(中华急诊医学杂志)胰岛素样生长因子-Ⅰ对重症急性胰腺炎大鼠小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响.pdf

6 1 8 史堡叁趁匿堂盘查至塑堡垒旦筮!墨鲞筮鱼塑鱼堕坠匦堡幽：鲤2 鲤：型：!：盟Q：基础研究胰岛素样生长因子I 对重症急性胰腺炎大鼠小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响王映珍王世文高宁孙志江贾晓冬吕苗【摘要】目的研究外源性胰岛素样生长因子I(I G F-工)对重症急性胰腺炎(S A P)大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡及凋亡相关基因b a x，b e l 2，c a s p a s e-3m R N A 表达的影响。方法7 2 只雄性W i s t a r 大鼠按照随机数字表法分为假手术组(s o 组)、重症急性胰腺炎组(S A P 组)、I G F-I 治疗组(I G F-I 组)共三组。通过胰胆管逆行注射5 牛磺胆酸钠制作大鼠S A P 模型，S 0 组用同样方法经胰胆管逆行注射生理盐水；I G F-I 组分别于术后3 0r a i n 和术后3h 经后肢内侧皮下注射I G F-I。各组动物分别于术后6，1 2，2 4h 处死8 只，检测血浆淀粉酶，T U N E L 法检测小肠黏膜上皮细胞凋亡，观察小肠组织病理学变化并进行病理评分，逆转录聚合酶链反应(R T-P C R)法检测小肠黏膜上皮细胞中b a x，b c l 2 和c a s p a s e-3m R N A 的表达。数据采用S P S S1 1 0 统计软件分析，多组间比较采用单因素方差分析。结果I G F-I治疗组与S A P 组各时相点相比，血浆淀粉酶和小肠病理评分均低于各相应时相点，于1 2h 和2 4h 差异有统计学意义，均P 0 0 5；小肠黏膜上皮细胞凋亡指数I G F-I 组与S A P 组各相应时相点相比均显著降低 6h：(1 3 8 8 1 7 3)v s(1 9 0 0 2 7 8)；1 2h：(1 0 1 3 1 5 5)v s(1 7 6 3 1 印)；2 4h：(9 5 04-1 0 7)v s(1 7 2 5 2 7 6)，P 0 0 5；电镜示小肠组织病理变化较S A P 组明显改善。b a x m R N A 表达在S A P 组各时点较S 0 组相应时相点明显增高 6h：(1 3 54-0 1 8)v s(0 8 5 0 1 2)；1 2h：(1 2 1 0 2 1)v s(0 8 6-4-0 2 4)；2 4h：(1 1 4 0 2 4)v s(0 9 5 4-0 2 2)，6h 即达高峰，而在I G F-I 组的表达与S A P 组相应时相点比较则明显减弱，在1 2h 和2 4h 差异具有统计学意义(P 0 0 5)，于2 4h 即接近s 0 组；e a s p a s e-3m R N A 表达在S A P 组各时相点较S 0 组相应时相点明显增高 6h：(0 7 8 0 0 1)v s(0 5 5 0 0 4)；1 2h：(o 7 9 o 0 4)v 8(0 5 7 0 0 5)；2 4h：(o 8 14-0 0 6)v s(0 5 5 0 0 1)(P 0 0 1)，而在I G F-I 组的表达与S A P 组相应时相点比较则明显减弱，在1 2h 和2 4h 差异具有统计学意义(P 0 0 5，而在I G F-I 组各时相点的表达则明显增强E 6h：(o 6 5 4-0 0 7)V S(0 5 4 0 0 4)v 8(0 5 7 4-O 0 6)；1 2h：(0 6 9 0 0 4)v 8(0 5 6 0 0 5)V 8(0 5 3 0 0 5)；2 4h：(0 7 2 0 0 5)v 8(0 5 4 0 0 7)V S(0 5 8 0 0 8)，P O 0 5 。结论外源性I G F-I 通过拮抗S A P 大鼠小肠黏膜上皮细胞的凋亡从而可以减轻S A P 大鼠肠黏膜损害，其机制可能与其上调b e l-2m R N A 表达及下调b a x，c a s p a s e-3m R N A 表达有关。【关键词】胰岛素样生长因子1；重症急性胰腺炎；凋亡；B a x；B c l-2；C a s p a s e-3E f f e c t so fe x o g e n o u sI G F-Io ni n t e s t i n a ln a l c o s a le p i t h e U ac e Ha t m p t o s i si nr a t sw i t hs e v e ra c u t ep a n c r e-a f i t i sW A N GY i n g-z h e n，W A N GS h i-w e n，G 4 0N 堍，S U Nz h 扛泌n g，J r 4X i a o-d o n g L VM i a o G a n s uE m e r-g e n c yM e d i c a lA i dC e n t e r，珊伫 D 7 3 0 0 3 0，C h i n aC o r r e s p o n d i n ga u t h o r：W A N G 跏-w e n，E m a i hw s h w l 2 0 1 6 3 c o i n【A b s t r a c t】O b j e c t i v eT oi n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fe x o g e n o u sI G F-Io na p o p t o s i s，b a x，b e l-2a n dc n s p a s e-38 e n em R N A 砸m s c r i p I i o ni ni I】a e s t i n a lm u e o s a le p i t h e l i a lc e l l o fS A Pr a t s M e t h o dS e v e n t y-t w om a l eW i s t a rr a t aw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t os h a n io p e r a t i o ng r o u p(s o)，S A Pg r o u p(S A P)a n dI G F-It r e a l m e n t(S A P+I G F-I)g r o u p E v e r yg r o u pw a sr a n d o m l yd i v i d e di n t o3t i m eu n i t s(6，1 2，2 4h)，8r a t sa se a c ht i m eu n i t S A Pw a sI X)I：1 0 3 7 6 0 c m a j i s s n 1 6 7 1-0 2 8 2 2 0 0 9 0 6 0 1 7作者单位：7 3 0 0 3 0 兰州，甘肃省紧急医疗救援中心(王映珍、王世文)；甘肃省第二人民医院(高宁、贾晓冬、吕苗)；兰州石化总医院(孙志江)通信作者：王世文。E l r l a i l：w s h w l 2 0 1 6 3 哪万方数据生堡叁趁匿堂盘鲞2 塑生鱼旦筮!S 鲞筮鱼翅堂嫩幽：坦些垄塑：型：!墨：i n d u c e di nt h er a t sb y 刈e c t i n ga d 触l v5 0 s o d k e nt a u r o c h o l a t ei n t ob i l i a r y-p a n c r e a t i cd u c t n 砣S Or a t sw e r ei n f u s e dw i t hN Sb yt h e8 8 1 i t ew a y T h er a t si nI G F-Ig r o u pw e r ei n j e e t e dw i t hI G F-1b ys u b c u t a n ea th a l fa nh o u rb e f o r eo p e r a t i o na n dt h r e eh o u r sa f t e ro p e r a t i o n，r e s p e c t i v e l y A n i m a l si ne a c hg r o u pw e r ek i l l e ds e p a r a t e l ya t6，1 2a n d2 4h o m sa f t e ro p e r a t i o n a 舯p t o s i si nn m c o s a lc e i l s o fs m a l li n l l 蜥1 t ew a sd e t e c t e dhT U N E L。a n dh i s t op a t h o l o g i c a lc h a I g e so ft h es m a l li n t e s t i n ew a 8o b s e r v e d T h ee x p r e s s i o n so fb a xa n db c l-2a n dc a s p a s e-3m R-N Ag e n ei ns m a l li n t e s t i n ew e r et n e a s u r e db yi e v e r s eh r i p t i o np o l y I I l e r a s ec h a i nr e a c t i o n(R T-P C R)R e s u l t sC 0 恻w i t ht h eS A Pg r o u p，n l es e r u l na m y l a s ew e r el o w e ri nI G F-Ig r o u p，a n dt h e r ee x i s t e ds i g n i f i c a n ta t1 2ha n d2 4h(P O 0 5)1 1 1 ep a t h o l o g i c a ls c o r eo fs m a l li n t e s t i n a lw a ss i g n i f i c a n t l yr e d u c e di n1 G F-Ig r o u p 咖一p a r e dw i t hS A Pg r o u p，a n dt h e r ew e r es t a t i s t i c a ld i f f e r e n c e sa t1 2ha n d2 4h I nI G F oIg r o u p，t l l ea p o p t o s i si n d e xo f i n t e s t i n a le p i t h d i s id e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y c o m p a r e d w i t h s A Pg r o u p 6h：(1 3 8 8 1 7 3)v 8(1 9 0 0 2 7 8)；1 2h：(1 0 1 34-1 5 5)v s(1 7 6 3 1 6 0)；2 4h：(9 5 0 1 0 7)v s(1 7 2 5 2 7 6)(P 0 0 5)；t h eh i s t o p a t h d o g i c a lc h a n g e sw e r em o r ei m p r o v e dc o m p a r e dw i tS A Pg r o u pu n d e rt h ee l e c t r o n i cm i c r o s c o p e；t h e 明呻一s i o no f b o xm R N A 6h：(1 3 5 0 1 8)v 售(0 8 5 O 1 2)；1 2h：(1 2 1 0 2 1)v 吕(0 8 6 0 2 4)；2 4h：(1 1 40 2 4)v 8(0 9 5 0 2 2)a n dc a s p a s e-3m R N A 6h：(O 7 8 0 0 1)、陪(O 5 5 0 0 4)；1 2h：(0 7 9 0 0 4)v B(O 5 7 0 0 5)；2 4h：(0 8 1 0 0 6)v s(0 5 5 0 0 1)(P O 0 1)w e r eh i g h e ri nt h r e et i m eu n i t si nS A Pg r o u pt h a nt h o s ei nS Og r o u p(P 0 0 1)，a n di nI G F-1g r o u pi tw a sw e a k e n e ds i g n i f i c a n t l yc o m p a r e dw i t ht h eS A Pg r o u pa te a c ht i m ep o i n t(P 0 0 5)，b u ti n c r e a s e ds i g n i f y c a n t l yi nt h eI G F-Ig r o u pa te a c ht i m ep o i n t 6h：(O 6 5 0 0 7)v s(0 5 4 0，0 4)珊(0 5 7 0 0 6)；1 2h：(O 6 9 0 0 4)1，s(0 5 6 0 0 5)(0 5 34-0 0 5)；2 4h：(0 7 2 0 0 5)v s(0 5 4 0 0 7)v s(0 5 8 O 0 8)(P 0 0 5)C o n c l u s i o n sE x o g e n o u sI G F-Ic o u l dr i v a l r yS A Pi n d u c e da p o p t o s i st on m c o s a lc e l l so fs m a l li n t e s t i n e，t h e nc o u l da l l e v i a t eS A Pi M u c e di n j u I yt oi n t e s t i n a lm u c o s a l，I tm a yb ea s s o c i a t e dw i t ht h em e c h a n i s m st h a tI G F-Ic o u l di m p r o v et h ee x p r e s s i o no fb c l-2m R N Aa n di n h i b i tt h ee x p r e s s i o no fb a x、c a s p a s e-3m R N A【K e yw o r d s】l m t t U n-l i k eg r o w t hf a c t o rI；,s e V e r ea c u t ep a n c r e a t i t i s；A p o l o g i a；B a x；B c l-2；C a s p a s e-3肠黏膜上皮细胞过度凋亡参与了S A P 时肠黏膜屏障功能障碍的发生以及后期的肠道细菌移位和内毒素血症的发生，最终发展为多器官功能障碍，这也是S A P 死亡率居高不下的症结所在 2-3 。I G F-I 可以明显减轻氧化应激和缺血再灌注等原因所致的肠黏膜细胞的过度凋亡而对肠黏膜屏障具有保护效应【蝴J，表现出明显的抗凋亡作用。本研究应用外源性I G F 工对S A P 大鼠进行干预，利用T U N E L 法、透射电镜及R T-P C R 的方法，探讨外源性I G F-I 对大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡的影响。1 材料与方法1 1 动物模型与分组健康雄性W i s t a r 大鼠7 2 只(2 0 0-4-2 0)g，由兰州大学医学实验动物中心提供。大鼠随机分为S o组、S A P 组和I G F-I 组共三组，每组2 4 只。每组再分为3 个时相点(6，1 2，2 4h)，每个时相点8 只。术前禁食1 2h，自由饮水，采用2 戊巴比妥钠溶液腹腔内注射麻醉(0 2 5m L 1 0 0 9)。应用胰胆管逆行推注5 牛磺胆酸钠溶液制作S A P 动物模型，S o 组则推注生理盐水，剂量均为0 1m L 1 0 0 9，推注速度6 1 9 O 2m L m i n，注射完毕后，保持推注压力4w i n 后缝合腹壁各层。I G F I 组分别于术前3 0m i n 和术后3h 经后肢内侧皮下注射I G F-I 生理盐水溶液5 0t g k g(质量浓度2 0 m L)，即2 5m L k g；而S O 组和s A P 组则于相同时间点经上述途径注射生理盐水2 5i n L k g。实验动物术后禁食，自由饮水。1 2 主要试剂及仪器牛磺胆酸钠购自S i g m a 公司；I G F-I 为B i o v i s i o n公司产品；细胞凋亡原位检测(T U N E L)试剂盒购自德国R o c h e 公司；T f i z o l 试剂及R T-P C R 相关试剂购自大连宝生物公司；b a x，b c l 一2，c a s p a s e 3 和3-a c t i n 引物由大连宝生物公司合成；P C R 扩增仪(E l m p e rp e r k i n2 0 0 4)；凝胶成像分析系统为S y n g e n eG e n i u s 公司产品。1 3 标本采集及预处理各组动物分别于术后6、1 2、2 4h 三个时相点各取8 只用2 戊巴比妥钠溶液腹腔内注射麻醉后，经右心室取血5m L，分离血浆后保存于一7 0 待检。取距回盲部2c m 处回肠组织，置于冰冷的生理盐水中，沿纵轴剪开肠管，冲洗干净肠内容物，用滤纸吸干水后，分别用1 0 中性甲醛和2 5 戊二醛万方数据6 2 0 生堡叁坠匡堂苤查至塑堡垒旦箜!鲞筮鱼翅逝坠她型：燮2 塑：巡：!：固定做病理形态学检查，另一部分装入用D E P C 处理过的冻存管后即刻投入液氮内保存待检。1 4 血浆淀粉酶检测用全自动生化分析仪测定。1 5 小肠组织病理形态学观察1 5 1 光镜观察小肠组织石蜡切片行苏木素一伊红染色(h e m a t o x y l i n e o s i ns t a i n i n g，胍染色)。采用C h i u 氏6 级评分法1 9 j 评估损伤程度。1 5 2 回肠组织透射电镜观察用2 5 戊二醛溶液固定的小肠组织，经超薄切片后于J E M 1 2 3 0 型透射电镜上观察。1 6 肠黏膜上皮细胞凋亡检测采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d U T P 缺口末端标记(t e r m i n a ld e o x y n u c l e o t i d y lt m n s f e r a s e m e d i a t e dd U T Pn i c ke n d l a b e l i n g，T U N E L)法，检测小肠组织切片中凋亡细胞的核酸断裂片断并计算凋亡指数(A I)。结果判断：以肠上皮细胞核内发现棕色颗粒为阳性。光镜下计数每1 0 0 个上皮细胞中凋亡细胞个数，每张切片任选5 个视野，求其平均值，即凋亡指数。1 7b a x，b c l 2 和e a s p a s e 3m R N A 的检测采用T r i z o l 试剂提取总R N A，在2 0 止体系中分别用目的引物(下游引物)反转录合成c D N A 后应用聚合酶链式反应(P C R)检测b a x，b c l 一2 和c a s p a s e 一3m R N A 表达，以1 3-a c t i n 为内参。引物序列分别为：b a x，上游引物：5 一G A A G C T G A G CG A G T G TC r C C D 3，下游引物：5 -T G G T C A C T G T C T G C C AT G T C,G-3(扩增产物5 2 4b p)，b c l 2，上游引物：5 -C G G G C T G G G G A T G A C T r C I C T-3，下游引物：5 -G C A T C C C A G C C l C G T Y A T C C 一3(扩增产物2 9 6b p)；c a s p a s e 3 上游引物：57 C A T G G A C A A C A AC G A A A C C T C 一3，下游引物：5 -C T A C C C C A C T C C C A G T C A T F C 一37(扩增产物8 5 8 b p)；1 3-a c t i n 上游引物：5 A T G G；A T G A C G T A T C 啡3，下游引物：5 -A T G A G G T AG T I G T C A G G T-3(扩增产物4 4 5b p)；反应条件：变性9 4，退火为b a x5 7，b c l 2 为6 0，c a s p a s e 一3为5 2，1 3-a c t i n 为5 4，延伸7 2，循环数3 0。取1 0y LP C R 产物在1 0 琼脂糖凝胶上电泳，用D N A半定量扫描仪测定电泳带面积和光密度值，b a x，b c l 一2 和c a s p a s e 3 与内参照基因1 3-a c t i n 的比值，代表组织b a x，b c l 2 及c 鹊D a s e 3m R N A 相对表达量。1 9 统计学方法实验数据采用S P S S1 1 0 统计软件处理，计量资料以均数标准差(x s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用B o n f e r r o n i 或T a m h a n e 法，以P 0 0 5 为差异具有统计学意义。2 结果2 1 血浆淀粉酶结果显示血浆淀粉酶在S A P 组较s o 组各相应时相点显著升高(P 0 0 5)，但1 2 和2 4h 与S A P 组相同时点相比则均显著降低(P 0 0 5)。2 2 各组大鼠回肠组织电镜检查及既染色评分s o 组小肠上皮细胞间连接结构完整，偶见凋亡细胞；S A P 组肠上皮细胞问紧密连接基本正常，吸收细胞肿胀明显，微绒毛紊乱、稀疏、长短不一，同时可见明显细胞凋亡及凋亡后坏死现象，表现为核沿细胞膜浓缩、染色质凝集等核边界现象，1 2h 后微绒毛稀疏、脱落及线粒体肿胀更加明显。经I G F I治疗后微绒毛虽较稀疏，但无明显缺损，吸收细胞肿胀明显减轻，凋亡细胞数量亦明显减少。小肠组织病理学评分显示S A P 组较S o 组各相应时相点明显增高(P 0 0 5)，而I G F-I 组则较S A P 组各相应时相点明显降低(P 0 0 5)，见表l。2 3 肠黏膜细胞凋亡检测T U N E L 法显示S A P 组各时相点即可见较多的凋亡上皮细胞，凋亡指数较S O 组明显增高，以6h达高峰(P 0 0 5)。见表1及图1。2 4 小肠组织中b a x。b c l 2，e a s p a s e 3m R N A 的表达B a xm R N A 在S A P 组表达强于其他各组，术后6h 即达峰值，且变化与细胞凋亡指数呈显著的正相关(r：0 5 6，P 0 0 5)，而在I G F I 组则呈明显下降，与S A P 组各时相点相比差异具有统计学意义(P 0 0 1)；c a s p a s e 一3r n R N A 表达在S A P 组各时相点亦较S o 组相应时相点明显增高，而在I G F-I 组也明显下降，其变化与b a x 及凋亡指数的变化相一致；b c l 2m R N A 的表达在S o 组较弱，S A P 组表达虽有所增强，但与s o 组差异无统计学意义，而在I G F-I 组的表达则明显增强(P 0 0 5)，以2 4h 最明显(P 0 0 1)，且与S o 组和S A P 组各相应时相点的差异均具有统计学意义(P 0 0 5)。见表2 及图2。万方数据主堡鱼姿匡堂苤查2 塑堡垒旦筮!墨鲞箜鱼塑些旦!虹幽：避2 塑!堕：!墨：堕Q：表1各组大鼠小肠组织病理学评分及凋亡指数变化情况(t=8，；s)l a b l o 1C h 卸睁o ft h ei n t e s t i n a lC h i u s$P _ o r ea n da p o p t o s i si n d e xi ne v e r yg r o u p s(n=8，；4-s)肠组织病理学评分凋亡指数组男q一一6h1 2h2 4h6h1 2h2 4hS O 组。“O 6 3 0 5 30 7 54-0 4 6O 6 34-0 5 28 0 0 1 3 l8 1 34-2 0 58 1 3 2 0 3S A P 组2 3 8 1 0 6 2 褐0 9 9。2 7 54-0 7 1o1 9 0 0 2 7 8#1 7 6 34-1 6 0。1 7 2 5 2 7 6 I G F-i 组1 6 34-0 5 21 3 8 0 5 2 1 2 5 0 4 6 61 3 8 8 1 7 3 1 0 1 3 1 5 5 09 5 0 1 0 r 7 2注：与S 0 组相应时间点比较，。P 0 0 5，4P 0 0 1；与S A P 组相应时间点比较，6 P 0 0 5。P O 0 1图1T U N E L 法检测小肠黏膜上皮细胞凋亡(4 0 0)F 幻1D e t e c t i o no fa p o p t o t i ci n i n t e s t i n a lm u c o s a le p i t h e l i a lc e l l sb yT U N E Ls t a i n i n g(4 0 0)M：M a r k e r；1、2,3 分别为s o 组6、1 2、2 4h；4、5、6 分别为S A P 组6、1 2、2 4h；7、8、9 分别为I G F-l 组组6、1 2、2 4h图2 各组大鼠小肠组织b a x、b c l 2、c a s p a s e-3 及1 3-a c t i nm R N A 的表达F 的2E x p r e s s i o no fh a x、b c l-2、c a s p a s e-3a n dp t i nm R N Ao fi n t e s t i n a lm u c o s a le p i t h e l i a lc e l l s i ne v e r yg r o u p s表2 各组大鼠小肠组织b a x、b e l-2 及c a s p a s e-3m R N A 表达变化情况(r,=8，并4-s)T a b I o2C h a n g e so fb a x、b e l-2、c a s p a s e-3a n dp a c t i nf r l R N Ao fi n t e s t i n a lm u c o s a le p i t h e l i a lc e l l si ne v e r yg r o u p s(n=8，石4-s)绸导“一塑【-一堕生一塑堂生一。6h1 2h2 4h6h1 2h2 4h6h1 2h2 4hS 0 组0 8 54-0 0 40 8 6 0 0 30 8 34-0 0 30 5 44-0 0 40 5 6 0 0 50 5 4 0 0 30 5 54-0 0 40 5 7 0 0 50 5 5 4-0 0 lS A P 组1 1 9 O 0 4 41 1 6 0 0 2。I 1 4 0 0 3。0 5 7 0 0 20 5 7 0 0 10 5 8 4-0 0 l0 7 8 0 0 1。0 7 9 0 0 4 0 8 14-0 0 6。I G F-l 组1 1 0 0 0 2 0 9 74-0 0 4 0 8 74-0 0 3 0 6 54-0 0 2 0 6 9 0 0 4 00 7 2 0 0 2 0 7 24-0 0 40 6 6 0 O l o0 6 54-0 0 3。注：与s 0 组相应时问点比较，+P 0 0 5，。P O 0 1；与S A P 组相应时间点比较，6 P 0 0 5，P 0 0 13 讨论S A P 患者8 0 死亡于胰腺或胰周的继发感染，而继发感染源于S A P 时肠黏膜屏障破坏引起的细菌移位，肠黏膜屏障的破坏及通透性增高是细菌和内毒素大量移位的前提条件 10 1。王兴鹏等 1 研究发现，S A P 早期肠黏膜上皮细胞凋亡明显增加，且为细胞死亡的主要模式。凋亡细胞的增加，可使细胞总体数目减少，细胞问紧密连接分离，使一些生物大分子易于通过，发生内毒素和肠道细菌易位 1 l J。万方数据6 2 2 史堡叁趁匿堂盘查至塑堡垒旦筮!墨鲞箜鱼塑堡垒匦瑾丛鲤：堂2 塑：巡：!：因此肠黏膜上皮细胞凋亡参与了S A P 时肠屏障功能障碍的发生，为S A P 时肠屏障功能受损的原因之一 1，1 2 O细胞凋亡与多种基因诱导表达有关，在大鼠失血性休克与复苏后回肠组织凋亡机制等研究中发现，b a x，b c l 一2 和c a s p a s e 3 均参与了对凋亡的调控【1 3 J。b c l 2 基因家族是最主要的凋亡调控基因，其中b a x 是细胞凋亡的促进基因，而b c l 一2 是抑制细胞凋亡的基因。另外M 2 b a x 比值的变化能决定细胞对各种引起凋亡刺激的敏感性及细胞的生存与死亡引。C a s p a s e 3 是半胱天冬酶家族中最重要的凋亡执行者之一，在凋亡的执行阶段负责部分关键性蛋白的酶切，c a s p a s e 3 一旦被激活即表示凋亡不可逆转，且其是否被激活也是鉴别细胞坏死和凋亡的主要依据，故测定c a s p a s e-3 也是探讨细胞凋亡的有效方式之一。I G F-I 是对机体生长发育起着重要调节作用的单链多肽，有研究表明I G F-I 对多种细胞凋亡均有一定的抑制作用【1 5-1 6 J。本研究显示，S o 组大鼠小肠黏膜上皮细胞也有凋亡存在，与之对应的是b c l 一2 和c a s p a s e 3 表达较微弱；而b a x 相对表达较强，提示在一定的生理条件下，小肠黏膜上皮细胞凋亡的发生有利于清除体内无用、老化和损伤的细胞，对于促进小肠黏膜上皮细胞的更新和维持机体内环境的稳定具有重要作用。S A P 时大鼠小肠黏膜上皮细胞凋亡明显增加，并且凋亡指数与肠损伤病理评分呈正相关(r=0 5 6，P 0 0 5)。与之相对应b a x 和c a s p a s e 3m R N A的表达也明显增强，与小肠黏膜上皮细胞凋亡指数和病理评分的变化基本相一致，b c l 2m R N A 表达在各时间段间差异虽然没有统计学意义，但较S O 组却有所增强。这说明机体可能存在某种调节机制，当某种因素致使肠黏膜上皮细胞过度凋亡时，机体通过这种自身的调节作用使凋亡抑制基因表达有所增强而抑制过度凋亡。经I G F-I 治疗后，大鼠小肠黏膜上皮细胞凋亡率明显下降，小肠组织结构也显著改善，b a xm R N A 和c a s p a s e 一3m R N A 的表达也明显减弱，而b c l 2m R N A 的表达则明显增强。提示b a x、b e l 2 和c a s p a s e 3 确实均参与了S A P 时小肠黏膜上皮细胞的凋亡，外源性I G F-工对S A P 时小肠黏膜上皮细胞凋亡的抑制作用至少部分是与其对它们的调节相关的，即通过促进凋亡抑制基因b c l 2 的表达，同时抑制促凋亡基因b a x 和c a s p a s e 一3 的表达，从而抑制S A P 时肠黏膜上皮细胞的过度凋亡，可能对S A P 所致的肠黏膜屏障损害起一定保护作用。参考文献【1 王兴鹏，王冰娴，吴恺，等细胞凋亡在急性坏死型胰腺炎早期肠黏膜上皮细胞死亡中的作用 J 中华消化杂志，2 0 0 1，2 1(5)，2 6 7 2 7 0 2 x uG F，h Iz，G o oJ，e ta 1 E f f e c t0 fe c o i n m a m o n u t r i t i n ns l l p p o r t ao nm a i n t e n a n c eo fi n t e g r i t yo fi n t e s t i n a lm u c e s a lb m i ri n8 F”e I ea c u t ep a n-c r e a t i t i s i nd o 学 J J C h i n M e dJ，2 0 0 6 1 1 9(8)：6 5 6-6 6 1 3 A 髓i 扛衄k o p c t l l 倔S F，A l e x a a d r i sI H，s c o p aC D，e ta 1 E f f e c to f b o 曲e s i na n dn e u r o t e m i n 锄g u tb a r r i e rf u n c t i o ni np a r t i a l l yh e p a t e a o m i r e dr a t s J w 甜dJG a s t r o e n t e r o l，2 0 0 5，1 l(4 3)：6 7 5 7-6 7 6 4 4 B a 刎N，s o n gJ，J e s c h k eM G，e Ia 1 I G F-1p r o t e c t si n t e s t i n a le p-i t h e l i a lc e l l sf r o mo x i d a t i v em e s s-i n d u c e da p o p t o g i g【J Js I I r gR e*，2 0 0 6 1 3 6(1)：3 1 3 7【5 O z e nS，A k i s uM，B a k aM，e ta 1 I n s u l i n l i k e 掣U w I I If a c t o ra t t e n u a t 魄a p o p t e s i sa n dr c e s a ld a m a g ei nh y p o m r e o x y g e n a t i o n-i n d u c e di n t e a t i-h a li n j u r y J B i dN e o n a t e，2 0 0 5，8 7(2)：9 1-9 6【6 JS h e e n C h e nS M，H oF I T，C h i aP L，e la 1 T h ee f f e c t0 fi n a n l i n-l i k eg r o w t hf a e t o r-I0 1 1h e p a t o c y t ea p o p t i sa f t e rb i l ed u c tl i g a i o ni nI 皿 J D i gD i sS c i，2 0 0 6，5 1(1 2)：2 2 2 0-2 2 2 4 7 C h r y s i sD，C a l i k o g hA S。Y eP，e la 1 I n s u l i n-l i k eg r o w t hf l l L 舾r-Io v e-e x p r e s s i o na t t e n u a l e ge e r e b e l h ra p o p t e s i sb ya l t e r i n gt h ee g p r e g g i n l ldb e lf a m i l yp r o t e i n si nad e v e l o p m e n t a l l ys p e c i f i cm a n n e r J T h eJ o u r n a l0 fN e u r e s e i e n c e。2 0 0 l，2 l(5)：1 4 8 1 1 4 8 9 8 顾坚，李堰松，王大斌胰岛素样生长因子1 在病毒性心肌炎小鼠中的变化及对心肌的保护作用 J 实用儿科临床杂志，2 0 0 7，2 2(1)：3 5-3 6 9 O a i uc J，M e a r d hA l l，B r o w n