血清总胆汁酸循环酶法测定法.doc

血清总胆汁酸循环酶法测定法1. 实验原理胆汁酸会被3a-羟甾醇脱氢（3a-HSD）以及b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。此外生成的3-酮类固醇在3a-羟甾醇脱氢（3a-HSD）及b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。2. 标本：2.1 病人准备：标本以空腹血清为宜，餐后胆汁酸会升高，应注意采血时间。2.2类型：血清、肝素或EDTA处理的血浆。应使用新鲜标本。标本必须避光保存。3. 标本存放 4保存可稳定7天，-20保存可稳定3个月。4. 标本运输 常温条件下避光保存运输。5. 标本拒收标准 细菌污染的标本。6. 实验材料6.1 试剂 南京波因特总胆汁酸测定试剂盒（试剂1：260ml 试剂2：220ml）6.1.1 试剂组成试剂1（R1）：-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD) 2mmol/LTris缓冲液 30mmol/L试剂2（R2）：脲嘌呤二核苷酸氧化型(NAD) 2mmol/L3a-羟甾醇脱氢酶(3a-HSD) 5U/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻，试剂2必须避光保存。6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5 注意事项：不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用南京波因特公司提供的TBA校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤:8.1 项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。11. 计算方法：以南京波因特公司提供的TBA校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mol/L报告。12. 参考值范围2,3：成年人： 10mol/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义 14. 操作性能14.1 线性范围：1.0690mol/L。14.2 精密度：批内精密度n=20(mol/L)s(mol/L)CV(%)天间精密度n=20(mol/L)s(mol/L)CV(%)样品17.00.223.14样品17.20.324.44样品220.80.432.07样品222.40.622.77样品350.40.881.75样品352.41.011.9314.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对79个样品进行TBA检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.999x+0.19mol/L；r=0.999。14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.06mol/L。14.5 病人结果可报告范围：1.0690mol/L。15. 超出范围结果处理 本法的检测范围为1.0690mol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。16. 病危报警值的处理 17. 方法局限性17.1本法的检测范围为1.0690mol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+1稀释，重新测定，结果乘以2。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度100mg/L，胆红素50mg/L，血红蛋白5g/L，乳糜度3000度时没有观察到干扰。18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献1.Jung K,Bohm M. Enzyme,23:201(1978)2.Hafkenscheid J C M, Dijit C C M. Clin Chem,25(1):55(1979) 3. Tietz N W. Fundamentals of clinical chemistry, W. B. Saunders Co.,p674(1982)4. Tsunoda T, Eto T, Furukawa M, Nakata T, Kusano T,Lin Y, Tashiro K, Watabe S, Tsuchiya R. Clear and colorless fluid observed during percutaneous transhepatic gallbladder drainage. Gastroenterol Jpn 1990; 25: 619-24.5. Keller, h.: klinisch-chemische labordiagnostik fur die praxis, 2nd edition, georg thieme verlag, stuttgart, 1991: 246.6. Scientific Tables Geigy, partial volume body fluids. Basel: Ciba-Geigy 1977; 8: 136-43.7. Kruis W, Paumgartner G. Bile acid depletion syndrome. Dt Arztebl 1982; 79: 33-620. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。