双氢青蒿素抑制非小细胞肺癌细胞迁移侵袭和血管生成拟态的初步研究.pdf

目的 探讨双氢青蒿素(DHA)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生长、迁移侵袭和血管生成拟态(VM)能力的 影响。方法 将不同浓度的DHA加入NSCLC细胞株A549 与H3255中，待24 h后,CCK8法检测细胞活力,Tr a n sw el l实 验检测NSCLC细胞的迁移侵袭能力。q RT-P CR和West er n bl o t 分别检测 E-c a d h er in、N-c a d h er in、Vimen t in mRNA 和蛋白 表达水平。三维细胞培养观察细胞的血管样形态生成情况。q RT-P CR 和 West o n bl o t 检测 VM 的标志物 VE-c a d h er in mRNA 和蛋白表达水平。结果 DHA抑制A549和H3255的细 胞生长，并呈现时间依赖性和浓度依赖性;DHA抑制A549 和H3255转移和侵袭能力(均P 0.001)；DHA在A549和 H3255细胞中上调E-c a d h er in mRNA(均P 0.001)和蛋白(P 0.001；P 0.01)的表达,下调 N-c a d h er in mRNA(均 P 0.01)和蛋白(均P 0.001)的表达以及Vimen t in mRNA(P 0.01；P 0.001)和蛋白(均P 0.001)的表达。三维 细胞培养结果表明,DHA处理的A549细胞和H3255细胞 12 h VM生成能力均降低,且下调VE-c a d h er in mRNA(P 0.001；P 0.01)和蛋白(均 P 0.001)表达。结论 DHA 可抑制NSCLC细胞的生长、迁移侵袭和VM能力。关键词双氢青蒿素;非小细胞肺癌;上皮-间质转化;血管 生成拟态中图分类号 R392.l l文献标志码A 文章编号1000-1492(2023)05-0766-06 d o i：10.19405/j.c n k i.issn l OOO-1492.2023.05.011肺癌是癌症相关死亡的主要原因之一,转移作 为肺癌发展的关键阶段，与70%以上的死亡有 关 o 上皮-间质转化(epit h el ia l-mesen c h y ma l t r a n sit io n,EMT)是上皮细胞获得间质特征的过程。在癌症中,EMT与肿瘤起始、侵袭、转移和治疗耐药 性相关。血管生成拟态(v a sc u l o g en ic mimic r y,VM)是近年来在许多恶性肿瘤中发现的一种血管生 成过程，涉及由肿瘤细胞组成的微血管通道的形成。2022-12-11 接收基金项目:安徽省重点研究与开发计划项目(编号：202004J070 20027)作者单位:安徽医科大学第二附属医院检验科，合肥230601作者简介:胡冰琪，女，硕士研究生；陈礼文，男，主任技师，硕士生导师，责任作者，E-ma il：c h en l iw en a h mu.ed u.c n因此,VM被认为是侵袭性肿瘤血管形成的新模型,可以为肿瘤生长提供血液供应O双氢青蒿素(d ih y d r o a r t emisin in,DHA)是青蒿素 的第一代衍生物，因其疗效好、毒性低等特点,被用 于临床抗疟治疗。近年来，研究表明双氢青蒿素 在肝癌、卵巢癌、胰腺癌等多种肿瘤中起抗 癌作用。但在肺癌中,DHA是否发挥抗癌效应及其 可能的抗癌机制还有待探究。该研究使用DHA处 理非小细胞肺癌(n o n-sma l l c el l l u n g c a n c er,NSCLC)A549和H3255细胞来检测对EMT过程中 E-c a d h er inN-c a d h er in Vimen t in 和 VM 的标志物 VE-c a d h er in表达的影响，并采用一系列细胞功能实 验探讨DHA对NSCLC细胞的转移侵袭和VM的可 能作用机制。1材料与方法1.1实验材料A549.H3255细胞采购于上海富 恒生物技术有限公司;RP MI1640培养基和胎牛血清 购于美国Gibc o公司;0.25%胰酶消化液、1%青-链霉素、CCK8试剂和RIP A裂解液购于上海碧云天 生物技术有限公司；总RNA提取试剂盒购于新贝(上海)生物科技有限公司;E-Ca d h er in抗体购于美 国 Af f in it y Bio sc ien c es 公司；N-Ca d h er in 抗体购于美 国 Cel l Sig n a l in g Tec h n o l o g y 公司；Vimen t in 抗体、VE-Ca d h er in抗体购于英国Abea m公司；山羊抗兔(H+L)HRP和山羊抗小鼠(H+L)HRP购于美国 Af f in it y Bio sc ien c es 公司；West er n bl o t 显影仪购于上 海天能科技有限公司;Ma t r ig el Ma t r ix基质胶和Tra n sw el l 小室购于美国Co min g公司。1.2实验药物 DHA(纯度97%)购于美国Sel l-ec k公司、DMSO购于上海碧云天生物技术有限公 司,DHA用DMSO充分溶解配成100 mmo l/L的母 液，水浴锅50咒水浴助溶，-20咒保存。在实验前 用RP MI1640培养基稀释母液至所需使用的浓度(使DMSO终体积分数0.1%)。1.3方法1.3.1 细胞培养 向RP MI1640培养基中加入 安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2023 Ma y；58(5)76710%胎牛血清和1%的青-链霉素，配制成新鲜培 养基，在5%CO2、饱和湿度条件下的37咒培养箱 里培养A549和H3255细胞。1.3.2 CCK8实验 将A549和H3255细胞以5 x W个/孔的密度铺进96孔板中。待细胞过夜贴壁 后，加入不同浓度的DHA（0、5、10、25、50、100 jx mo l/L）放置37 C培养箱培养。到待测时间后,以 1:10的比例将CCK8试剂和RP MI1640培养基混 合，将96孔板中的培养基吸出，加入配好的溶液,1 h后酶标仪检测450 n m处的吸光度值。1.3.3 Tr a n sw el l 实验 Ma t r ig el Ma t r ix 基质胶和无 血清RP MI 1640培养基按1:3的比例配置。向小 室内加入60以所配制的基质胶溶液，置于37兀培 养箱烘干。其中，仅侵袭实验需使用含基质胶的无 血清溶液，迁移实验无需基质胶。细胞数量为:迁移 实验每小室5 x 104个，侵袭实验每小室1 x 105个。向小室的下室加入600 jil含30%胎牛血清的RP-MI1640培养基，放置37七培养箱中培养。加入4%多聚甲醛细胞固定液,0.1%结晶紫溶液染色。观察 结果并拍照。1.3.4 三维细胞培养 将Ma t r ig el Ma t r ix基质胶和 无血清培养基1：1配置，向96孔板每孔加入配置 好的含基质胶培养基溶液50以,放置37弋培养箱 烘干1 h。96孔细胞培养板中每孔加入5 x 105个/ml细胞，终体积为100的细胞悬液。然后将96 孔板放至37咒细胞培养箱培养6 12 h。最后将 96孔板置于倒置显微镜观察高倍镜视野下,观察孔 内外细胞的血管样形态生成情况并拍照记录。实验 重复3次。1.3.5 RNA提取与q RT-P CR实验 总RNA按厂 家说明书用TRIzo l试剂提取,然后逆转录成c DNA,q RT-P CR 检测 E-c a d h er in、N-c a d h er in、Vimen t in、VE-c a d h er in和内参GAP DH的表达水平,引物序列见表 1,反应条件为95七预变性30 s,95咒变性10 s,60 咒退火30 s,60弋延伸30 s。1.3.6 West er n bl o t实验 加入RIP A裂解液收集 细胞上清,进行SDS-P AGE蛋白电泳后,将蛋白质信 息转移至P VDF膜（0.45 pm）上,切膜后，将条带放 入5%脱脂牛奶中封闭2 h。一抗E-c a d h er in（兔源 单抗1:2 000稀释）A N-c a d h er in（兔源单抗1:1 000稀释）、Vimen t in（兔源单抗1:3 000稀释）和 VE-c a d h er in（兔源单抗 1：1 000 稀释），GAP DH（兔 源多抗1：5 000稀释）,4七冰箱里过夜;HRP二抗（1：5 000稀释）37戏孵育1.5 h,置于化学发光成表1引物序列引物名称引物序列（5，-3，）E-c a d h er inF:CCCAATACATCTCCCTTCACAG R:CCACCTCTAAGGCCATCTITGN-c a d h er inF:CCTCCAGAGTITACTGCCATGACR:GTAGGATCTCCGCCACTGAITCVimen t inF:AGGCAAAGCAGGAGTCCACTGAR:ATCTGGCGTTCCAGGGACTCATVE-c a d h er inF:GAAGCCTCTGATTGGCACAGTG R：Tn TGTGACTCGGAAGAACTGGCGAP DHF:AAGGTGAAGGTCGGAGTCAACR:GGGGTC ATTGATGGC AACAATA像仪内显影，用Ima g e J图像分析软件对各组蛋白条带进行灰度值测定,实验重复3次。1.4统计学处理Ima g e J软件对实验结果图像进 行量化分析，用Gr a ph P a d P r ism 9软件进行数据分 析。数据以力土 s表示,组间差异采用单因素方差分 析，两组间比较采用/检验。P 0.05为差异有统 计学意义。2结果2.1 DHA抑制A549和H3255细胞的生长 在96 孔板中铺细胞后，加入不同浓度的DHA（0、5、10、25,50,100|x mo l/L），分别处理 24、48、72 h 后，加入 CCK8溶液进行检测。与对照组（DHA浓度为0|x mo l/L）比较,DHA处理后的实验组细胞生存能力 受到抑制,A549和H3255细胞存活率下降,并呈浓 度和时间依赖性。A549和H3255的半数抑制浓度（h a l f ma x ima l in h ibit o r y c o n c en t r a t io n,IC50）分别为 52.17|jLmo l/L 和 46.06|imo l/L0 故后续实验均使 用 50|x mo l/L 的 DHAO 见图 1。2.2 DHA抑制A549和H3255细胞的迁移与侵袭 能力Tr a n sw eU实验检测DHA是否对肺癌细胞株 的迁移和侵袭产生影响，用DHA处理A549和 H3255细胞,24 h后观察迁移实验的结果,48 h后观 察侵袭实验的结果,观察并拍照穿过基质胶的数量。24 h后，与对照组比较,DHA组A549和H3255细 胞迁移数量减少，表明DHA抑制A549和H3255细 胞迁移能力，差异有统计学意义（A549：t=-19.190,P 0.001；H3255:t=-24.678,P 0.001）,见图2A、B。48 h后，与对照组比较,DHA 组穿过基质胶的A549和H3255细胞侵袭数量减 少，表明DHA抑制A549和H3255细胞的侵袭能 力，差异有统计学意义（A549：i=-33.080,P 0.001；H3255:i=-51.824,P 0.001）,见图 2C、D。768安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2023 Ma y;58(5)O ODHA(u mo l/L)6 4 2 06 4 2 0 O.oo.O.oo.O O 8 81.O1.OB B.8.86 6 4.2O4.2OO.O.O.O.O.O.24hDHA(u mo l ZL).O.OA图1不同浓度的DHA对A549和H3255的生长抑制程度A：不同浓度DHA处理3 d的A549细胞生存情况;B：不同浓度DHA处理3 d的H3255细胞生存情况;与对照组比较:*F 0.05,*P 0.01,*P 0.001o o o o o Oo o o o o O0 8 6 4 20 8 6 4 2 B B 1 1()#艳出A549A549对照组 DHA组o o o o Oo o o o O8 6 4 28 6 4 2()*諂出變S S0000H3255*o o o o o Oo o o o o O0 8 6 4 20 8 6 4 2 D1 D1()粼吧最*对照组DHA组o o o o o Oo o o o o O0 8 6 4 20 8 6 4 2(*)*礫eilfseilfs对照组 DHA组H3255*对照组 DHA组壬图2 DHA抑制A549和H3255细胞的迁移与侵袭A：对照组、DHA组迁移结果x 20；B：对照组、DHA组的迁移的量化结果;C：对照组、DHA组的侵袭结果x 20；D：对照组、DHA组的侵袭的量化结果;与对照组比较：*P 0.0012.3 DHA影响EMT进程相关分子mRNA和蛋 白表达 q RT-P CR检测EMT标志物E-c a d h er in、N-c a d h er in和Vimen t in的mRNA表达水平。结果显 示:在A549和H3255细胞中，DHA组E-c a d h er in的 mRNA 表达上升(A549：t=11.445,P 0.001；H3255:i=20.068,P 0.001),N-c a d h er in 的 mRNA 表达下降(A549：t=-5.847,P=0.004；H3255:t=-5.233,P=0.006),Vimen t in 的 mRNA 表达水平 同样也下降(A549:t=-8.333,P=0.001；H3255：t=-13.629,P 0.001),见图 3 A。进一步用 Wester n bl o t 技术验证 E-c a d h er in,N-c a d h er in 和 Vimen t in 的蛋白表达水平。DHA作用于A549和H3255细 胞24 h后，与对照组比较,DHA组除上皮样细胞标 志物E-c a d h er in的蛋白表达水平上升(A549：t=24.571,P 0.001；H3255：t=6.062,P=0.004),N-Ca d h er in(A549：t=-52.589,P 0.001；H3255:t=-50.409,P 0.001)及 Vimen t in(A549:t=-25.730,P 0.001；H3255:t=-34.694,P 0.001)蛋白表达水平均下降，见图3B、C。2.4 DHA抑制VM形成及VE-cadherin表达 为安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2023 Ma y;58(5)769A1.5*A549匚二I对照组 盪DHA组1.5*H3255二对照组盪DHA组0.O.5.O.51 1.O.O.壬E-c a d h er in*B A549对照组Vimen t inGAP DHE-c a d h er inN-c a d h er inH3255对照组DHA组*fe晏4n4nN-c a d h er in Vimen t m*反决山fflEuqpeYNfflEuqpeYN0 8 6 4 2 00 8 6 4 2 0 l.o.o.o.o.l.o.o.o.o.*-s-对照组DHA组O O,5,5 L a A*0*E-c a d h er in N-c a d h er in Vimen t in组照对.O.86 4.2O.O.86 4.2O 匚o.ao.0.o.ao.0.*.O.8.64.2O.O.8.64.2O l.o.o.o.o.l.o.o.o.o.*fcm wan组 照 对图3 DHA影响A549和H3255细胞EMT相关分子mRNA和蛋白表达A：EMT相关分子mRNA相对表达量；B：A549细胞中EMT相关蛋白表达及量化结果;C：H3255细胞中EMT相关蛋白表达及量化结果;与对照组比较：*P 0.01,*P 0.001了探究DHA对VM的影响，使用三维细胞培养技术 检测对照组和DHA组的血管样结构生成情况。在 37兀培养箱培养12 h之后,DHA抑制肺癌细胞血 管样结构生成，即抑制VM的形成，见图4AO q RT-P CR结果表明,DHA抑制了 VM标志物VE-c a d h er in 的 mRNA 水平表达(A549：t=-10.846,P 0.001；H3255：i=-6.443,P=0.003),见图 4B。West er n bl o t实验进一步验证,DHA也抑制了 VE-c a d h er in的 蛋白表达水平，差异有统计学意义(A549：i=-37.691,P 0.001；H3255:t=-11.006,P 0.001),见图代。以上结果表明,DHA抑制VM的 形成。3讨论肺癌导致全球癌症相关死亡人数最多。目前,这些病例中超过85%被归类为NSCLC,预计5年 生存率仅为15.9%,在过去的几十年里，这个数据 仅略有改善。小分子酪氨酸激酶抑制剂和免疫 疗法极大的改善了 NSCLC患者的生存益处。然而,NSCLC的总体治愈率和生存率仍然很低，特别是在 转移性疾病中。因此,寻找一种抑制NSCLC转移 和抑制其肿瘤进程的安全高效的药物显得尤为重 要。青蒿素是一种被广泛认可及应用的抗疟疾药 物,DHA是其第一代衍生物,具有水溶性好,毒性低 等特点，其抗癌效应在近年来成为热点。如通过自 噬来抑制肝癌细胞HepG2.2.15的增殖皿，在食管 鳞癌中以人端粒酶逆转录酶为靶点抑制增殖、转移 和侵袭M等。转移是癌症相关死亡的主要原因，因此，抑制转 移是改善临床结果中非常重要的一环。EMT是一770安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2023 Ma y;58(5)AH32559 95454AB B0 8 6 40 8 6 4 l.oo.o.l.oo.o.TTn-cluqpEon-cluqpEo*对照组DHA组s史 0.2 LL oL-.0.86 4.2O.0.86 4.2O1.0.o.0.0.1.0.o.0.0.粧首w墓0 8 6 4 2 00 8 6 4 2 0 l.l.H3255对照组DHA组A549*,0,0DHA组A549H3255对照组对照组DHA组8 6 4 2 08 6 4 2 0 o.o.o.o.o.o.o.o.CH3255对照组DHA组VE-c a d h er inGAP DHVE-c a d h er inA549对照组DHA组图4 DHA抑制NSCLC的VM形成A:三维细胞培养结果X1O；B：q RT-P CR检测VE-c a d h er in mRNA相对表达水平;C:West er n bl o t检测VE-c a d h er in蛋白表达水平及量化结 果;与对照组比较：*P 0.01,*P0.001种进化上保守的发育程序,它与致癌作用有关,并通 过增强移动性、侵袭性赋予癌细胞转移特性。EMT 的复杂生物学过程被认为是致癌的关键标志,而靶 向EMT途径成为了一种有吸引力的癌症治疗策 略。EMT的标志是失去上皮表面标志物,最显著 的是E-c a d h er in,以及获得间充质标志物，包括Vimen t in 和N-c a d h er ino在功能上,E-c a d h er in作为一种 肿瘤抑制基因，在调节细胞极性、分化、迁移和干细 胞样特性方面发挥多种作用。在细胞极性的情况 T,E-c a d h er in与相邻细胞结合，形成细胞间复合 物，形成上皮屏障。EMT过程中丢失的关键上皮标 志物包括E-c a d h er in、Mu c in-1、细胞角蛋白。相反,在此过程中获得的标志物包括N-c a d h er in,平滑肌 肌动蛋白、纤连蛋白和Vimen t in,它们共同构成了关 键的间充质标志物。本研究结果显示，用DHA 处理A549和H3255细胞后，DHA明显抑制了 NSCLC细胞的侵袭能力，并且E-c a d h er in的mRNA 和蛋白水平表达增强,N-c a d h er in和Vimen t in mRNA 和蛋白表达水平受到明显抑制。因此,本研究证实,DHA可通过抑制EMT,进而抑制A549和H3255细 胞的迁移和侵袭能力。VM是最近在许多恶性肿瘤中发现的血管生成 过程，不同于传统的涉及血管内皮的血管生成过程。肿瘤细胞沿着现有或新诱导的血管迁移，为肿瘤生 长和转移提供能量。近年来，一些针对血管生成的 临床治疗并不令人满意,这可能是由于VM的激活 所致。研究认为,EMT和VM息息相关,EMT导 致了 VM的发生，在EMT过程中，一些间充质细胞 标记物被上调，包括VE-c a d h er in、纤连蛋白、钙黏蛋 白2和Vimen t in0而VE-c a d h er in是一个生物标志 物，在VM的形成过程中起着至关重要的作用0 本研究通过三维细胞培养技术观察对照组和DHA 组VM的形成，发现DHA抑制了血管样结构的形 成，并且DHA组VE-c a d h er in的mRNA和蛋白表达 水平受到明显抑制,证实了 DHA抑制VM,但是否 是通过抑制EMT来抑制VM,尚未证实。综上所述，本研究于体外证实了 DHA抑制 NSCLC的A549和H3255细胞的增殖、迁移、侵袭能 力，诱导E-c a d h er in mRNA和蛋白表达及抑制N-c a d h er in和Vimen t in mRNA和蛋白水平表达，抑制 EMT效应;DHA还抑制VM的形成，下调VE-Ca d-h er in mRNA和蛋白水平表达。但DHA是否通过抑 制EMT效应进而抑制VM还有待进一步研究。参考文献1 Yin L,Liu X,Sh a o X,et a l.Th e r o l e o f ex o so mes in l u n g c a n c er met a st a sis a n d c l in ic a l a ppl ic a t io n s:a n u pd a t ed r ev iew J.J Tr a n d Med,2021,19(1)：312.2 P a st u sh en k o I,Bl a n pa in C.EMT Tr a n sit io n St a t es d u r in g Tu mo r P r o g r essio n a n d Met a st a sis J.Tr en d s Cel l Bio l,2019,29(3):212-26.安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2023 Ma y；58(5)7713 Wei X,Ch en Y,Jia n g X,et a l.Mec h a n isms o f v a sc u l o g en ic mimicr y in h y po x ic t u mo r mic r o en v ir o n men t s J.Mo l Ca n c er,2021,20(1):7-4 Kl a y ma n D L.Qin g h a o su(a r t emisin in):a n a n t ima l a iia l d r u g f r o m Ch in a J.Sc ien c e,1985,228(4703)：1049-55.5 Wu L,Ch en g Y,Den g J,et a l.Dih y d r o a r t emisin in in h ibit s pr o l if era t io n a n d in d u c es a po pt o sis o f h u ma n h epa t o c el l u l a r c a r c in o ma c el l by u pr eg u l a t in g t u mo r n ec r o sis f a c t o r via JNK/NF-k a ppa B pa t hw a y s J.Ev id Ba sed Co mpl emen t Al t ema t Med,2019,2019:9581327.6 Liu Y,Ga o S,Zh u J,et a l.Dih y d r o a r t emisin in in d u c es a po pt o sis a n d in h ibit s pr o l if er a t io n,mig r a t io n,a n d in v a sio n in epit h el ia l o v a ria n c a n c er via in h ibit io n o f t h e h ed g eh o g sig n a l in g pa t h w a y J.Ca n c er Med,2018,7(11)：5704-15.7 Ch en H,Su n B,Wa n g S,e t a l.Gr o w t h in h ibit o r y ef f ec t s o f d ih y d r o-a r t emisin in o n pa n c r ea t ic c a n c er c el l s:in v o l v emen t o f c el l c y c l e a rr est a n d in a c t iv a t io n o f n u c l ea r f a c t o r-k a ppa B J.J Ca n c er Res Cl in On c o l,2010,136(6)：897-903.8 Ch en Z,Fil l mo r e C M,Ha mmer ma n P S,et a l.No n-sma l l-c el l l u n g c a n c er s:a h et er o g en eo u s set o f d isea ses J -Na t Rev Ca n c er,2014,14(8)：535-46.9 Her bst R S,Mo r g en szt em D,Bo sh o f f C.Th e bio l o g y a n d ma n a g emen t o f n o n-sma l l c el l l u n g c a n c er f J.Na t u r e,2018,553(7689):446-54.10 Zo u J,Ma Q,Su n R,et a l.Dih y d r o a r t emisin in in h ibit s HepG2.2.15 pr o l if er a t io n by in d u c in g c el l u l a r sen esc en c e a n d a u t o ph a g y J.BMB Rep,2019,52(8)：520-4.11 Li Q,Ma Q,Xu L,et a l.Hu ma n t el o mer a se r ev er se t r a n sc r ipt a se a s a t h er a peu t ic t a r g et o f d ih y d r o a r t emisin in f o r eso ph a g ea l sq u a mo u s c a n c er J.Fr o n t P h a r ma c o l,2021,12：769787.12 Mit t a l V.Epit h el ia l mesen c h y ma l t r a n sit io n in t u mo r met a st a sis J.An n u Rev P a t h o l,2018,13：395-412.13 Ser r a n o-g o mez S J,Ma ziv ey i M,Al a h a r i S K.Reg u l a t io n o f epit h el ia l-mesen c h y ma l t r a n sit io n t h r o u g h epig en et ic a n d po st-t r a n sl a t io n a l mo d if ic a t io n s J.Mo l Ca n c er,2016,15：18.14 Liu Q,Qia o L,Lia n g N,et a l.Th e r el a t io n sh ip bet w een v a sc u l o g enic mimic r y a n d epit h el ia l-mesen c h y ma l t r a n sit io n s J.J Cel l Mo l Med,2016,20(9)：1761-9.15 Lu o Q,Wa n g J,Zh a o W,et a l.Va sc u l o g en ic mimic r y in c a r c in o g enesis a n d c l in ic a l a ppl ic a t io n s J.J Hema t o l On c o l,2020,13(1):19.A preliminary study of dihydroartemisinin inhibiting migration invasion and vasculogenic mimicry of non-small cell lung cancer cellsHu Bin g q i,Zh o u Jin g,Hu a n g Ju n f en g,Ch en Liw en(Dept of Laboratory Medicine,the Second Hospital of Anhui Medical University,Hefei 230601)Abstract Obje c t ive To in v est ig a t e t h e ef f ec t s o f d ih y d r o a r t emisin in(DHA)o n c el l g r o w t h,mig r a t io n in v a sio n a n d v a sc u l o g en ic mimic r y a bil it y o f n o n-sma l l c el l l u n g c a n c er(NSCLC)Me t hods Dif f er en t c o n c en t r a t io n s o f DHA w er e a d d ed t o NSCLC c el l l in es A549 a n d H3255,a n d a f t er 24 h o u r s,t h e c el l v ia bil it y w a s d et ec t ed by CCK8 met h o d,a n d t h e mig r a t io n a n d in v a sio n a bil it y o f NSCLC c el l s w a s d et ec t ed by Tr a n sw el l ex per imen t.q RT-P CR a n d West er n bl o t d et ec t ed E-c a d h er in,N-c a d h er in,a n d Vimen t in mRNA a n d pr o t ein ex pr essio n l ev el s,r espec t iv el y Th r ee-d imen sio n a l c el l w a s c u l t u r ed t o o bser v e t h e v a sc u l a r-l ik e mo r ph o l o g ic a l g en er a t io n o f c el l s q RTP CR a n d West er n bl o t d et ec t ed h u ma n v a sc u l a r en d o t h el ia l c a d h er in(VE-c a d h er in)mRNA a n d pr o t ein ex pr essio n l ev el s a s ma r k er o f v a sc u l o g en ic mimic r y Re sult s DHA in h ibit ed c el l g r o w t h o f A549 a n d H3255 a n d sh o w ed t ime-d epen den t a n d c o n c en t r a t io n-d epen d en t.DHA in h ibit s t h e in v a sio n a n d met a st a sis(a l l P 0.001)o f A549 a n d H3255 c el l s；DHA u pr eg u l a t ed t h e ex pr essio n o f E-Ca d h er in a t mRNA(a l l P 0.001)a n d pr o t ein(P 0.001；P 0.01)l ev el s in A549 a n d H3255 c el l s,a n d d o w n r eg u l a t ed t h e ex pr essio n o f N-c a d h er in a t mRNA(a l l P 0.01)a n d pr ot ein(a l l P 0.001)l ev el s a s w el l a s t h e ex pr essio n o f Vimen t in a t mRNA(P 0.01；P 0.001)a n d pr o t ein(a l l P 0.001)l ev el s Th e r esu l t s o f t h r ee-d imen sio n a l c el l c u l t u r e sh o w ed t h a t t h e 12-h o u r v a sc u l o g en ic mimic r y g ener a t io n c a pa c it y o f DHA-t r ea t ed A549 c el l s a n d H3255 c el l s w a s r ed u c ed,a n d t h e ex pr essio n s o f VE-c a d h er in a t mRNA(P 0.001；P 0.01)a n d pr o t ein(a l l P 0.001)l ev el s w er e d o w n r eg u l a