水温骤降后凡纳滨对虾血清中NO、NOS水平及对副溶血弧菌的敏感性[1].pdf

第 2 1 卷第 1 期 2 0 0 6年 3月 大 连 水产 学院学 报 J OUR NAL OF DAL I AN F I S HE RI ES UN I VER S I TY V 0 1 2 1 N o 1 M 20O6 文章编号：1 0 0 0 9 9 5 7(2 0 0 6)O 1-O O 4 6 0 5 水温骤降后凡纳滨对虾血清 中 N O、N OS 水平及对副溶血弧菌的敏感性 朱 宏 友，王 广 军，余 德 光，谢 骏(1 中国水产科学研究院 珠江水产研究所，广州 5 1 0 3 8 0；2 _ k t g*产大学 生命科学与技术学院，上海 2 0 0 0 9 0)摘要：测定了水温骤降后(A组(2 5-,2 2 C)、B组(2 5 1 9 C)、c组(2 5 1 6 C)、对照组(2 5)6、2 4 h凡纳滨对虾 P e n a e u s v a n n a m e i 血清中一氧化氮(N O)的浓度、一氧化氮合成酶(I I i-t r i c o x i d e s y n t h a s e，N O S)的活性以及溶菌酶活力的变化，并在水温变化后 2 4 h 用副溶血弧菌 V i b r i o p a r a h a e m o l y t i c t t s 对对虾进行人工感染，以评价凡纳滨对虾对副溶血弧菌的敏感性。结果表明，水温骤 降后 6 h，各试验组对虾血清中N O浓度、N O S 活性、溶菌酶活力均与对照组差异不显著(P O 0 5)。水温骤降后 2 4 h，B组对虾血清中 N O浓度显著高于对照组(P 0 0 5)；B 组对虾血清中 N O S的活性显著高于对照组(P 0 0 5)，c组显著低于对照组(P 0 0 5)；各试验组对虾血清中的溶菌酶活力与对照组差异 不显著(P 0 0 5)；用副溶血弧菌人工感染对虾的死亡率 c组为 5 8 3 ，与对照组(3 3 3)存在 显著差异(P 0 0 5)；水温骤降后 2 4 h，B组对虾血清中的 N O浓度(1 6 6 6 7 4-2 0 8 3)Ix m o l L 显著高于对照组(1 3 1 9 4 0 6 0 1)x n o UL 和c组(1 2 8 4 7 1 2 0 3)i m o L L(P 0 0 5)。2 2 水温骤降后对虾血清中N O S 活性的变化 水温骤降后凡纳滨对虾血清中N O S 活性的变化见图2。水温骤降后6 h，各试验组 N O S 活性与对 照组的差异不显著(P 0 0 5)；水温骤降后 2 4 h，B组对虾血清中的 N O S活性(1 5 2 7 2 4-0 6 0 2)U m L 显著高于对照组(1 3 6 1 7 0 3 7 3)U m L(P 0 0 5)，C组(1 2 3 3 2 0 4 7 7)U m L 却显著低于对照组(P 0 0 5)，3 个试验组间的差异均显著(P O 0 5)；标有不同字母的表示组间差异显著(P O 0 5)，下同。图 1 水温骤降后对虾血清中N O浓度的变化 n l Th e ch a n g e i n NO l e v e l i n s h r i mp s e r u m a f-t e r d i ffe r e n t t i m e o f s u d d e n c h a n g e s i n t e m-p e r a t u r e 2 3 水温骤降后对虾血清中溶菌酶活力的变化 图2 水温骤降后对虾血清中N O S活性的变化 F i g 2 T h e cha n g e in NOS a c t i v i t y i n s h r i mp s e r u m a f t e r d i f f e r e n t t i me o f s u d d e n ch a n g es I n t e m-p e r a t u r e 水温骤降后凡纳滨对虾血清中溶菌酶活力的变化见图3。水温骤降后 6 h，各试验组溶菌酶活力 都高于对照组，但与对照组差异不显著；水温骤降后 2 4 h，A、B组对虾血清中的溶菌酶活力(0。0 9 4士 O 0 1 5、0 1 1 5 士 O。0 2 3)较对照组(0 0 8 8 O 0 0 8)高，c组(0 0 7 7 0 0 2 2)却低于对照 组，但各试验组与对照组的差异均不显著，而 B组与 C组之间存在显著差异(P=0。0 3 1 0。0 5)；突变幅度为9 时(c组)，其 死亡率平均为5 8 3，显著低于对照组(3 3 3)(P=0 0 2 8 0 0 5)。口A 组(2 5-2 2)口B 组(2 5 1 9 0)田C 组(2 5 1 6(2)日D 组(对照组2 5 C)6 表 1 水温骤降后凡纳滨对虾人工感染副溶血弧菌 的死亡率 T a b 1 Mo r t a l i ty r a t e of L i t o p e n a e u s v a n n a me i d u e t o V i b r i o p a r a h a e mo ty t i c u s i n f e c t i o n 8 f r e t 2 4 h o f s u d d e n chan g es i n temp e rat u r e 组别 g r o u p 死亡率 m o r t a l i t y r a t e A组(2 5 2 )2 4 B组(2 5 1 9)C组(2 5-*1 6)圈3 水温骤降后对虾血清中溶菌酶活力的变化 3 T h e l ll g e i n b a c t e r i o l y t i c a c t i vity in shr i mp s e r u m a f t e r d i ffe r e n t ti me o fs u d d e n ch a n g es in t e mp e rat u r e D组(对照组2 5)3 3 3 1 4 4 注：表示与对照组相比差异显著(P O 0 5)。也 呻 O O O O O O R烘避粗缝 维普资讯 http:/ 第1 期 朱宏友，等：水温骤降后凡纳滨对虾血清中N O、N O S 水平及对副溶血弧菌的敏感性4 9 3 讨论 溶菌酶是对虾非特异性的体液免疫因子之一，它是一种碱性蛋白，能够溶解细菌细胞壁中的肽聚 糖成分，从而杀灭细菌。王文博等 在研究拥挤胁迫对鲫血液中溶菌酶活力的影响时发现，急性胁 迫后鲫血液中的溶菌酶活力有所升高，而慢性胁迫后血液中的溶菌酶活力受到严重抑制。在本试验中 水温骤降对凡纳滨对虾血清中的溶菌酶活力虽没有显著影响，但变化规律与王文博 的研究结果相 似。生物体内N O是由N O S 催化 L 一 精氨酸产生的。在免疫系统进化过程中，利用 N O作为杀伤因子 的杀菌机制代表了一种古老的自然免疫反应。，它对细菌、病毒和寄生虫等具有抑制和杀灭作 用 叫 。V il l a m il 等 用 N O作为免疫指标评价了乳酸菌 L c t is 对大菱鲆 S c o p h t h a l m u s m a x i m u s 的非 特异性免疫功能的影响，结果表明：乳酸菌能诱导大菱鲆头肾巨噬细胞产生 N O，而且用乳酸菌拌饵 投喂大菱鲆后，大菱鲆血清中的 N O浓度也有显著增加，从而可增强机体的免疫力。O t t a v ia n i 等 用 大肠杆菌感染田螺 a t e r 时发现，大肠杆菌能诱导田螺血细胞 N O S的表达，并产生大量的N O，而且 N O有利于细菌聚集在血细胞的周围并杀之。此外，一些多糖类物质也能诱导 N O S的表达，并产生 N O。如脂多糖能诱导虹鳟 O n c o r h y n c h u s m y k is s 头肾巨噬细胞产生 N O，昆布多糖 L a m i n a r i n 能诱导贻贝 M y t i l u s g a l lo p r o v i n c i a li s 血细胞产生 N O等 H J。生物体内N O浓度的高低能反映生物有机体的健康状 况。生物有机体在受到环境胁迫后常能引发应激反应，这是机体的一种保护机制，但生物若持续处于 应激状态或应激强度加大时，机体的免疫功能则会受到抑制，因而导致生物对各种病原的敏感性升 高。本试验中，水温下降的幅度较低时，对虾血清中的N O浓度、N O S 涪陛和溶菌酶活力都有所上 升，这是机体在受到水温变化的刺激后而产生的一种保护性反应，以此维持机体的自身平衡来克服胁 迫；而水温变化幅度过大(降低 9 )时，凡纳滨对虾血清中的N O S 活性显著下降，同时对副溶血 弧菌的敏感性也升高，本试验结果支持了M o c k 引、L e m o u l l a c L 6 J 和Y i n 刨 等认为慢性胁迫会导致鱼体 免疫功能下降的观点。L e m o u l l a c 等在研究水温变化与对虾血淋巴中血细胞数量的关系时发现，在 2 4 h内水温由2 7 降至 1 8 时，红额角对虾 P e n a e u s s ty l ir a s t r i s 的血细胞数量下降 4 0。姜国建等 曾报道，白 斑综合症病毒对中国明对虾 F e n n e r o p e n a e u s c h i n e s is 血细胞造成破坏后，对虾血细胞中N O S 活性会显著下降。本试验中，水温大幅度的下降可能导致凡纳滨对虾血淋巴中血细胞数量减少，使得 对虾血清中N O S 活性、溶菌酶活力下降，同时对副溶血弧菌的敏感性升高。因此，在对虾养殖中应 尽量避免因水温发生大幅度变化而导致对虾发生应激反应，从而减少疾病的发生。参考文献：1 王文博。李爱华 环境胁迫对鱼类免疫系统影响的研究概况 J 水产学报。2 0 0 2。2 6(4)：3 6 8 3 7 4 2 T A F A L L A C，F I G U E R A S A，N O V O A B R o l e o f n i t r ic o x i d e o n t h e r e p l i c a t i o n o f v i r a l h a e m o r t h a g i c s e p t i c e m i a v i re s(V H S V)。a fi s h r h a b d o v i r u s J V e t e ri n a r y I m m u n o l o g y a n d I m m u n o p a t h o l o g y，1 9 9 9，7 2：2 4 9 2 5 6 3 C A R S T E N G K，M I C H A E L A A，C H R I S T I N E L，e t a1 R e d u c e d e x p r e s s i o n o f t h e i n d u c i b l e n i t r i c d e s y n t h a s e a ft e r i n f e c t i o n w i t h T o x o p la s m 口g o n d i i f a c i l i t a t e s p a r a s i t e r e p l i c a t i o n i n a c t i v a t e d m u r l n e m a c r o p h a g c s J I n t e r n a ti o n a l J o u rnal f o r P a r a s i t d o g y，2 0 0 3，3 3：8 3 3 8 4 4 4 C H A K R A V O R T r Y D，H E N S E L M I n d u c i b le n i t r i c o xi d e s y n t h a s e a n d c o n t r o l o f i n t r a c l l u l a r b a c t e ri a l p a t h o g e n s J _ M ic ro b e s andI nf ec t i o n，2 0 0 3。5：6 216 2 7 5 姜国建，于仁诚，王云峰，等 中国明对虾(F e n a e r o t mm e u s c h i n e s ls)血细胞中一氧化氮合成酶的鉴定及其在白斑综合症病毒感染过 程中的变化 j 海洋与湖沼，2 0 0 4，3 5(4)：3 4 2-3 5 0 6 L E M O U IA AC G。S A U L N I E R D，A N S Q U E R D，e t a1 E ff e c t o f h y p o x i c s t re s s o n t h e i m m u n e r e s p o n s e a n d t h e re s i s t a n c e t o V b r o s s o f th e s h r i m p P e n a e u s s t fl i r a s t r is j F i s hS h e l l f i s h I m m u n o l，1 9 9 8。8：6 2 1 6 2 9 7 L E M O U L L A C G，H A F F N E R P E n vi r o n m e n t f a c t o r s a ff ec ti n g i m m u n e r e s pon se i n C r u s t a c e a J _ A q u a c u l t u r e，2 0 0 0，1 9 1：1 2 1 1 3 1 8 王文博，汪建国，李爱华，等拥挤胁迫后鲫鱼血液皮质醇和溶菌酶酶水平的变化及对病原的敏感性 J 中国水产科学，2 0 0 4，1 1 (5)：4 0 8-4 1 2 9 王文博，李爱华。汪建国，等 拥挤胁迫对草鱼非特异性免疫功能的影响 j 水产学报，2 0 0 4。2 8(2)：1 3 9 1 4 4 维普资讯 http:/ 5 0 大连水产学院学报 第2 l 卷 f 1 0 F RA NC HI N I A，F O NT A N I P，O T r A V I A N I E I n v e r t e b r a t e i mm u n o c y t es：r e l a t i o n s h i p b e t w e e n p h a g o c y t o s i s a n d n i tr i c o x i d e p r o d u c ti o n J C o m p B i o c h e m P h y s i o l，1 9 9 5，1 l O(2)：4 0 3 4 0 7 1 1 V I L L A M I L L，T A F A L L A C，F I G U E R A S A，e t a1 E v a lu a t i o n o f i m m u n o m o d u h t o r y e ff e c t s o f l a c ti c a c i d b a c t e r i a i n t m b o t(&o p h t h a l m u m a x i m u s)J C l i n D i a g L a b I m m u n o l，2 0 0 2，9(6)：1 3 1 8 1 3 2 3 f 1 2 O T r A V I A N I E H a mo c y t c s o f t h e f r e s h w a t e r s n a i l 陷枷 a t e r(G a s t r o p o d a，p m b r a n c M a)J J M o l l S t u d，1 9 8 9，5 5：3 7 9 3 8 2 1 3 L A I N G K J，H A R D L J，A A R T S E NW，e t 8 1 E x p r e s s i o n o f 帅 i n d u c ib l e n it r i c o x i d e s y n t h es e g e n e i n r a i n b o wt r o u t O a e o r h y r u s 啪 J D e v e l o p a n d C o m p I m m u n o l，1 9 9 9，2 3：7 1 8 5 1 4 A R U M U G A M M，R O M E S T A N D B。T O R R E I L L E S J，c t ai I n v i t r o p r o d u c t i o n of s u p e r o xi d e a n d n i t r i c o x i d e(8 8 n i t r it e and n i tr a t e)b y M U u s g a l lo p r o d a d d i s h a e m o c y t e s u p o n i n c u b a t i o n w i t hP M A o r l a m i n a r in o r d u ri n g y e a s t p h a g o c y t o s i s J E u r J C e l l B i o l，2 0 0 0，7 9(7)：51 351 9 1 5 M O C K A，P E T E R S G L y s o n e a c t i v i t y i n r a i n b o w t r o u t，O n c o r h y n c h u s m y k i s s(Wal b a u m)，s t r e s s e d b y h a n d i n g，t r a n s p o rt and w a t e r p o l l u t i o n J J F i s h B o i l，1 9 9 0，3 7：8 7 3 8 8 5 1 6 Y I N z，L A M T J。S I NYM T h e effe c t s of c r o w d i n g s t r es s o nt h e n o n s p e c i fi c i m m u n e r e p o n s ei n f a n c y c a r p(r n u s c a r p o L)J F i s h S h e l l fi s h I mmu n o l o g y。1 9 9 5，5：51 95 2 9 Ch a n g e s i n n i t r i c o x i d e l e v e l a n d n i t r i c o x i d e s y n t ha s e a n d s e n s i t i v i t y t o V i b r i o p a r a h a e mo l y t i c u s i n s e r u m o f wh i t e l e g s h r i mp e x p o s e d t o s u dd e n c h a n g e s i n wa t e r t e mp e r a t ur e Z H U H o n g y o u _，WA N G G u a n g-j u n ，Y U D e g u a n g ，X I E J u n (1 P e a r l R i v e r F i s h e r i e s R e s e a r c h I n s t i t u t e，C h i n e s e A c a d e my of F i s h e r y S c i e n c e s，G u a n g z h o u 5 1 0 3 8 0，C h i n a；2 C o l l e g e o f L i f e Sci e n c e a n d T e c h n o l o s y，S h a n g h ai F i s h e r i e s U n iv e r s i t y，S h a n ghai 2 0 0 0 9 0。C h i n a)A b s t r a c t：C h a n g e s i n n i t r i c o x i d e(N O)c o n c e n a fi o n，n i t ri c o x i d e s y n t h a s e(N O S)a c ti v i t y a n d l y s o z y m e a c-t i v i t y i n s e r u m an d mo r t a l i t y d u e t o i n f e c t i o n o f V b r o p a r a h a e mo l y t i c u s we r e d e t e r mi n e d i n wh i t e l e g s h ri mp L t o p e n a e u s v a n a a m e i e x p o s e d t o s u d d e n c h ang e s i n w a t e r t e m p e r a t u r e f r o m 2 5 t o 2 2 (G r o u p A)，2 5 t o l 9 (G r o u p B)，2 5 C t o 1 6 C(G r o u p C)and e x p o s e d t o c o n s t a n t w a t e r t e m p e r a t u r e 2 5 C(C o n t r o l G r o u p)T h e res u l t s s h o w e d t h a t n i t r i c o xi d e c o n c e n t r a t i o n，n i t r i c o x i d e s y n t h a s e a c t i v i ty and b a c t e r i o l y ti c a c ti v i ty i n s h r i mp s r t l m w e re n o t s i g n i fi c ant l y d i f f e r e n t f r o m tha t o f the c o n t r o l g r o u p 6 h o u r s a f t e r s u d d e n c h an-g e s 2 4 h o u rs a f t e r s u d d e n c h ang e s，h o w e v e r，the r e we r e s i gn i fi c an tl y h i g h e r NO S a c ti v i ty an d NO c o n c e n t r a t i o n i n Gr o u p B than tha t i n C o n t r o l G r o u p B u t NOS a c ti v i ty i n Gr o u p C d e c rea s e d s i g n i fi c an tl y A n d b a c t e r i o l y ti c a c t i v i ty i n the s h ri mp s e r u m wa s n o t s i gn i fi c a n t l y d i f f e r e n t f r o m t h a t i n C o n t r o l G r o u p 2 4 h o u rs a f t e r s u d d e n c h a n g e s A t s a m e ti m e，m o r t a l i ty(5 8 3)d u e t o V b r o p a r a h a e m o ly t i c u s i n f e c ti o n i n G r o u p C w a s s i g-n i fi c antl y h i ghe r th an th a t i n C o n t r o l G r o u p(3 3 3)T h e s e r e s u l ts s h o w e d th a t n itr i c o x i d e s y n th a se a c t iv i t y，an d b a c t e r i o l y t i c a c d v i t y red u c e d i n the ser u m f r o m the s h ri mp e x p o s e d t o s u d d e n w a t e r t e mp e r a t u re c h an g e，i n d i c a ti n g tha t the s h ri mp h a d l o w res i s t a n c e t o d i s e a s e s Ke y wo r d s：L i t o p e n a e u s v a n n a me i；t e mp e r a ture c h an g e；n i t r i c o xid e；n i t r i c o xid e s y n t h a s e 维普资讯 http:/