e da q u e o u st w o p h a s ee x t r a c t i o nw i t he t h a n o l/a mm o n i as u l f a t es y s t e mJ S e p a r a t i o na n dP u r i f i c a t i o n T e c h n o l o g y,:陈建福,胡泽杰,潘诗玲,等超声波辅助双水相提取胡萝卜叶总黄酮的工艺研究J河南工业大学学报(自然科学版),():C HE NJF,HUZJ,P ANSL,e ta l O p t i m i z a t i o no fu l t r a s o n i c a s s i s t e da q u e o u st w o p h a s ee x t r a c t i o no ft o t a lf l a v o n o i d sf r o mc a r r o tl e a v e sJ J o u r n a lo fH e n a n U n i v e r s i t yo fT e c h n o l o g y(N a t u r a lS c i e n c eE d i t i o n),():WAN GY,HANJ,XU X H,e ta l P a r t i t i o nb e h a v i o ra n dp a r t i t i o nm e c h a n i s mo fa n t i b i o t i c si ne t h a n o l/p r o p a n o l a mm o n i u ms u l f a t ea q u e o u st w o p h a s es y s t e m sJ S e p a r a t i o na n dP u r i f i c a t i o nT e c h n o l o g y,():程雷,李梓欣,刘传富,等 B o x B e h n k e n响应面法优化蒲公英中菊苣酸的 超 声 提 取 工 艺 J化 学 与 生 物 工 程,():C HE N GL,L IZX,L I UCF,e t a l O p t i m i z a t i o n i nu l t r a s o n i c e x t r a c t i o np r o c e s so f c h i c o r i ca c i df r o md a n d e l i o nb yB o x B e h n k e nr e s p o n s es u r f a c em e t h o d o l o g yJ C h e m i s t r y&B i o e n g i n e e r i n g,():C H I KA R IF,HANJ,WAN GY,e ta l S y n e r g i z e ds u b c r i t i c a l u l t r a