维药核桃青皮的生药学研究_付晓.pdf

，化学与生物工程 基金项目：新疆维吾尔自治区“十四五”重点学科中医学项目（），新疆维吾尔自治区自然科学基金项目（），新疆特色植物资源与产业化研究项目（）收稿日期：作者简介：付晓（），女，山东德州人，硕士，实验师，研究方向：中药民族药，：；通讯作者：田树革（），男，教授，博士生导师，研究方向：中维药，：。：付晓，晏千茜，田树革维药核桃青皮的生药学研究化学与生物工程，（）：，（）：维药核桃青皮的生药学研究付晓，晏千茜，田树革（新疆医科大学中医学院，新疆 乌鲁木齐 ）摘要：对核桃青皮的性状、显微特征进行了鉴别，采用薄层色谱（）法对核桃青皮中齐墩果酸进行了定性鉴别；采用单因素实验优化了核桃青皮中齐墩果酸的提取工艺，并采用紫外可见分光光度法测定了核桃青皮中齐墩果酸的含量。结果表明，以三氯甲烷甲醇甲酸（，体积比）为展开剂时，核桃青皮中齐墩果酸的 图谱斑点清晰，分离度好；核桃青皮中齐墩果酸的最佳提取工艺为：超声提取、以甲醇为提取溶剂、超声时间 ；齐墩果酸浓度在 范围内与吸光度呈良好的线性关系；批新疆不同产地的核桃青皮中齐墩果酸平均含量为 。该方法操作简便、结果准确，适用于核桃青皮的质量控制。关键词：核桃青皮；生药学；齐墩果酸；薄层色谱法；紫外可见分光光度法；提取工艺；优化中图分类号：，（，）：，（，），：，：；核桃青皮，又名“青龙衣”，是胡桃科（）胡桃属（）植物核桃（）和核桃楸（）的未成熟外果皮。核桃青皮味辛、苦，性涩、平，微寒，有毒，具有清付晓，等：维药核桃青皮的生药学研究 年第期 热解毒、祛风疗癣、止痛止痢等功效。核桃在我国新疆、四川、云南、山东、河北等 个省（区、市）均有大量种植，产量十分丰富，位居世界第一。核桃加工过程中，大量核桃青皮处理不当极易造成环境污染及资源浪费。张浩等将核桃壳超微粉与电炉渣超微粉进行复合，制备了具有良好降解甲醛性能的生态活性炭，实现了废弃物的高附加值利用。核桃青皮收载于 卫生部颁药品标准（中药材第一册）中，但不甚详细，只有性状描述，没有定量指标。对核桃青皮进行回收和二次加工，并对其进行质量评价显得尤为重要。近年来，对核桃青皮的研究主要集中在醌类化合物，但核桃青皮中的萜类成分也极具活性和研究价值。在此，作者对核桃青皮中萜类成分齐墩果酸进行进一步研究，并通过对核桃青皮进行定性与定量研究，为科学评价和有效控制核桃青皮药材的质量提供理论依据。实验 药材新疆个产地（皮山县、墨玉县、叶城县、五家渠市、疏附县）的核桃青皮，由新疆银朵兰维药股份有限公司提供，经新疆医科大学姚蓝副教授鉴定为胡桃科植 物 核 桃（）和 核 桃 楸（）的未成熟外果皮。试剂与仪器齐墩 果 酸 对 照 品（批 号 ，纯 度），中原植提标准品经销中心；无水乙醇、乙醇、三氯甲烷、甲醇、香草醛、冰醋酸、高氯酸、浓硫酸、水合氯醛、甘油，均为分析纯；实验用水为纯净水。硅胶薄层板，安徽良臣硅源材料 有限 公司；型 电 子 天 平，永 康 香 山 衡 器 有 限 公 司；型数控超声波清洗器，昆山超声仪器有限公司；型数显恒温水浴锅，金坛医疗仪器厂；型薄层加热器，上海科哲生化科技有限公司；型紫外仪，北京六一仪器厂；普析通用 型紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；型数码显微镜；广泛 试纸。结果与讨论 核桃青皮的性状鉴别核桃青皮为皱缩的半球形或不规则块片状，边缘多向内卷曲，质脆，易折断，直径，厚 ；外表面呈黑棕色或黑黄绿色，表皮皱缩，密生黄色斑点，一端有一果柄痕；内表面呈黑褐色，粗糙，附纵向筋络状维管束（图）；气微，味微苦、涩，嚼之有沙粒感。图核桃青皮的照片 核桃青皮的显微鉴别取核桃青皮粉末（黑棕色），经水合氯醛透化和稀甘油装片后进行显微鉴别，结果如图所示。图核桃青皮粉末的显微鉴别 由图可知，核桃青皮粉末中石细胞孔腔明显，壁厚；多见螺纹导管；含有许多薄壁细胞；有少量黄色色块，推测为色素。核桃青皮中齐墩果酸的薄层色谱鉴别 溶液的制备 对照溶液的制备付晓，等：维药核桃青皮的生药学研究 年第期 取齐墩果酸对照品适量，用甲醇配制成 的齐墩果酸对照溶液。供试溶液的制备精密称取核桃青皮粉末，加入 甲醇，混匀，超声 后，离心 ，过滤，滤液蒸干，用甲醇定容至，即得供试溶液。薄层色谱鉴别分别取供试溶液、齐墩果酸对照溶液适量，点样于同一硅胶 薄层板上，以三氯甲烷甲醇甲酸（，体积比，下同）为展开剂，饱和，展开；取出晾干，喷以 硫酸乙醇溶液，加热至斑点清晰，于日光下检测，结果如图所示。齐墩果酸对照溶液供试溶液图核桃青皮中齐墩果酸的薄层色谱鉴别 由图可知，供试溶液与齐墩果酸对照溶液在相同位置上显示相同颜色的斑点，且斑点清晰，比移值适中。表明展 开剂三 氯 甲 烷甲 醇甲 酸（）的延展性良好，可用于核桃青皮中齐墩果酸的薄层色谱鉴别。核桃青皮中齐墩果酸的提取工艺优化 提取方式对齐墩果酸提取率的影响精密称取份核桃青皮粉末各，分别置于 锥形瓶中，按料液比（，下同）加入甲醇，分别采用浸提、回流、超声等种提取方式提取，考察提取方式对齐墩果酸提取率的影响，结果如图所示。由图可知，采用超声提取时，齐墩果酸提取率最高，提取效果最好。因此，选择超声法提取核桃青皮中齐墩果酸。提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响精密称取份核桃青皮粉末各，分别置于 锥形瓶中，按料液比 分别加入 乙图提取方式对齐墩果酸提取率的影响 醇、乙醇、甲醇，超声提取 ，考察提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响，结果如图所示。图提取溶剂对齐墩果酸提取率的影响 由图可知，以甲醇为提取溶剂时，齐墩果酸提取率最高，提取效果最好。因此，选择最佳提取溶剂为甲醇。超声时间对齐墩果酸提取率的影响准确称量份核桃青皮粉末各，分别置于 锥形瓶中，按料液比 加入甲醇，分别超声提取 、，考察超声时间对齐墩果酸提取率的影响，结果如图所示。图超声时间对齐墩果酸提取率的影响 付晓，等：维药核桃青皮的生药学研究 年第期 由图可知，随着超声时间的延长，齐墩果酸提取率逐渐升高；当超声时间超过 后，齐墩果酸提取率变化不大。因此，从节能环保的角度考虑，选择最佳超声时间为 。核桃青皮中齐墩果酸的含量测定 溶液的制备 对照溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品约 ，置于 容量瓶中，加入适量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得 齐墩果酸对照溶液。供试溶液的制备精密称取核桃青皮粉末，加入 甲醇，超声 ，离心 ，取上清液，蒸干定容至 ；吸取上述溶液 于具塞试管中，水浴挥干甲醇，加入新制的香草醛冰醋酸溶液 、高氯酸，水浴 ，取出冷却至 ，用冰醋酸定容至，摇匀，即得供试溶液。检测波长的确定取 齐墩果酸对照溶液于具塞试管中，水浴挥干甲醇，加入新制的香草醛冰醋酸溶液 、高氯酸，水浴 ，取出冷却至 ，用冰醋酸定容至，摇匀，以相应试剂为空白，采用紫外可见分光光度法（中华人民共和国药典 版一部附录，下同）在 范围内进行测定。发现，在 处有最大吸收峰。因此，确定检测波长为 。方法学考察 线性关系分别精密吸取 齐墩果酸对照溶液 、于 容量瓶中，用甲醇定容至刻度；吸取上述溶液 于具塞试管中，后续按 方法测定 处吸光度，以浓度（，）为横坐标、吸光度（）为纵坐标绘制标准曲线，拟合得线性回归方程：.，。表明齐墩果酸浓度在 范围内与吸光度呈良好的线性关系。精密度取齐墩果酸对照溶液份，连续测定次，测得吸光度平均值为 ，值为 。表明该方法精密度良好。重复性取核桃青皮粉末，按 方法平行制备供试溶液份，测得齐墩果酸平均含量为 ，值为 。表明该方法重复性良好。稳定性取供试溶 液 份，分 别 放 置 、测定吸光度，测得 值为 。表明供试溶液在 内稳定性良好。加标回收率精密称取份核桃青皮粉末各，分别加入齐墩果酸对照溶液，按料液比 加入甲醇，再按 方法平行制备供试溶液，测定吸光度并计算齐墩果酸含量。结果表明，齐墩果酸平均加标回收率为 （），值为 ，加标回收率符合要求。样品测定精密称取新疆个产地的核桃青皮粉末各，按 方法平行制备供试溶液份，测定吸光度并计算齐墩果酸含量，结果见表。表不同产地的核桃青皮中齐墩果酸的含量 编号来源采集期齐墩果酸含量 平均含量 新疆皮山县月 新疆墨玉县月 新疆叶城县月 新疆五家渠市月 新疆疏附县月 结论核桃青皮的鉴别结果表明，干品可以外表皮皱缩，呈黑棕色或黑黄绿色，密生黄色斑点，内表面呈黑褐色，附纵向筋络状维管束，味微苦、涩，嚼之有沙粒感作为性状鉴别特征；粉末可以石细胞、螺纹导管、薄壁细胞、黄色色块作为显微鉴别特征；以三氯甲烷甲醇甲酸（）为展开剂时，核桃青皮中齐墩果酸的 图谱斑点清晰，分离度好。核桃青皮中齐墩果酸的最佳提取工艺为：超声提取、以甲醇为提取溶剂、超声 时 间 ；齐 墩 果 酸 浓 度 在 范围内与吸光度呈良好的线性关系；新疆个产地的核桃青皮中齐墩果酸平均含量为 。该方法操作简便、结果准确，适用于核桃青皮的质量控制。参考文献：付晓，等：维药核桃青皮的生药学研究 年第期 张迅杰，赫军，柳芳，等青龙衣的化学成分和质量控制研究进展山东中医药大学学报，（）：江苏新医学院中药大词典（下册）上海：上海科学技术出版社，：张浩，张磊，龙红明电炉渣超微粉改性生物质废弃物制备生态活性炭的光谱学分析 光谱学与光谱分析，（）：，（）：李子文，李宗朋，买书魁，等 最小二乘支持向量机的核桃露饮品中脂肪成分的定量分析光谱学与光谱分析，（）：，（）：何勇，郑启帅，张初，等基于中红外光谱和化学计量学算法鉴别核桃产地及品种 光谱学与光谱分析，（）：，（）：周媛媛，刘雨新，孟颖，等青龙衣中的醌类成分研究中医药学报，（）：，（）：周媛媛，蒋艳秋，孟颖，等 青龙衣活性部位的化学成分研究中成药，（）：，（）：柴丽华，宋海龙，马晓玲，等 青龙衣化学成分的分离及其体外抗肿瘤活性的研究中草药，（）：，（）：李嗣乾，迟洪影，李艺，等超声波提取杏鲍菇三萜类化合物工艺的研究 食品研究与开发，（）：，（）：（上接第 页），（）：，：，：，：，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，（），（）：，：，（）：