清胰颗粒1号对急性水肿型胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影响.pdf

中国中西医结合外科杂志2013年6月第19卷第3期清胰颗粒1号对急性水肿型胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影响韩春起1，张淑坤2，崔乃强2摘要目的：观察清胰颗粒1号对急性水肿型胰腺炎大鼠的胰腺外分泌功能的影响。方法：取30只雄性Wistar大鼠随机分为模型组、治疗组、正常组，每组10只。治疗组和模型组采用腹部皮下注射雨蛙素的方法建立大鼠急性水肿型胰腺炎模型，收集大鼠胆胰液，检测胆胰液总量、淀粉酶和脂肪酶水平，同时检测胆胰液中蛋白浓度和电解质含量。结果：与正常组相比，模型组大鼠胆胰液中淀粉酶、脂肪酶、HCO3-浓度增高，Ca2+浓度降低(P0.05)；与模型组相比，治疗组的大鼠胆胰液中淀粉酶、脂肪酶、HCO3-浓度降低，Ca2+浓度升高(P0.05)。结论：清胰颗粒1号能抑制急性水肿型胰腺炎胰酶分泌、降低胰液中HCO3-浓度，增加Ca2+浓度。关键词：清胰颗粒1号；急性水肿型胰腺炎；胰腺外分泌；电解质变化；大鼠中图分类号：Q95-33;R657.5+1文献标识码：A文章编号：1007-6948(2013)03-0272-04doi：10.3969/j.issn.1007-6948.2013.03.0161.天津医科大学研究生院（天津 300070）2.天津市中西医结合急腹症研究所通信作者：崔乃强，E-mail：Impact of Qingyi Particle NO.1（清胰颗粒1号）on Pancreatic Exocrine Secretion in Experimental AcutePancreatitis RatsHAN Chun-qi,ZHANG Shu-kun,CUI Nai-qiang.Tianjin Medical University,Tianjin(300070),ChinaAbstract:ObjectiveTo observe the impact of Qingyi Particle NO.1（清胰颗粒1号）on pancreatic exocrine in experimental acute pancreatitis rats.MethodsThirty male Wistar Rats were randomly divided into anormal group,a model control group and a treated group.The establishment of rat model with pancreatitis wasdone through subcutaneous injection of Caerulein.Pancreatic exocrine secretion was collected and the volume,protein level,amylase,lipase and electrolyte of pancreatic exocrine secretion in normal and pancreatic rats weremeasured.ResultsThe levels of amylase、lipase and HCO3-were significantly higher and the level of Ca2+was lowered in model group as compared with the normal group(P0.05).Those in the treated group were improved as compared with the model group(P0.05).ConclusionImpairment of pancreatic exocrine secretionwas observed in acute pancreatitis.Qingyi Particle NO 1（清胰颗粒1号）has the effect of inhibiting pancreaticexocrine secretion by regulating the levels of amylase,lipase,HCO3-and Ca2+.Key words:Qingyi Particle NO.1；acute pancreatitis；pancreatic exocrine secretion；rats急性胰腺炎是临床最常见的急腹症之一，随着对其发病机制的深入研究，临床治疗也取得较大的进展。胰腺炎后胰腺的形态、功能均受到不同程度的影响。急性胰腺炎后胰腺外分泌功能变化是选择治疗的关键因素，但是急性胰腺炎后胰腺外分泌的变化目前尚无定论，本实验意在通过对急性水肿型胰腺炎大鼠模型为研究对象，来着手研究急性胰腺炎胰腺外分泌功能变化以及中药清胰颗粒1号对其影响，为中医治疗急性胰腺炎提供新的理论基础和思路。1材料和方法1.1实验动物雄性Wistar大鼠30只，体质量在（25050）g，由中国医学科学院实验动物研究所提供（动物饲养合格证号：SCXK（京）2005-0013）。1.2药物清胰颗粒1号方剂组成：柴胡，黄芩，枳实，元胡，川楝，大黄、芒硝、甘遂等,中药按传统工艺制备成水煎剂，均含生药1 g/mL，灭菌后置于4 冰箱备用（天津中西医结合急腹症研究所药剂室制备）。1.3检测方法胰液量的测定：采用微量进样器测定胰液体积。胰液生化指标的检测：测量胰液中的淀粉酶、脂肪酶、总蛋白、Na+、K+、Cl-、Ca2+、HCO3-(应用日立7600全自动生化仪检测)。272中国中西医结合外科杂志2013年6月第19卷第3期1.4急性胰腺炎大鼠模型的建立大鼠常规饲养1周后，以雨蛙素2 g/100 g体质量，腹股沟皮下注射6次，每次间隔1 h，术前自由进食水，造模开始后禁食不禁水。1.5动物分组与给药方法将大鼠按随机数字表法分为3组，即对照组、模型组、治疗组，每组10只。于雨蛙素的初次注射前30 min分别给予生理盐水和清胰颗粒1号（0.5 g/100 g）灌胃，5 h重复1次，共计3次，模型组和对照组给予生理盐水，治疗组给予清胰颗粒 1 号。末次注射后 6 h 用 10%水合氯醛（0.3 mL/100 g体质量）腹腔注射麻醉，麻醉成功后，使大鼠仰卧位，四肢固定于动物手术台，腹部剪毛备皮。于腹壁正中切口，长约2 cm，入腹后沿幽门找到十二指肠，将其提至切口外，寻找胆胰管在十二指肠开口（乳头处），用5号针头穿刺胰胆管开口对侧十二指肠壁，用静脉留置针导管逆行插入胆胰管内0.5 cm，收集每30 min胆胰液至术后2 h。各组术后留取胰腺组织。1.6统计学分析数据均以均数标准差(xs)表示，应用SPSS13.0统计软件进行统计描述、数据处理。计量资料采用完全随机设计单因素方差分析（one-way ANVOVA）,多个样本均数间的两两比较采用SNK（Student-Newman-Keuls）法。以P0.05为有统计学差异。2结果2.1血清中淀粉酶的变化模型组血清淀粉酶水平与对照组相比明显升高（P0.05），治疗组血淀粉酶低于模型组(P0.05)。见表1。2.2胆胰液的脂肪酶和淀粉酶变化模型组各时间点胆胰液淀粉酶水平与对照组相比明显升高（P0.05），治疗组各时间点胆胰液淀粉酶低于模型组（P0.05）；模型组各时间点胆胰液脂肪酶水平与对照组相比明显升高（P0.05），治疗组各时间点胆胰液脂肪酶低于模型组（P0.05）。见表2。2.3胆胰液量和蛋白浓度的变化对照组、模型组和治疗组在造模后各个时间点胆胰液中蛋白水平没有明显差别(P0.05)；和对照组相比，模型组的各时间点胆胰液量有增多趋势(P0.05)；治疗组各时间点胆胰液量多于模型组，但差异没有统计学意义(P0.05)。见表3。2.4胆胰液的电解质的变化从表3中可见，对照组、模型组和治疗组在造模后各个时间点胆胰液中Na+、K+和Cl-的水平没有明显差别(P0.05)；治疗组各实验时间点中胆胰液Ca2+水平低于对照组而高于模型组（P0.05，P0.05）；模型组中各时间点胆胰液 HCO3-水平分别与对照组相比均升高（P 0.05），治疗组各时间点胆胰液HCO3-水平与模型组没有明显差别（P0.05）。3讨论急性胰腺炎病情危重，病程中常伴有胰腺外分泌功能改变，其发生机制及其在胰腺炎病理机制中所起作用尚不清楚。有研究1-2认为急性胰腺炎时胰腺外分泌功能下降，也有个别研究认为急性胰腺炎时胰液的基础分泌量显著增高，胰液中的淀粉酶、脂肪酶含量也显著升高，胰液中的淀粉酶、脂肪酶含量也显著升高3。本次实验通过注射雨蛙素诱导急性水肿型胰腺炎模型，属于非创伤性急性胰腺炎模型，操作简单，模型较稳定，其诱导病理变化同人类急性胰腺炎相类似。本实验结果表明急性水肿型胰腺炎早期胰腺基础分泌量无显著变化，但淀粉酶和脂肪酶浓度增加,且胰液中HCO3-浓度增高，Ca2+浓度降低。急性胰腺炎发病机制复杂，胰腺腺泡细胞内酶原异常激活引起的自身消化是公认的胰腺炎早期事件4，追溯触发胰酶异常激活的机制，腺泡钙超载学说是目前研究的热点，并得到越来越多的认可。目前研究认为细胞钙超载是急性胰腺炎病理过程中占主导作用的细胞机理5-6。Ca2+在胰酶活化过程中起着重要信使作用。实验研究证实5，急性胰腺炎早期，腺泡细胞内钙浓度明显增高，血中钙浓度明显降低，胰腺腺泡内Ca2+超载可以激活大量胰酶，启动胰腺自身消化过程，而胰腺自身消化是全身炎症反应综合征的“扳机”。本实验结果表明，胰腺外分泌Ca2+浓度降低，可能与急性胰腺炎时存在的微循环障碍，导致胰腺腺泡缺氧，进一步导致胰腺内ATP耗竭，钙-镁ATP失活，大量钙离子积蓄在胰腺腺泡细胞有关。本实验结果同时也表明了胰腺外分泌HCO3-浓度，而HCO3-浓度升高可能会增加胰腺的外分泌的碱性环境，也会导致胰酶的异常激活。急性胰腺炎属于中医“腹痛”、“黄疸”、“胁痛”、“胃脘痛”范畴，多因情志郁结、暴饮暴食，或疲劳过组别正常组模型组治疗组n101010淀粉酶148 391850530a681 83b表1各种大鼠血清淀粉酶的水平比较（U/L,xs）注：与对照组相比，aP0.05;与模型组相比，bP0.05273中国中西医结合外科杂志2013年6月第19卷第3期组别淀粉酶对照组模型组治疗组脂肪酶对照组模型组治疗组时间30 min29613334.8518 5403916.63a53522071.36b180.0 87.942078.01651.59a870.0 252.92b60 min13531263.1419 1002565.88a73882379.21b518.6 637.832415.01994.38a965.0 253.92b90 min31533488.6612 2903898.93a81182131.39b260 100.6623522204.44a1047 489.88b120 min25161693.7813 1524145.07a71353412.12b238.0 163.761680.01730.18a1192.4 781.50表2胆胰液中淀粉酶和脂肪酶的水平（n=10，U/L,xs）注：与同时段的对照组相比，aP0.05;与同时段的模型组相比，bP0.05组别蛋白浓度（g/L）对照组模型组治疗组胆胰液量（L）对照组模型组治疗组时间30 min1.79 0.242.16 0.421.88 0.38620.00115.18548.00104.98577.50 59.4660 min1.40 0.331.54 0.371.61 0.46662.00110.77563.75 73.08593.00190.3890 min1.55 0.312.21 0.481.87 0.31660.00111.13503.75 51.53520.00170.73120 min1.45 0.531.86 0.461.97 0.47636.00116.96540.00 77.09598.75158.87表3胆胰液蛋白和量水平（n=10，xs）度、肝郁气滞，脾失健运，湿热内蕴，淤阻中焦而成。湿热互结蕴毒，中焦闭阻不通，则肌肤发黄、结胸膈痛；热结阳明而至痞、满、燥、实等证。毒热炽盛而耗阴，可致伤血动血，皮下呈现青瘀紫斑；热毒内陷，可致热厥猝死。临床多以疏肝理气、清热解毒、通里攻下为原则7。清胰颗粒号由天津市急腹症研究院药剂室统一制备。方剂组成：柴胡，黄芩，枳实，元胡，川楝，大黄、芒硝、甘遂等。方中有三位药力峻猛的泻下药，用于治疗重症急性胰腺炎并发的肠麻痹。根据 伤寒论“伤寒六、七日，结胸热实，脉沉而紧，心下痛，按之石鞭，大陷胸汤主之”的记载，使用甘遂以下水结。方中大黄入阳明泻热通腑为君，黄芩、柴胡专入少阳疏邪透表匀臣，厚朴、积实行气导滞为佐，另配疏肝理气、行气止痛之品元胡、川楝，诸药合用，和解少阳，内泻热结，使少阳与阳明合病得以双解。组方具有清热解毒、通里泻下的作用8。本次实验考虑到大鼠的分泌胰液总量较少，无组别Ca2+对照组模型组治疗组HCO3-对照组模型组治疗组时间30 min2.300.141.660.36a1.960.40b22.392.1327.242.42a25.901.1360 min2.250.171.420.41a1.560.68b22.211.2726.361.90a25.582.4990 min2.320.161.320.35a1.750.68b23.61.5126.72.75a25.31.56120 min2.360.231.050.49a1.870.44b23.511.7326.871.51a25.211.07表4各组大鼠各时间点胆胰液中电解质的水平（n=10，mmol/L,xs）注：与同时段的对照组相比，aP0.05;与同时段的模型组相比，bP0.05274中国中西医结合外科杂志2013年6月第19卷第3期法完成众多实验检测指标的要求，故通过收集大鼠的胆胰液来完成本次实验，大鼠中胆汁分泌相对稳定，不含脂肪酶、淀粉酶，且其电解质水平与血清中相应的电解质水平相当，故通过检测大鼠的胆胰液也能够反应胰液中这些检测指标的变化。本实验结果也表明了清胰颗粒1号能够抑制胰酶分泌、升高Ca2+浓度、降低HCO3-浓度，这也提示了清胰颗粒 1 号治疗急性胰腺炎可能与此机制有关。参考文献：1 Niederau C，Niederau M，Luthen R，et al.Pancreatic exocrine secretion in acute experimental pancreatitis J.Gastroenterology，1990，99(4)：1120-1127.2 Bielecki K，Wiedmann M，Meyer F，et al.Effect of 5-Fluorouracil on secretion and synthesis of pancreatic digestive enzymes：studies in isolated pancreatic acini and perfused pancreas derived fromnormal rats and from rats with acute necrotizing pancreatitis J.Pancreas，1994，9(4)：518-525.3 Sata N，Kimura W，Muto T，et al.Exocrine function of caerulein-induced acute pancreatitis in anesthetized rats J.J Gsatroenterol，1996，31(1)：94-99.4 Pandol SJ.Acute pancreatitisJ.Curr Opin Gastroenterol,2005,21（5）:538-543.5 周总光，曾勇，杨品华，等.胰腺微循环的结构与功能 J.生物医学工程学杂志,2001,18(2):195.6 Frick TW.The role of calcium in acute pancreatitis J.Surgery,2012,152:S157-S163.7 张喜平,王英.中药治疗急性胰腺炎的主要机制与作用的实验研究进展 J.世界华人消化杂志,2006,14(4):412.8 苗彬,崔乃强,李忠廉,等.清胰片在SAP恢复期中的治疗价值 J.世界华人消化杂志,2009,17(13):1374.（收稿：2013-02-06修回：2013-04-10）（责任编辑赵连根）益生剂对脓毒症大鼠的保护作用刘大全，高巧营，刘洪斌，李东华，吴尚为摘要目的：观察益生剂对脓毒症大鼠的治疗作用。方法：采用盲肠结扎穿孔法制作大鼠脓毒症模型，给予益生剂治疗后观察大鼠生存情况，同时对腹水和血标本进行细菌培养及菌种鉴定。结果：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等条件致病菌在脓毒症动物腹水和血液中大量繁殖，治疗组细菌则含量明显减少。结论：条件致病菌是脓毒症大鼠的主要致病菌，益生剂可抑制致病菌的繁殖而对脓毒症大鼠起到保护作用。关键词：脓毒症；益生剂；病原体；大鼠中图分类号：Q95-33；R446.5文献标识码：A文章编号：1007-6948(2013)03-0275-04doi：10.3969/j.issn.1007-6948.2013.03.017Protective Effects of Probiotics against Sepsis in RatsLIU Da-quan,GAO Qiao-ying,LIU Hong-bin,etal.Department ofPharmacology,Institute of Acute Abdomen by Integrated Traditional Chinese and WesternMedicine,Tianjin Nankai Hospital,Tianjin(300100),ChinaAbstract：ObjectiveTo observe the therapeutic effect of probiotics on rats with sepsis.MethodsThesepsis was induced by cecal ligation and puncture.The mortality and the bacterial population in ascites andblood in experimental sepsis treated with probiotics were determined.ResultsThe proliferation of conditioned pathogens such as Escherichia coli and Staphylococcus aureus in probiotics treated group was decreasedsignificantly as compared with that of the model group.ConclusionConditioned pathogens may be primarypathogens of septic rats in the study.Probiotics are contributed to protective effects in septic models by suppressing proliferation of conditioned pathogens.Key words:Sepsis;probiotics;pathogen;rats基金项目：天津市卫生局资助项目（11020）天津市中西医结合急腹症研究所（天津 300100）通信作者：吴尚为，E-mail：275