乙基紫三波长叠加共振光散射光谱法测定酒石酸泰乐菌素含量.pdf

收稿日期:2 0 2 2-0 5-2 7 修回日期:2 0 2 2-0 7-0 6基金项目:江苏省品牌专业二期工程(省特色专业-药物制剂,编号6 5);2 0 2 1年江苏省首批一流本科课程(线下一流课程-药物分析,序号1 0 4)*通讯作者:马卫兴,男,博士,教授,从事应用化学和药物分析研究.E-m a i l:3 0 2 5 4 8 3 1 9 6q q.c o m第3 9卷第3期V o l.3 9 N o.3分 析 科 学 学 报J OUR NA LO FANA L Y T I C A LS C I E N C E2 0 2 3年6月J u n e 2 0 2 3D O I:1 0.1 3 5 2 6/j.i s s n.1 0 0 6-6 1 4 4.2 0 2 3.0 3.0 0 4乙基紫三波长叠加共振光散射光谱法测定酒石酸泰乐菌素含量袁 莉1,2,刘 毅1,2,储 文1,2,袁嘉怡1,2,马卫兴*1,2,3(1.江苏海洋大学药学院,江苏连云港2 2 2 0 0 5;2.江苏海洋大学生物医药产业学院,江苏连云港2 2 2 0 0 5;3.江苏省海洋药物筛选重点实验室,江苏连云港2 2 2 0 0 5)摘 要:基于酒石酸泰乐菌素与乙基紫在p H2.8的C l a r k-L u b s缓冲溶液介质中发生反应,建立了三波长叠加共振光散射光谱法测定酒石酸泰乐菌素的新方法。以三波长叠加法探讨了适宜的反应条件和共存物质的影响,研究结果发现,该体系分别在波长3 2 5n m、5 1 0n m、6 7 0n m处产生了3个特征峰,并且酒石酸泰乐菌素浓度均在0.0 40.2 4m g/L范围内呈良好线性关系,其线性回归方程分别为IR L S=6 1 8 7.1c+4 5 6.1、IR L S=8 1 3 8.6c+2 4 8.0 3和IR L S=6 0 8 7.1c+2 2 4.5 3;其对应的相关系数R分别为0.9 9 9 2、0.9 9 9 0和0.9 9 9 0;检出限分别为0.0 9 2m g/L、0.0 8 9m g/L和0.1 0 0m g/L。而采用三波长叠加检测法时,其线性回归方程为IR L S=2 0 4 1 3c+4 7 9.6,R为0.9 9 9 9,检出限为0.0 3 0m g/L。三波长叠加检测法的灵敏度约为单波长检测法灵敏度的3倍。建立的乙基紫三波长叠加共振光散射光谱法具有成本低、灵敏度高等优点,可成功应用于酒石酸泰乐菌素含量检测。关键词:酒石酸泰乐菌素;乙基紫(E V);超分子聚集体;电荷转移配合物;三波长叠加共振光散射技术中图分类号:O 6 5 7.3 9 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 6-6 1 4 4(2 0 2 3)0 3-2 7 5-0 61 9 5 9年,美国从弗氏链霉菌(S t r ep t o m y c e s f r a d i a e)的培养液中获得了一种大环内酯类抗生素1,即泰乐菌素(T y l o s i n)。1 9 6 2年美国L i l l y公司将其成功地推向市场2。酒石酸泰乐菌素是T y l o s i n中的一种产品,它是一种重要的畜禽专用抗生素,主要应用于饲料添加剂和动物治疗,它能明显促进畜禽生长、提高饲料的利用率3,4。目前在国内外检测其含量的方法有:微生物抗生素法5、高效液相色谱法6-8、紫外分光光度法等9,1 0。近年来,共振光散射技术快速发展成一种简便的高灵敏分析技术,只需在一台普通的荧光分光光度计上进行检测1 1,具有灵敏度高、操作简单方便等特点,被广泛应用于体液中生物大分子的测定1 2、化学药物1 3以及中药分析1 4等方面。目前国内外使用共振光散射技术时,大多数都采用单波长检测,少数使用双波长叠加法检测1 4,1 5,而本文在此基础上,开发了乙基紫三波长叠加法共振光散射技术测定酒石酸泰乐菌素含量的新方法,这为进一步分析研究酒石酸泰乐菌素具有重要的意义。实验研究发现,因乙基紫在p H2.8的C l a r k-L u b s缓冲溶液中先与水分子形成了超分子聚集体而引起强烈的共振光散射现象,随着酒石酸泰乐菌素的加入,其与乙基紫反应生成电荷转移配合物,破坏了超分子聚集体,产生共振光散射强度减弱现象,产生了3个特征572第3期袁莉等:乙基紫三波长叠加共振光散射光谱法测定酒石酸泰乐菌素含量第3 9卷的共振光散射峰,分别位于3 2 5n m、5 1 0n m、6 7 0n m。因共振光散射强度IR L S具有加和性,因此本文设计三波长叠加法检测酒石酸泰乐菌素的含量。探讨了适宜的反应条件和共存物质的影响,并用于注射用酒石酸泰乐菌素含量的测定,取得满意的结果。1 实验部分1.1 主要仪器与试剂F-7 0 0 0型荧光分光光度计(日本日立公司);B S 2 1 0 S型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)。乙基紫(分析纯,4.01 0-4m o l/L,北京索莱宝科技有限公司);酒石酸泰乐菌素标准品(2 0g/袋,回盛生物科技有限公司)。1.2 溶液配制1 0 0.0m g/L酒石酸泰乐菌素标准储备液制备:称取1 0 0.0m g的酒石酸泰乐菌素于10 0 0m L的容量瓶中,加水溶解并且定容,即得到1 0 0.0m g/L标准溶液。使用时将溶液稀释成2.0m g/L的标准溶液。待测溶液制备:准确移取适量的2.0m g/L酒石酸泰乐菌素标准溶液、0.9m Lp H2.8的C l a r k-L u b s缓冲溶液以及0.9m L的乙基紫溶液置于1 0m L比色管中,加去离子水至刻度,摇匀使其溶解。空白溶液制备:准确移取0.9m Lp H2.8的C l a r k-L u b s缓冲溶液以及0.9m L的乙基紫溶液置于1 0m L比色管中,加去离子水至刻度,摇匀使其溶解。1.3 实验方法分别将待测溶液和空白溶液置于荧光分光光度计中,将激发波长和发射波长同时设置为3 2 5n m或5 1 0n m或6 7 0n m,以空白溶液为参比,进行同步扫描得到共振光散射图谱,记录空白试剂溶液的共振光散射强度I0和酒石酸泰乐菌素标准溶液的共振光散射强度I,计算共振光散射强度差IR L S=I0-I。2 结果与讨论2.1 光谱特征图1 共振光散射图谱F i g.1 R e s o n a n t l i g h t s c a t t e r i n gm a pC u r v e s1:b l a n ks o l u t i o n,c u r v e s2-7:t h ec o n c e n t r a t i o no ft y l o s i nt a r t r a t e i n c r e a s e ss e q u e n t i a l l y.以空白溶液为参比,在2 0 08 0 0n m范围内,扫描空白溶液和不同浓度待测溶液的共振光散射图谱,如图1所示。空白溶液能引起强烈的共振光散射强度(曲线7),但随着酒石酸泰乐菌素溶液的加入,体系内共振光散射强度减弱,且体系内共振光散射强度随酒石酸泰乐菌素浓度的增大而逐渐减弱,并分别在3 2 5n m、5 1 0n m、6 7 0n m处出现3个特征峰,3个特征峰的共振光散射强度差IR L S也达到最大,故选择3 2 5n m、5 1 0n m、6 7 0n m为测定波长。2.2 C l a r k-L u b s缓冲溶液的影响针对B r i t t o n-R o b i n s o n、HA c-N a A c、C l a r k-L u b s等不同缓冲溶液对体系共振光散射强度的影响进行了研究,发现在C l a r k-L u b s缓冲溶液中,体系的共振光散射强度差IR L S达到最大,故选用C l a r k-L u b s缓冲溶液。研究了C l a r k-L u b s缓冲溶液p H值在2.43.4范围内和体积在0.6m L1.2m L范围内对体系的影响。结果如图2、3所示,不管采用单波长检测法还是三波长叠加检测法,p H值在2.8,体积在0.9m L时,体系共振光散射强度差值IR L S达到最大,故选用0.9m Lp H2.8的C l a r k-L u b s缓冲溶液。2.3 乙基紫的影响乙基紫属于阳离子三苯甲烷类染料,是本次体系电荷转移反应的关键物质,因此它用量的多少对体系共振光散射强度有着重要的影响。研究了用量在0.7m L1.2m L范围内4.01 0-4m o l/L乙基紫对体系的影响,结果显示,不论采用单波长检测法还是三波长叠加检测法,乙基紫用量在0.9m L时,体系共振光散射强度差值IR L S达到最大,因此选择0.9m L的4.01 0-4m o l/L乙基紫为最佳用量。2.4 反应时间的影响电荷转移反应时间对体系也有影响,故在室温下对时间进行考察,考察范围为06 0m i n。不管采用672第3期分 析 科 学 学 报第3 9卷单波长检测法还是三波长叠加检测法,通过测定规律时间间隔,发现体系的反应时间在1 5m i n时,共振光散射强度差值IR L S达到最大,随后下降。因此选择体系反应时间在1 5m i n时完成检测。图2 不同p H值的C l a r k-L u b s缓冲溶液对体系共振光散射强度的影响F i g.2 E f f e c to ft h eC l a r k-L u b sb u f f e rs o l u t i o nw i t hd i f f e r e n tp Hv a l u e so nt h er e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n gi n t e n s i t yo f t h e s y s t e mC u r v e(1-3):d e t e c t i o nw a v e l e n g t hi s3 2 5n m,5 1 0n ma n d6 7 0n mr e s p e c t i v e l y;c u r v e 4:d e t e c t i o nw a v e l e n g t h(3 2 5+5 1 0+6 7 0)n m.t y l o s i n t a r t r a t e:0.8 0m L;C l a r k-L u b sb u f f e r s o l u t i o n:0.9 0m L;e t h y l v i o l e t:0.9 0m L;r e a c t i o n t i m e:1 5m i n.图3 C l a r k-L u b s缓冲溶液的用量对体系共振光散射强度的影响F i g.3 E f f e c to f t h ea m o u n to fC l a r k-L u b sb u f f e rs o-l u t i o no nt h ei n t e n s i t yo fr e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n gi nt h e s y s t e mC u r v e(1-3):d e t e c t i o nw a v e l e n g t hi s3 2 5 n m,5 1 0n m,6 7 0n m,r e s p e c t i v e l yc u r v e4:d e t e c t i o nw a v e l e n g t h(3 2 5+5 1 0+6 7 0)n m.t y l o s i nt a r t r a t e:0.8 0m L;p H=2.8;e t h y lv i o l e t:0.9 0m L;r e a c t i o nt i m e:1 5m i n.2.5 工作曲线与检出限图4 不同浓度酒石酸泰乐菌素溶液的工作曲线F i g.4 W o r k i n gc u r v e so fd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so f t y l o s i nt a r t r a t eC u r v e1-d e t e c t i o nw a v e l e n g t h3 2 5n m;c u r v e2-d e t e c t i o nw a v e l e n g t h5 1 0 n m;c u r v e3-d e t e c t i o n w a v e l e n g t h6 7 0n m;c u r v e4-t h r e ew a v e l e n g t hs u p e r p o s i t i o nm e t h o d.准确移取体积为0.2 0、0.4 0、0.6 0、0.8 0、1.0 0、1.2 0m L浓度为2.0m g/L酒石酸泰乐菌素标准溶液,在“1.2溶液配制”项下得到空白溶液和不同浓度的待测溶液,根据“1.3实验方法”进行扫描,得到空白试剂溶液的共振光散射强度I0和 待测溶液的 共振光散射 强 度I,计 算 出IR L S。以酒石酸泰乐菌素质量浓度c为横坐标,共振光散射强度差值IR L S为纵坐标,绘制工作曲线,如图所4示。单波长检测法:c与IR L S在0.0 40.2 4m g/L范围内,当波长为3 2 5mm、5 1 0n m、6 7 0n m时,其线性方程和检出限依次为:IR L S=6 1 8 7.1c+4 5 6.1(R=0.9 9 9 2),检出限0.0 9 2m g/L;IR L S=8 1 3 8.6c+2 4 8.0 3(R=0.9 9 9 0),检出 限0.0 8 9 m g/L;IR L S=6 0 8 7.1c+2 2 4.5 3(R=0.9 9 9 0),检出限0.1 0 0m g/L。三波长叠加检测法:c与IR L S在0.0 40.2 4m g/L范围内呈良好线性关系,线性回归方程为IR L S=2 0 4 1 3c+4 7 9.6(R=0.9 9 9 9),检出限为0.0 3 0m g/L。可见,采用三波长叠加检测法时,线性关系良好,且其灵敏度约是单波长检测法灵敏度的3倍。2.6 共存物质的影响考察了常见的糖类、金属离子等物质对实验的干扰,在测得相对误差均不超过5%的条件下,选用三波长叠加法(3 2 5n m+5 1 0n m+6 7 0n m)进行检测时,发现5倍的M g2+、Z n2+;5 0倍的甘氨酸;8 0倍的K+、C l-、N a+、F-;1 5 0倍的可溶性淀粉、-环状糊精;2 0 0倍的硬脂酸镁、苯甲酸钠、葡萄糖均对2.0m g/L酒石酸泰乐菌素无干扰。验证了本文建立的方法具有良好的选择性。2.7 回收率实验根据药物制备处方配制酒石酸泰乐菌素模拟可溶性粉。精密量取酒石酸泰乐菌素模拟可溶性粉适量(约含酒石酸泰乐菌素2 0m g),置于10 0 0m L容量瓶中加去离子水定容,摇匀弃去初滤液,准确移取1 0m L续滤液置于1 0 0m L容量瓶中,去离子水定容摇匀,得到测定溶液。根据本法平行测定1 0次得出结果显示,酒石酸泰乐菌素回收率范围9 9.1 9%1 0 0.6 6%,平均回收率为9 9.8 2%,相对标准偏差(R S D,n=1 0)为0.4 6%。R S D均小于5%,符合药物分析工作要求。772第3期袁莉等:乙基紫三波长叠加共振光散射光谱法测定酒石酸泰乐菌素含量第3 9卷2.8 样品分析取市售不同产地注射用的酒石酸泰乐菌素1瓶(标示量为2.0g/瓶),精密量取0.1 0 0 0g置于10 0 0m L容量瓶中,加去离子水定容并摇匀,得到样品原溶液。将样品原溶液稀释至5 0倍,得到样品待测溶液。按照“1.3实验方法”测定,根据线性回归方程计算测定结果,结果如表2所示。同时与紫外分光光度法9比较,所测结果相一致(表2)。表1 样品中酒石酸泰乐菌素含量的分析结果T a b l e1 A n a l y s i s r e s u l t so f t y l o s i nt a r t r a t e i nt h e s a m p l e sS a m p l eT h i sm e t h o dU l t r a v i o l e t s p e c t r o p h o t o m e t r y9A v e r a g em e a s u r e dv a l u e(g/b o t t l e)A v e r a g e c o n t e n t r e l a t i v et o t h em a r k e dq u a n t i t y(%)R S D(%)A v e r a g em e a s u r e dv a l u e(g/b o t t l e)A v e r a g e c o n t e n t r e l a t i v et o t h em a r k e dq u a n t i t y(%)R S D(%)12.0 0 21 0 0.1 10.4 92.0 0 41 0 0.2 00.8 822.0 0 31 0 0.1 40.4 62.0 0 31 0 0.1 51.2 13 反应机理优化的实验条件下,当溶液中只存在阳离子三苯甲烷类乙基紫溶液时,会引起强烈的共振光散射现象。这是因为在p H2.8的C l a r k-L u b s缓冲溶液中,第1个乙基紫分子上的1个叔胺氮会与第一个水分子的一端O-H形成氢键,这个水分子另一端O-H又与第二个乙基紫分子上的1个叔胺氮形成氢键,第二个乙基紫分子上的另外1个叔胺氮再与第2个水分子的一端O-H形成氢键,这样依次循环构筑形成了图5 A所示的超分子聚合体,从而引起强烈的共振光散射信号强度。但随着酒石酸泰乐菌素溶液的图5 反应机理F i g.5 R e a c t i o nm e c h a n i s m872第3期分 析 科 学 学 报第3 9卷加入,体系的共振光散射强度减弱,并随着酒石酸泰乐菌素浓度增加而减小。因为此时乙基紫与水分子之间依靠氢键而构筑的超分子遭到破坏,游离的阳离子乙基紫与酒石酸泰乐菌素中的酒石酸根依靠静电引力作用形成了离子缔合物,而泰乐菌素分子中的叔胺氮因具有孤对电子,故可作为电子给予体,与乙基紫和酒石酸根依靠静电引力形成的离子缔合物(电子接受体)发生电荷转移反应,形成了电荷转移配合物,如图5 B所示,体系中因电荷转移配合物的形成破坏了乙基紫与水分子之间构筑的超分子聚集体,从而导致体系的共振光散射强度显著减弱。4 结论在p H2.8的C l a r k-L u b s缓冲溶液中,乙基紫与水分子之间依靠氢键形成了超分子聚合物,引起强烈的共振光散射现象;随着酒石酸泰乐菌素的加入,由于乙基紫与酒石酸泰乐菌素形成离子缔合型的电荷转移配合物,从而引起该超分子聚合物分解,导致共振光散射强度减弱。本研究依据上述体系在3 2 5n m、5 1 0n m、6 7 0n m3个特征散射峰的强度减弱,首次建立了乙基紫三波长叠加共振光散射光谱测定酒石酸泰乐菌素含量的新方法。该方法操作简便、选择性好、灵敏度高,适合于酒石酸泰乐菌素可溶性粉的快速检测。参考文献:1 QU N.S t u d yo nQ u a l i t ya n dS t a b i l i t yo fT y l o s i nT a r t r a t eG r a n u l e s,J i n a n:S h a n g d o n gU n i v e r s i t y(曲宁.酒石酸泰乐菌素颗粒质量研究,济南:山东大学),2 0 1 3.2 M I N Y.G e n e t i cM a n i p u l a t i o no fS t r e p t o m y c e sF r a d i a ea n dS t r e p t o m y c e sT h e r m o t o l e r a n s,H u b e i:H u a z h o n gA g r i c u l-t u r a lU n i v e r s i t y(闵勇.弗氏链霉菌及耐热链霉菌的遗传改造,湖北:华中农业大学),2 0 0 6.3 S HE NY M,L I UZF,L iT,e t a l.T h eJ o u r n a l o fC h e m i c a lT h e r m o d y n a m i c s,2 0 1 5,8 0:1 2 8.4 Z HON GLL,Z HE NGXG,Z HA OS,e ta l.J o u r n a lo fA n a l y t i c a lS c i e n c e(仲伶俐,郑幸果,赵珊等.分析科学学报).2 0 2 1,3 7(1):5 7.5 T I ANXY.D e t e r m i n a t i o no fT y l v a l o s i nT a r t r a t e i nO r i g i n a lM e d i c i n ea n dP r e m i xb yA n t i b i o t i cM i c r o b i a lA s s a y.Y i n-c h u a n:N i n g x i aU n i v e r s i t y(田新岳.抗生素微生物检定法测定酒石酸泰万菌素及其预混剂中泰万菌素的含量.银川:宁夏大学),2 0 2 1.6 WANGLX,L ISL,CHE NDT,e t a l.J o u r n a l o fA n h u iA g r i c u l t u r a l S c i e n c e s(王丽霞,李生龙,陈砀桐等.安徽农业科学),2 0 2 0,4 8(2 0):2 0 6.7 B A OJH,Z HAN GJX,GUOQG,e t a l.C h i n e s eJ o u r n a l o fV e t e r i n a r yD r u g(包洁华,张金霞,郭强功等.中国兽药杂志),2 0 1 5,4 9(2):3 5.8 L I U H Y,Z HE NGJ.V e t e r i n a r yP h a r m a c e u t i c a l s&F e e dA d d i t i v e s(刘红云,郑举.兽药与饲料添加剂),2 0 0 3,8(3):3 3.9 YU W,GU WS.V e t e r i n a r yP h a r m a c e u t i c a l s&F e e dA d d i t i v e s(于伟,顾文松.兽药与饲料添加剂),2 0 0 9,1 4(5):2 8.1 0X I ON GYJ,L IYQ,Z HUXJ,e t a l.A c t aA g r i c u l t u r a eB o r e a l i-o c c i d e n t a l i sS i n i c a(熊永洁,李引乾,朱晓娟等.西北农业学报),2 0 1 0,1 9(3):2 6.1 1F E N GY H,YANGBY,Q I A OGJ,e t a l.M e t a l l u r g i c a lA n a l y s i s(冯玉怀,杨丙雨,乔广军等.冶金分析),2 0 0 8,2 8(3):2 0.1 2Z ONGN,Z E N GSH,Q IQ.C h e m i c a lR e s e a r c ha n dA p p l i c a t i o n(宗宁,曾绍汉,戚琦.化学研究与应用),2 0 1 7,2 9(1):4 4.1 3D UAN H.S t u d yo n t h eN e w M e t h o d s f o r t h eD e t e r m i n a t i o no fP e n i c i l l i nA n t i b i o t i c sb yR e s o n a n c eR a y l e i g hS c a t t e r i n ga n dR e s o n a n c eN o n-l i n e a rS c a t t e r i n g,C h o n gQ i n g:S o u t h w e s tU n i v e r s i t y(段慧.共振瑞利散射和共振非线性散射光谱法测定青霉素类抗生素的新方法研究.重庆:西南大学),2 0 0 8.1 4CHE NX,TAN GBW,Z HOU H B.J o u r n a lo fG u a n g d o n gP h a r m a c e u t i c a l(陈曦,唐冰雯,周宏兵.广东药科大学学报),2 0 1 0,2 6(2):2 0 5.1 5J I AN G H,P ANGXD,HU Y.A c t aP h a r m a c e u t i c aS i n i c a(江虹,庞向东,胡影.药学学报),2 0 2 0,5 5(2):2 9 8.1 6L I U Y,L IXT,J I ANG H.C h i n e s eJ o u r n a lo fA n a l y s i sL a b o r a t o r y(刘艳,李晓彤,江虹.分析试验室),2 0 1 9,3 8(1 1):1 3 2 0.972第3期袁莉等:乙基紫三波长叠加共振光散射光谱法测定酒石酸泰乐菌素含量第3 9卷D e t e r m i n a t i o no fT y l o s i nT a r t r a t eb yT h r e e-W a v e l e n g t hS u p e r i m p o s e dR e s o n a n c eL i g h t S c a t t e r i n gM e t h o dw i t hE t h y lV i o l e tYUANL i1,2,L I UY i1,2,CHU W e n1,2,YUANJ i a y i1,2,MA W e i x i n g*1,2,3(1.S c h o o l o fP h a r m a c y,J i a n g s uO c e a nU n i v e r s i t y,L i a n y u n g a n g2 2 2 0 0 5;2.S c h o o l o fB i o m e d i c a l I n d u s t r y,J i a n g s uO c e a nU n i v e r s i t y,L i a n y u n g a n g2 2 2 0 0 5;3.K e yL a b o r a t o r yo fM a r i n eD r u gS c r e e n i n go fJ i a n g s uP r o v i n c e,L i a n y u n g a n g2 2 2 0 0 5)A b s t r a c t:B a s e do n t h e r e a c t i o no f t y l o s i n t a r t r a t ew i t he t h y l v i o l e t i nC l a r k-L u b sb u f f e r s o l u t i o nw i t hp H2.8,an e wm e t h o df o r t h ed e t e r m i n a t i o no f t y l o s i nt a r t r a t eb yt h r e e-w a v e l e n g t hs u p e r p o s i t i o nr e s o n a n c el i g h ts c a t t e r i n gs p e c t r o m e t r y w a se s t a b l i s h e d.T h es u i t a b l er e a c t i o nc o n d i t i o n sa n dt h ei n f l u e n c eo fc o e x i s t i n gs u b s t a n c e sw e r ed i s c u s s e db y t h r e e-w a v e l e n g t hs u p e r p o s i t i o nm e t h o d.T h e r e s u l t s s h o w e d t h a tt h es y s t e mp r o d u c e dt h r e ec h a r a c t e r i s t i cp e a k sa t3 2 5n m,5 1 0n ma n d6 7 0n m,r e s p e c t i v e l y,a n dt h ec o n c e n t r a t i o no f t y l o s i nt a r t r a t es h o w e dag o o d l i n e a r r e l a t i o n s h i p i nt h e r a n g eo f 0.0 4-0.2 4m g/L.T h el i n e a r r e g r e s s i o ne q u a t i o n sw e r eIR L S=6 1 8 7.1c+4 5 6.1,IR L S=8 1 3 8.6c+2 4 8.0 3a n dIR L S=60 8 7.1c+2 2 4.5 3,r e s p e c t i v e l y.T h ec o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t sRw e r e0.9 9 9 2,0.9 9 9 0a n d0.9 9 9 0,r e s p e c t i v e l y.T h ed e t e c t i o nl i m i t sw e r e0.0 9 2m g/L,0.0 8 9m g/La n d0.1 0 0m g/L,r e s p e c t i v e l y.H o w e v e r,w h e nu s i n gt h et h r e e-w a v e l e n g t hs u p e r p o s i t i o nd e t e c t i o nm e t h o d,t h el i n e a rr e g r e s s i o ne q u a t i o nw a sIR L S=2 0 4 1 3c+4 7 9.6(u n i tci sm g/L),R=0.9 9 9 9,a n dt h ed e t e c t i o nl i m i tw a s0.0 3 0m g/L.T h es e n s i t i v i t yo ft h r e e-w a v e l e n g t hs u p e r p o s i t i o nd e t e c t i o nm e t h o d i s a b o u t t h r e e t i m e sh i g h e r t h a n t h a t o f t h e s i n g l e-w a v e l e n g t hd e t e c t i o nm e t h o d.T h ee s t a b l i s h e de t h y l v i o l e t t h r e e-w a v e l e n g t hs u p e r p o s i t i o nr e s o n a n c e l i g h ts c a t t e r i n gs p e c t r o m e t r yh a s t h ea d v a n t a g e so f l o wc o s t a n dh i g hs e n s i t i v i t y,s o i t c a nb es u c c e s s f u l l ya p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no f t y l o s i nt a r t r a t e.K e y w o r d s:T y l o s i nt a r t r a t e;E t h y lv i o l e t(E V);S u p e r-m o l e c u l a ra g g r e g a t e s;C h a r g e-t r a n s f e rc o m p l e x;T h r e e-w a v e l e n g t hs u p e r i m p o s e dr e s o n a n t l i g h t s c a t t e r i n gt e c h n i q u e082