细胞样品收集注意事项.doc

细胞样品收集方法
一、 蛋白
以T75培养瓶为例
1. 把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆；
2. 每培养瓶加入300ul RIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞与裂解液充分接触）, 把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM, 8min）,彻底移除上清，加入300ul RIPA裂解液，吹打12下后，把裂解液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜封口后置于-80℃保存；注意做好标记！
（如果用PBS洗涤后，细胞未飘起，则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶）
备注：给你提供的RIPA裂解液用EP管装，每管990ul，同时提供PMSF,使用时每管加入10ul PMSF,混匀再使用。操作要快，做好一瓶，放好一瓶！强烈建议一瓶一瓶的做。
表一
培养器皿
RIPA裂解液用量
备注
6孔板
150-300ul
根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml
35mm培养皿
150-300ul
根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml
60mm培养皿
300-600ul
根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml
100mm培养皿
600-1200ul
根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml
T25培养瓶
300-600ul
根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml
T75培养瓶
600-1000ul
根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml