新药申报资料4.docx

中药注册分类6 第一部分：综述资料 编号4

泽泻白术胶囊申报资料

对主要研究结果的总结及评价

项目负责人：吴义权
资料整理者：石海霞
资料审读者：吴义权
联系人：李璐华
联系电话：[phone]
新药申报单位：安徽滴石制药股份有限公司

对主要研究结果的总结及评价
一、 处方规格及制备工艺
1. 处方：泽泻156.25g、白术62.5g
2. 规格：0.5g/粒
3. 制备工艺：①泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为1.2的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、干燥即可。③将①②与适量淀粉混匀、干燥、充填胶囊,过塑、包装即可
4. 生产工艺
4.1．泽泻胶囊的工艺选择
泽泻胶囊由泽泻与白术组成,有清热解毒之功,对晕动症有良效。按标准规定项下的提取方法,两味药材的有效成分提取率太低,且操作麻烦,生产周期长,现采用新的提取方法,提取率大幅度增高,成本大幅度下降。本试验采用与质量标准项下相同的方法对泽泻中的有效成分泽泻醇B乙酸酯与白术中的有效成分苍术酮的测定。对提取工艺进行考察,为泽泻胶囊制备工艺的确定,提供实验依据。
4.1.1实验材料
泽泻与白术(购于和义堂中药饮片公司), 泽泻醇 B 乙酸酯与苍术酮(购于中国药品生物制品检定所),SSIPC2000高效液相色谱仪,泵:seriesⅢ型,检测器型号Mode1-500,所用溶剂均为分析纯,流动相配制用色谱纯,水为重蒸馏水色谱柱:C18ODS柱(250 mm、4.6 mm、5 mm)(天津市兰博实验仪器设备有限公司)。
4.1.2方法与结果
4.1.2.1　工艺设计
泽泻的有效成分为泽泻醇 B 乙酸酯,白术有效成份为苍术酮。根据二者的性质,采用乙醇回流法。将提取后的提取物皆干燥成粉末,再测其含量,计算其提取率。以二者的提取率(提取物中有效成份的量除以原药材中有效成份的量)为指标,以乙醇浓度,溶媒倍数、提取时间、提取次数为影响提取率的四个关键因素,每个因素取3个水平,用正交表L9(34)安排试验,见表1。
表1 泽泻、白术提取率的因素水平表

水平
A
B
C
D
乙醇浓度
提取次数
溶媒倍数
提取时间（h）
1
60%
1
8
1
2
3
70%
80%
2
3
10
12
1.5
2

4.2.　样品制备
分别取泽泻(泽泻醇B乙酸酯含量3.2%)与白术(苍术酮含量10.9%)各10 kg按表2的设计方案进行。
4.2.3　含量测定
4.2.3.1　泽泻提取物中泽泻醇B乙酸酯的含量测定　
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙晴-0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相,检测波长为327 nm,理论板数按泽泻醇B乙酸酯峰计算应不低于1 000。对照品溶液制备:精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量,置棕色瓶中,加50%乙醇制成1 ml含40μg的溶液,即得(10℃以下保存)。
供试品溶液制备:取泽泻干粉0.2 g,精密称定,精密加入50%甲醇100 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量、摇匀、滤过,精密量取续滤液5 ml置25 ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即可。
测定法:吸取供试品与对照品各10μl,注入液相色谱仪,即可。
4.2.3.2　白术提取物中苍术酮的含量测定　
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相;检测波长为280 nm。理论板数按苍术酮峰计算应不低于2 500。
对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压干燥4 h的苍术酮对照品适量,加甲醇制成每1 ml含60μg的溶液。
供试品溶液的制备:取本品粉末约0.1 g,精密称定,加70%乙醇50 ml,加热回流3 h,放冷,滤过,滤液置100 ml量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取1 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
4.2.4　结果判定
表2 泽泻、白术样品制备设计表
组号
A
B
C
D
泽泻醇B乙酸酯 苍术酮
提取率% 提取率 %
浓度
次数
倍数
时间
1
1(60%)
1
8
1
30.3 40.8
72.4 87.1
84.2 94.4
51.5 35.2
91.6 74.3
92.2 85.2
47.8 29.2
78.1 56.4
88.6 63.6
2
1
2
10
1.5
3
1
3
12
2
4
2(70%)
1
2
3
5
2
2
3
1
6
2
3
1
2
7
3(80%)
1
3
2
8
3
2
1
3
9
3
3
2
1
泽泻醇
K1
187
130
200
210
212
213
B乙酸
K2
235
242
212
乙酯
K3
214
265
223
R
48.4
135
23
3.3

苍
K1
222
105
182
178
201
186
术
K2
194
217
185.9
酮
K3
149
243
197
R
73.1
138
15.5
22.8

表3 泽泻、白术提取新工艺与标准工艺比较

名称
浸膏得率
浸膏含量
提取率（%）
新工艺
泽泻
21.6
13.9
94.2（泽泻醇B）

白术
44.3
23.3
94.7（苍术酮）
泽泻
13.8
13.6
58.6（泽泻醇B）
标准工艺
白术
16.5
34.1
51.6（苍术酮）

由表2 R值可知,在先定的因素条件下,在泽泻的工艺中以泽泻醇B乙酸酯的提取率为考察指标,因素B>A>C>D,以次数为影响提取效果的最显著因素,乙醇浓度次之。提取时间最小,结合K值分析,最佳工艺为:70%乙醇提取3次,加12倍量提取2 h。为节省成本,采用70%的乙醇提取3次,加12倍量,提取1 h。在白术的工艺中,以苍术酮的提取率为考察指标,因素B>A>D>C,提取次数为影响提取效果的最显著因素。乙醇的浓度次之,加溶剂的倍数影响最小,结合K值分析,最佳工艺为60%乙醇提取3次,加溶剂12倍,提取1.5 h,为节省成本,采用60%乙醇,提取3次,加溶剂8倍,提取1.5 h。
4.2.5　对比试验
将上述筛选的最佳工艺条件与原标准项下工艺比较。(药材同上批) 　经以上比较知该工艺明显优于原标准项下工艺,因此新工艺切实可靠、经济、省时,成本大幅度降低,可作为金银花和黄芩的提取工艺。
4.3　泽泻胶囊的生产工艺
泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为1.2的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、干燥即可。③将①②与适量淀粉混匀、干燥、充填胶囊,过塑、包装即可。

4.4中试一般研究资料
4.4.1泽泻胶囊中试
按上述确定的制备工艺技术路线进行三批泽泻胶囊中试，并对三批中试样品进行质
量检查，以考察工艺技术路线的稳定性和合理性，结果见表1-1。

表1-1 三批泽泻胶囊中式数据
批号 配方量（万粒） 药材量（kg） 浸膏量（万粒） 成品数（万粒） 成品率（%）

111201 1 45.625 1.248 0.98 98
111202 1 45.625 1.248 0.975 97.5
111203 1 45.625 1.248 0.975 97.5

4.4.1.1崩解时限
取泽泻胶囊6粒，照《中国药典》2010年版一部(附录ⅫA)检查，分别置于崩解仪吊篮的玻璃管中，开动崩解仪，使吊篮浸入1000mL烧杯中，烧杯中盛有37±1℃的水，观察崩解情况，并记录时间。结果见表1-2。三批泽泻胶囊均在30分钟内完全崩解。
表1-2 泽泻胶囊崩解时限检查结果

批号 1 2 3 4 5 6 平均（min）
111201 10 10 10 10 9.7 10 9.95
111202 10 10 9.7 9.9 10 11 10.05
111203 10 10 10 10 10 10 10

4.4.1.2装量差异
取三批泽泻胶囊各20粒，照《中国药典》2010年版一部(附录I L)检查重量差异，结果见表1—3，三批样品均未超出10％的重量差异限度。

表1-3 三批供试品重量差异检查结果：装量（g）
供试品批号 111201 111202 111203

1 0.5107 0.5026 0.5078
2 0.5050 0.5105 0.5055
3 0.5104 0.5084 0.5195
4 0.5107 0.5146 0.5070
5 0.5089 0.5974 0.5099
6 0.5100 0.5147 0.5106
7 0.5016 0.5097 0.5109
8 0.5052 0.5196 0.5995
9 0.5082 0.5117 0.5179
10 0.5109 0.5095 0.5051
11 0.5051 0.5095 0.5178
12 0.5075 0.5194 0.5095
13 0.5115 0.5095 0.5114
14 0.5077 0.5142 0.5055
15 0.5095 0.5028 0.5015
16 0.5091 0.5144 0.5152
17 0.5090 0.5107 0.5097
18 0.5115 0.5176 0.5055
19 0.5095 0.5025 0.5175
20 0.5048 0.5028 0.5025
平均装量 0.5078 0.5151 0.5142

4.4.2色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：德国Nucleosil-C J，(4．6nmxl50mm,5 p m)；甲醇一O．5％醋酸(10：90)为流动相；检测波长为312nm。理论板数按原峰计算应不低于1800。
4.4.2.1精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成每lml含10 u g的溶液，即得。
4.4.2.2供试品溶液的制备
取装量差异项下本品，混匀，取适量，研细，取约0．29，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率： 160W，频率： 50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用0．45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
4.4.2.3测定方法
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1、20 u1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每粒含泽泻中泽泻醇B乙酸酯计，不得少于0．9mg。
三批泽泻胶囊含量测定结果见表2-4。

表2-4 泽泻胶囊中泽泻醇B乙酸酯含量测定
批号 111201 111202 111203

含量 0.93mg/粒 0.91mg/粒 0.91mg/粒

4.4.3结果
结果表明三批中试样品崩解度检查均在30分钟内全部崩解，装量检查未超出10％的重量差异限度，泽泻醇B乙酸酯含量分别为0．93mg／粒、0．91mg／粒和0．9mg／粒，说明工艺技术路线稳定、合理。

二、 质量标准研究
泽泻胶囊
ZeXie jiaonang
【处方】 泽泻 白术
【制作】泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为1.2的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、干燥即可。③将①②与适量淀粉混匀、干燥、充填胶囊,过塑、包装即可。
【性状】本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。
【鉴别】(1)取本品2粒，研细，加石油醚30ml，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，滤过，残渣再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材10g，按照供试品溶液制备方法制备，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl,、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本品2粒，用70%乙醇溶解，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。另取白术对照药材20g，加石油醚3Oml，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟(温度30℃，功率 80HZ)，滤过，残渣，再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。取苍术酮标准品0.5mg，甲醇定容至10ml，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯一醋酸乙酷一异丙醇一甲醇一浓氨试液(5:3二1.5:1.5:0.5)为展开剂，另槽加入等体积的浓氨试液，预平衡数分钟后，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】水分 不得过9.0%（附录IX H）。
其他 应符合胶囊剂项下有关的各项规定（附录I L）。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录VI D）测定。
色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：德国Nucleosil-C J，(4．6nmxl50mm,5 p m)；甲醇一O．5％醋酸(10：90)为流动相；检测波长为312nm。理论板数按原峰计算应不低于1800。
对照品溶液的制备 精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成每lml含10 u g的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下本品，混匀，取适量，研细，取约0．29，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率： 160W，频率： 50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用0．45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
测定方法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1、20 u1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每粒含泽泻中泽泻醇B乙酸酯计，不得少于0．9mg。
【功能与主治】晕动症
【用法与用量】一次4粒，一日2次，饭后服用。
【注意】
1、 忌生冷、辛辣食物。
2、 小儿应在医师指导下使用。
3、 药品性状发生改变时禁止服用。
4、 不宜长期服用。
5、 如正服用其他药物，使用本品请咨询医师或药师。
【规格】0.5g/粒
【贮藏】密封，置阴凉干燥处。
【有效期】18个月

2.泽泻胶囊药品质量标准

2.1 名称与汉语拼音

本品由泽泻汤制成胶囊剂，采用方中药味及原名称加剂型的命名方法，将本品命名为泽泻胶囊。汉语拼音为Zexie Jiaonang

2.2 处方

泽泻 156.25g 白术62.5g

2.3制法

泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1 h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为1.2的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5 h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、干燥即可。③将①②与适量淀粉混匀、干燥、充填胶囊,过塑、包装即可。

2.4性状

本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。

2.5 鉴别
2.5.1胶囊中泽泻的鉴别
取本品粉末2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液加于氧化铝柱(200～300目，5g，内径为1cm，干法装柱)上，用乙酸乙酯10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取23一乙酰泽泻醇B对照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照《薄层色谱法检验标准操作程序》(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯(1：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硅钨酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.5.2胶囊中白术的鉴别
取本品粉末0.5g，加正己烷2ml，超声处理15分钟，过，取滤液作为供试品溶液。另取白术对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照《薄层色谱法检验标准操作程序》(附录ⅥB)试验，吸取上述新制备的两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)乙酸乙酯(50：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点(苍术酮)。

2.6检查

2.6.1 装量差异
取三批泽泻胶囊各20粒，照《中国药典》2010年版一部(附录I L)检查重量差异，结果见表2—3，三批样品均未超出10％的重量差异限度。

表2-3 三批供试品重量差异检查结果：装量（g）
供试品批号 111201 111202 111203

1 0.5107 0.5026 0.5078
2 0.5050 0.5105 0.5055
3 0.5104 0.5084 0.5195
4 0.5107 0.5146 0.5070
5 0.5089 0.5974 0.5099
6 0.5100 0.5147 0.5106
7 0.5016 0.5097 0.5109
8 0.5052 0.5196 0.5995
9 0.5082 0.5117 0.5179
10 0.5109 0.5095 0.5051
11 0.5051 0.5095 0.5178
12 0.5075 0.5194 0.5095
13 0.5115 0.5095 0.5114
14 0.5077 0.5142 0.5055
15 0.5095 0.5028 0.5015
16 0.5091 0.5144 0.5152
17 0.5090 0.5107 0.5097
18 0.5115 0.5176 0.5055
19 0.5095 0.5025 0.5175
20 0.5048 0.5028 0.5025
平均装量 0.5078 0.5151 0.5142

结果表明：本品符合《中国药典》2010年版一部胶囊剂项下的装量差异应在士10%的规定。

2.6.2 水分
取本品，按(((中国药典》2005年版一部附录IXH)水分测定法中(甲苯法)测定三批样品的水分，结果见表2一4.
表2-4 泽泻胶囊水分检查结果
批号
111201
111202
111203
水分（%）
4.2
4.3
4.4
检查结果符合《中国药典》2010年版一部（附录I L）标准不得过9.0%。
2.6.3崩解时限
取三批肠泰胶囊每批六粒，照《中国药典》2005版一部(附录郑A崩解时限检查法)进行试验，均在30分钟内完全崩解。结果见表2-5。
表2-5 泽泻胶囊崩解时限检查结果（min）
批号
1
2
3
4
5
6
平均
111201
10
10
10
10
9.7
10
9.95
111202
10
9.7
9.7
9.7
10
11
10.05
111203
10
10
10
10
10
10
10
结果表明：本品崩解时限符合《中国药典》2010年版一部（附录XII A）胶囊剂项下30分钟全部崩解的规定。
2.6.4 重金属检查
按（《中国药典》2010年版第一部附录IXE）重金属检查法中第二法试验。
4.2.6.4.1标准铅溶液的制备
称取硝酸铅0.1609，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每lml相当于 10ug的Pb)。
4.2.6.4.2检查方法
取三批供试品各1g，研细，置于柑锅缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5一1.Oml，使其湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500一600℃炽灼使完全灰化，放冷。上述灰化物加盐酸2ml，置水浴上蒸干，再加水15ml，滴加氨试液(至对酚酞指示液显中性)，再加入醋酸盐缓冲液2ml，微热使溶解，移至甲比色管中，加水至25ml;另取配制供试液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加入醋酸盐缓冲注液2ml与水 15ml，加热使溶解，移至乙比色管中，加标准铅溶液lml，再加水稀释至25ml。甲、乙二管分别加入硫代乙酸胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，甲管明显浅于乙管(供试品管颜色明显浅于对照管)，表明本品重金属含量小于百万分之十，结果见表2-6。
表2-6 泽泻胶囊重金属检查结果
批号
重金属检查结果
111201
小于万分之一
111202
小于万分之一
111203
小于万分之一
由此结果可见，本品重金属含量均低于药典不超过百万分之十的规定。
2.6.5 砷盐检查
取本品三批，分别称取1.0g，加等量无砷氢氧化钙，加水少量调匀，使成糊状，干燥后先用小火加热使炭化，再于500一600℃灼烧至完全灰化，取出，放冷，加蒸馏水5ml，然后小心转移至测砷斑用标准磨口锥形瓶内，用蒸馏水冲洗增祸三次，每次6ml，洗液并入锥形瓶中，再加盐酸5ml，照(《中国药典》2010年版一部附录IX F)砷盐检查法第一法，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作，将生成的砷斑与标准砷班比较，颜色均浅于 2ug的标准砷斑。结果见表2-7.
表2-7 泽泻胶囊砷盐检查结果
批号
111201
111202
111203
检查结果
小于百万分之二
小于百万分之二
小于百万分之二
由此结果可见，三批样品砷盐限度检查结果均小于百万分之二，未列入质量标准正文。
2.6.6 微生物限度
取肠泰胶囊(111201、111202、111203)，按照((中国药典》2010年版一部(附录XIII C)微生物限度检查法测定。结果三批泽泻胶囊细菌数、霉菌、酵母菌数及大肠杆菌检查结果均符合规定。结果见表2-8.
表2-8 泽泻胶囊微生物限度检查结果
微生物限度标准
111201
111202
111203
细菌数不得过1000个/g

细菌数：100个/g
细菌数：100个/g
细菌数：100个/g
霉菌数和酵母菌不得过100个/g

霉菌数和酵母菌： <10个/g
霉菌数和酵母菌： <10个/g
霉菌数和酵母菌： <10个/g
大肠埃希菌不得检出
大肠埃希菌：未检出
大肠埃希菌：未检出
大肠埃希菌：未检出
检查结果符合《中国药典》2010年版一部（附录XIII C）微生物限度检查标准。
2.6.7 含量测定

2.6.7.1泽泻醇 B 乙酸酯的含量测定
2.6.7.1.1材料
LC-10A 型高效液相色谱仪，岛津 SPD-10A 紫外检测器，AUTO SCIENCE AT-330 柱温箱，AGTC18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5μm); RE-52 型旋转蒸发仪(天津第一玻璃厂);试剂均为色谱纯，水为娃哈哈饮用纯净水。泽泻醇 B 乙酸酯对照品(中国药品生物制 品 检 定 所); 抗 眩 晕 颗 粒 ( 批 号 20090218，20090708) 。
2.6.7.1.2 方法与结果
2.6.7.1.2.1色谱条件 AGT C18色谱柱 (4. 6 mm × 250mm，5μm);流动相乙腈-水(85∶ 15);检测波长 208nm;流速 1. 0 mL·min－ 1;柱温 25℃ ;进样量 20 μL。
2.6.7.1.2.2 样品的制备
2.6.7.12. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取泽泻醇 B 乙酸酯对照品适量，加甲醇制成 70 g·－ 1的对照品溶液，见图 1。
2.6.7.1．2. 2. 2 供试品溶液的制备 取抗眩晕颗粒适量，研细，精密称取 1. 5 g 于圆底烧瓶中，加甲醇 20 mL 超声(功率 120 W，频率 40 kHz)1 h，过滤至 25 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，微孔滤膜滤过，即得供试品溶液，见图 1。
2.6.7.1.2. 2. 3 阴性样品溶液的制备 按处方取除泽泻的各味药材，煎煮，制成阴性样品颗粒，按 1.3.2. 2. 2 项下方法，制得阴性样品溶液，见图 1。

2.6.7.2. 3 标准曲线的制备 精密吸取一定量对照品溶液，用甲醇稀释并定容，得到 0. 28，0. 70，1. 40，2. 10，2. 80，3. 50 g·L－ 1的对照品溶液的系列溶液。将上述溶液按 2. 1 项下色谱条件进行测定，以泽泻醇 B乙酸酯峰面积值(Y) 对其相应浓度 (X) 做线性回归，得到泽泻醇 B 乙酸酯的回归方程:Y = 1. 62 × 104X + 1. 78 × 103，r = 0. 999 2，表明泽泻醇 B 乙酸酯在0. 28 ～ 3. 50 g·L－ 1线性关系良好。
2.6.7.2. 4 精密度试验 取同一浓度泽泻醇 B 乙酸酯对照品溶液(2. 80 g·L－ 1)，按 2. 1 项下色谱条件连续进样 5 次，测定峰面积值，其相对标准偏差 RSD 为1. 31% 。
2.6.7.2. 5 重复性试验 取同一批样品，精密称取 5 份，按 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进行测定，其相对标准偏差 RSD 为 1. 60% ，表明本法重复性良好。
2.6.7.2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h 按 1.3.2. 1 项下色谱条件进行测定，其相对标准偏差 RSD 为 1. 77% ，表明样品在 8 h 内稳定性良好。
2.6.7.2. 7 回收率试验 精密称取泽泻醇 B 乙酸酯对照品适量，加入已测泽泻醇 B 乙酸酯含量的抗眩晕提取液中，按1.3 2. 2. 2 项下方法制备供试品溶液，按 2.6.7.2. 1项下色谱条件进行测定，计算回收率，见表 1。

2.6.7.2. 8 样品测定 按上述方法，测定二批泽泻胶囊中泽泻醇 B 乙酸酯的含量分别为 28. 078，28. 068μg·g-1
2.6.7.2泽泻胶囊中苍术酮的含量测定
2.6.7.2．1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪(美国惠普公司);AEL204电子微量分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司); KQ-500B型旋转蒸发仪(上海申生有限公司)白术(批号: 06101401)购自北京绿野药业有限公司,经中国人民解放军第302医院中医药研究所肖小河研究员鉴定符合中国药典2005年版规定;苍术酮对照品(解放军第302医院中医药研究所自制,纯度>98%);甲醇(色谱纯);水为超纯水;其余试剂均为分析纯。
2.6.7.2．2方法与结果
2.6.7.2.2．1白术挥发油的提取
取一定量的白术粉末(40目),加10倍量的正己烷回流提取3次, 1 h·次-1,合并提取液,无水硫酸钠干燥除水,减压回收正己烷至无溶媒滴出,得挥发油。
2.6.7.2．2.2　色谱条件
色谱柱: Alltima HP C18色谱柱(250 mm×4·6 mm, 5μm),流动相:甲醇-水(95∶5);流速: 1·0 mL·min-1;检测波长为220 nm;柱温为室温;进样量10μL。理论塔板数以苍术酮峰计算>5 000,对称因子为1·05,与相邻杂质峰的分离度>2·0,色谱图见图1。

2.6.7.2．2.3　对照品溶液的制备
精密称取苍术酮对照品7·5 mg,置25 mL量瓶中,加无水甲醇定容,即得0·3 mg·mL-1的对照品溶液。
2.6.7.2．2.4　样品溶液的制备　
取白术挥发油0·1 g,精密称定,置50 mL量瓶中,加入无水甲醇,超声溶解,放冷,再加入无水甲醇稀释至刻度,摇匀,用0·45μm微孔滤膜滤过,即得。
2.6.7.2．2.5　线性关系的考察
精密吸取对照品溶液400、1 000、1 600、2 200、2 800、3 400μL分别置5 mL量瓶中,加无水甲醇稀释至刻度,摇匀,分别得到浓度为0·024、0·06、0·096、0·132、0·168、0·204 mg·mL-1的对照品溶液。以上6份对照品溶液各进样10μL,测得峰面积,以进样量X(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,建立标准曲线,计算的回归方程为Y=1·683×103X+36·97, r=0·999 8。结果表明,苍术酮在0·24~2·04μg具有良好的线性关系。
2.6.7.2．2.6精密度试验
取浓度为0·096 mg·mL-1对照品溶液进样10μL,重复进样6次,平均峰面积为1 987, RSD为1·7%。
2.6.7.2．2.7稳定性试验
取配制好的样品溶液分别在0、2、4、6、8、10 h进样10μL,记录峰面积,结果峰面积的RSD为1·3%。可见样品溶液在10 h内稳定。
2.6.7.2．2.8　重复性试验
取同一批号样品,按样品溶液的制备方法平行制备6份,按含量测定方法进行测定,结果苍术酮的平均含量为304·8 mg·g-1, RSD为1·5%。
2.6.7.2．2.9　回收率试验
采用加样回收法,取已知含量的挥发油9份,每份约0·011 g,精密称定,分别精密加入对照品苍术酮适量,按样品溶液制备项下操作,依法制备、进样、记录色谱图、计算回收率,结果见表1。

分别精密吸取对照品与样品溶液各10μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图,以外标法计算样品中苍术酮的含量,结果见表2。

三、稳定性试验
根据《药品注册管理办法》中关于药品稳定性考察要求及本品质量标准草案，进行了稳定性考察。

3．1仪器与试药

3．1．1仪器

恒温恒湿箱(上海精宏实验设备有限公司)
ZBl型智能崩解仪(天津市新天光分析仪器技术有限公司)
722S分光光度计(上海精密科学仪器有限公司一分析仪器总厂)
DK-98—1型电熟恒温水浴锅(余姚市东方电工仪器厂)
KQ---250DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)

3．1．2试药
泽泻胶囊(批号111201、111202、111203)，泽泻对照药材、白术对照药材 (中国药品生物制品检定所)，硅胶G(青岛海洋化工有限公司)，硅胶G薄层板(自制)。其它试剂均为分析纯(北京化工厂)。水为双蒸水。

3．2检测方法

3．2．1加速试验

取三批泽泻胶囊样品，按照市售包装，置温度40±2℃、相对湿度75％±5％的条
件下放置3个月，分别于第1、2、3个月取样，检查性状、崩解时限、鉴别、含量、微
生物限度。

3．2．2室温留样

取三批泽泻胶囊样品，按照市售包装。在室温(温度25±2℃、相对湿度60％±10％)
条件下放置6个月，分别于第3、6个月取样，检查性状、崩解时限、鉴别、含量、微生物限度。

3．3考察项目

按胶囊剂稳定性考察项目及本药品标准相关项下方法检测，具体项目和方法如下：

3．3．1性状

按本标准性状检查方法检查。

3．3．2薄层鉴别

按本标准鉴别项(1)、(2)、(3)、(4)试验方法检查。

3．3．3崩解时限

按《中国药典》2010年版一部(附录ⅫA)崩解时限检查法检查。

3．3．4水分

按《中国药典》2010年版一部(附录ⅨH)水分测定项下甲苯法测定。

3．3．5含量测定

按本标准含量测定方法测定。

3．3．6微生物限度检查

按《中国药典》2010年版一部(附录XIII C)微生物限度检查法检查。

3．4检测结果

3．4．1加速试验

表3-1 泽泻胶囊（111201）加速稳定性试验结果 样品批号：111201
放置时间
0月
2011.06
1月
2011.07
2月
2011.08
3月
2011.09
6月
2011.12

性状
本品为硬胶囊剂；内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。
本品为硬胶囊剂；内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。
本品为硬胶囊剂；内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。
本品为硬胶囊剂；内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。
本品为硬胶囊剂；内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。