怀化医专微生物学检验教案.docx

怀化医专《微生物学检验》教案 编号：

2010年上学期
授课教师
桂 芳
教研室主任审核签名
李争鸣
教学课题
衣原体、支原体、立克次体
课时
授课时间
月 日
月 日
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月 日
月 日
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2
星期
星期
星期
星期
星期
星期
授课对象
检验专业
班级

目的要求
1、掌握主要致病性衣原体、支原体、立克次体概念、特点及其微生物学检验法。
2、了解衣原体的培养特性和防治原则，立克次体流行病学和防治。
教学重点及难点
重点 ： 1、支原体、支原体、立克次体的概念与特征
2、支原体、支原体、立克次体的主要生物学性状
3、支原体、支原体、立克次体的微生物学检验
难点： 支原体、支原体、立克次体的微生物学检验。
教法与
学法
讲授法
课型
理论课
教学手段
多媒体
教学
内容
与
时间
分配
衣原体:（1）衣原体概述。（10min）
（2）主要病原性衣原体致病性和微生物学检验。（20min）
立克次体:（1）立克次体概述。（5min）
（2）主要病原性立克次氏的传播方式与致病特点、微生物学检查。（25min）
支原体：（1）概述。（5min）
（2）主要病原性支原体的致病作用和微生物学检查，其他支原体的致病作用。（25min）
总结 （10min）
复习
思考题

什么叫支原体、支原体、立克次体？各有哪些特征？

参考资料
1、张卓然主编 《临床微生物学与微生物检验》人卫出版社 第3版 2006.11
2、倪语星主编 《临床微生物学与检验》 人卫出版社 第4版， 2007年
3、李凡主编 《医学微生物学》 人卫出版社 第7版 2008.1
自评

本次课内容较多，概念之间容易混淆，在讲课过程中特别注意进行各类微生物之间的横向比较，做到重点突出，条理清楚。

衣原体、支原体、立克次体

第二十六章 衣原体及检验

第一节 概 述
一、衣原体的概念和特征

衣原体（chlamydia）是一类能通过细菌滤器，严格活细胞内寄生，有独特发育周期的原核细胞型微生物。
共同特征：
①体积大于病毒，约250～500nm，在光学显微镜下可以查见，革兰染色阴性，圆形或椭圆形。
②含有DNA和RNA。
③具有细胞壁，但无肽聚糖，只含微量的胞壁酸。
④对多种抗生素敏感。
⑤具有一些酶类但不够完善，这些酶缺乏产生代谢能量的作用，要由宿主细胞提供，故专性细胞内寄生。能在鸡胚卵黄囊及多种细胞中生长繁殖。
⑥有独特发育周期，仅在活细胞内以二分裂方式繁殖。
分布： 广泛寄生于人类、鸟类及哺乳动物。
致病种类： 沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体

二、生物学性状
（一）形态：在细胞内生长繁殖，具有独特的发育周期：
1 .原体：
球形，椭圆形，小而致密，0.2-0.4um，光镜下勉强可见；Giemsa染色呈紫色。为成熟的衣原体，具有强的感染性，无繁殖能力。
2.始体：
由原体侵入细胞，在空泡发育而成。圆形或椭圆形，体大而疏松，0.5-1.0um，光镜可见，Giemsa染色呈红色，为衣原体的繁殖体，无感染性，以二分裂增殖，在空泡内发育成许多子代的原体。
成熟的子代原体从破裂的细胞中释放出来，再感染新的易感细胞，开始新的发育周期，每一周期约需48-72小时。
3、包涵体：
衣原体在易感细胞内增殖所形成的网状体和子代原体的空泡，经染色后可在光镜下看到。称为包涵体。经Giemsa染色后呈紫蓝色。碘染色呈褐色。具有鉴别意义。
（二）培养特性：
专性活细胞内寄生，多数能在6-8日龄鸡胚卵黄囊中生长繁殖，并可在卵黄囊中找到包涵体和原体。
有些可感染小鼠，如鹦鹉热衣原体等。
可在某些原代或传代细胞株中生长，如Hele-299等，并比鸡胚更敏感。
（三）抵抗力：
耐冷怕热，60 ℃10min 可失去感染性，-70℃可保存数年；对消毒剂敏感；对利福平、四环素、红霉素、磺胺药敏感。
(四)抗原构造与分型
1、属特异性抗原：为细胞壁上的脂多糖，但不同于细菌。
2、种特异性抗原：为衣原体的主要外膜蛋白（MOMP）,可以用补体结合、中和实验测出以鉴别不同的衣原体。
3、型特性异抗原：也存在于MOMP，为蛋白质，可对衣原体分型。

第二节 主要致病性衣原体
一、沙眼衣原体
1956年，由汤飞凡首次用鸡胚培养分离到。
分三个亚种：
沙眼生物亚种沙眼生物变种有A、B、Ba、C、D、Da、E-I、Ia、J、K等14个血清型 ；
性病淋巴肉芽肿生物亚种有L1、L2、L2a、L3四个血清 ；
鼠生物亚种。
（一）生物学性状：
可在细胞浆中形成包涵体（由密集的原体和始体组成）包涵体可呈散在型、帽型、桑椹型或填塞型 Giemsa染色后呈紫色。
（二）致病性
所致疾病
（1）沙眼：主要由沙眼生物变种的A、B、Ba、C型引起，通过眼—眼及眼—手—眼传播。沙眼衣原体感染结膜上皮细胞并在其中繁殖，在胞浆中可形成散在型、帽型、桑椹型或填塞型包涵体（彩图19），主要表现为滤泡，乳头增殖，血管翳和瘢痕形成。由于反复发作，使瘢痕加剧，损伤角膜变混浊，最终可失眼。
（2）包涵体结膜炎：由沙眼生物变种D-K血清型引起。可经性接触，手—眼或间接接触而感染。新生儿可经产道感染引起化脓性结膜炎（也称包涵体性脓漏眼）。不侵犯角膜。
（3）泌尿生殖道感染：经性接触传播，主要由D-K型沙眼生物变种引起，是性病的主要病原。还可引起尿道炎、阴道炎、盆腔炎等。如输卵管炎反复发作，可导致不孕症和宫外孕。

（4）性病淋巴芽肿（lymphongranuloma venereum, LGV）：由；L1、L2、L2a、L3四个血清型引起。主要通过性接触传播，是一种性病。外阴部可形成溃疡，还可侵犯腹股沟淋巴结，也可累及会阴、肛门、直肠及盆腔淋巴结，发生化脓性炎症和慢性肉芽肿。

二、鹦鹉热衣原体
引起呼吸道感染，鹦鹉热原为野生鸟类及家禽的自然感染，也可经呼吸道传给人，发生呼吸道感染和肺炎。

三、肺炎衣原体
只有一个血清型，1965年从台湾一小学生眼结膜分离出一株称TW-183；1983年又从美国的大学生的急性呼吸道感染者的咽喉部分离出另一株称AR-39,将这两株的字头合并，称作TWAR株。
致病性：引起急性呼吸道感染。
寄生于人，是人类重要的呼吸道病原体，经呼吸道感染。可引起肺炎、支气管炎、咽炎。
世界各地肺炎衣原体感染非常广泛，成人体内的抗体阳性率可达50%，约5-10%的成人肺炎是由肺炎衣原体引起。
近年，还发现TWAR株慢性感染与冠状动脉硬化和心脏病的发生有关。
三种衣原体主要特性比较。

第三节 衣原体的微生物学检验
一、标本采集：
1、沙眼、包涵体结膜炎：用棉拭在眼穹隆部、眼结膜上涂擦，或用无菌小刀刮取上皮细胞；
2、泌尿生殖道感染：取泌尿生殖道拭子、宫颈刮片、或精液等；
3、性病淋巴肉芽肿：抽取淋巴结脓肿脓液，采集血清做抗体检测；
4、鹦鹉热、和肺炎衣原体感染：可取痰、咽拭子、血清。
二、检验程序
三、检验方法及鉴定
1、直接涂片镜检：沙眼急性期可在结膜病灶作刮片，用Giemsa染色直接镜检或免疫荧光检查，观察上皮细胞浆内有无特殊包涵体，查见有诊断价值。
2、分离培养：
（1）鸡胚卵黄囊接种法：7日龄鸡胚，标本先用抗生素处理。
（2）细胞培养法：经X线照射的McCoy细胞和Hela-299细胞。
（3）小鼠接种：用于鹦鹉热衣原体的分离，可用：腹腔、脑内、鼻腔接种。
3、免疫学诊断：
查抗原和抗体，目前均有相应试剂盒供应。
(1) 抗体检测：补体结合试验、微量免疫荧光法等
(2) 抗原检测：免疫荧光染色、金标法、酶标法等
(3) 核酸探针或PCR技术作用核酸检测，其敏感性、特异性更优。

第二十七章 立克次体及检验

概念：
立克次体（Rickettsia）是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，在形态结构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似：
具有细胞壁；以二分裂方式繁殖；含有RNA和DNA两种核酸；由于酶系不完整需在活细胞内寄生；对多种抗生素敏感等。

共同特点 ：
①大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出疹性疾病；
②以节肢动物为传播媒介或为储存宿主；
③大小介于细菌与病毒之间，光镜下呈多形态性，主要为微，杆状或球杆状，革兰阴性；
④除了少数外全是专性活细胞内寄生；
⑤菌体内同时含有DNA和 RNA两类核酸；
⑥以二分裂方式进行繁殖；
⑦对抗生素敏感。
对人类致病的立克次体科包括立克次体属、柯克斯体属和罗沙利马体属等三个属。立克次体属又分成三个生物群：斑疹伤寒群、斑点热群与恙虫病群。

第一节　概 述
一、生物学性状
（一）形态染色与结构
1、形态：多形态，球杆状或杆状，0.3～0.6×0.8～2.0um。在感染细胞内，常聚集成致密团块状，也可成单或成双排列。
不同立克次体在细胞内的分布不同，可供初步识别。如普氏立克次体常散在于胞质中，恙虫病立克次体在胞质近核旁，而斑点热群立克次体则在胞质和核内均可发现。　
革兰氏染色阴性，但一般着色不明显，因此常用Giemnez、Giemsa或Macchiavello法染色，其中以Gimenez法最好。该法着染后，除恙虫病立克次体呈暗红色外，其他立克次体均呈鲜红色。Giemsa法和Macchiavello法分别将立克次体染成紫或蓝色和红色。
2、结构：与革兰氏阴性杆菌非常相似。用电子显微镜观察：
最外层为由多糖组成的粘液层，有粘附宿主细胞及抗吞噬作用。其内为微荚膜或称外包膜，由多糖或脂多糖组成。
细胞壁 包括外膜（磷脂双分子层）、肽聚糖及蛋白脂类三层。有与细菌内毒素性质相似的脂多糖复合物，但脂类含量比一般细菌高得多。胞浆膜 为双层类脂，主要由磷脂组成。胞质内有核糖体（由30s和50s两个亚基组成）。

（二）培养特性
常用的培养方法有
1、动物接种： 多种病原性立克次体能在豚鼠、小鼠等动物体内有不同程度的繁殖。在豚鼠睾丸内保存的立克次能保持致病力和抗原性不变。
2、鸡胚接种： 立克次体还能在鸡胚卵黄囊中繁殖，常用作制备抗原或疫苗的材料。
3、细胞培养： 常用的细胞培养系统有敏感动物的骨髓细胞、血液单核细胞和中性粒细胞等，一般不产生细胞病变。以32～35℃孵育最为适宜。

（三）抗原结构
立克次体有两种主要抗原：
一种为可溶性（醚类）抗原，耐热，与细胞壁表面的粘液层有关，为群特异性抗原。另一种为颗粒（外膜）性抗原，不耐热，与 细胞壁成份有关，为种特异性抗原。
　　在斑疹伤寒群，群特异性抗原在普氏、莫氏及加拿大立克次体中均存在，与其他属的立克次体很少交叉或不交叉，而种特异性蛋白抗原在上述三个种间互不交叉。
恙虫病群中只有恙虫病立克次体一个种，根据恙虫病立克次体种特异性抗原性的差异，可分为若干血清型。　
立克次体具有与变形杆菌某些X株的菌体抗原（O）共同的耐热多糖类抗原，临床上常用以代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，作为人或动物血清中相关抗体的检查。这种交叉凝集试验称为外斐反应（Weii-Felix reaction），作为辅助诊断。

(四)抵抗力
除贝钠(Q热)柯克斯体外,立克次体抵抗力较弱。56℃30分钟死亡；室温放置数小时即可丧失活力。对低温及干燥的抵抗力强，在干燥虱粪中能存活数月。对一般消毒剂敏感，对四环素和氯霉素敏感。磺胺类药物不仅不能抑制反而促进立克次体的生长、繁殖。

二、致病性与免疫性
1、致病物质
有两种，一种为内毒素，由脂多糖组成；另一种为磷脂酶A，可分解脂膜而溶解细胞，导致宿主细胞中毒。
2、传播媒介
是节肢动物，如虱、蚤、蜱、螨等。虱、蚤的传播方式是含大量病原体的粪便在叮咬处经搔抓皮损处侵入人体；蜱、螨传播则是由叮咬处直接注入体内。
3、致病性
进入人体后，立克次体首先侵入局部淋巴组织或小血管内皮细胞内，即经过吸附细胞膜上受体而被吞入胞内，再由磷脂酶A溶解吞噬体膜的甘油酸而进入胞质，随后分裂繁殖，导致细胞肿胀、中毒，出现血管炎症，管腔堵塞而形成血栓、组织坏死。立克次体也能进入血流而扩散，到达皮肤、肝、脾、肾等处而出现毒血症症状。立克次体还能直接破坏血管内皮细胞，使透性增加、血容量下降和水肿。另外，血管活性物质的激活可加剧血管扩张，导致血压降低，休克、DIC等。
4、免疫性
立克次体是严格细胞内寄生的病原体，其抗感染免疫是以细胞免疫为主，体液免疫为辅。病后一般能获得较强的免疫性。感染后产生的特异性群和种抗体有中和毒性物质和促进吞噬的作用。特异性细胞因子有增强巨噬细胞杀灭胞内立克次体的作用。

第二节　主要病原性立克次体

一、斑疹伤寒立克次体

（一）普氏立克次体

是流行性斑疹伤寒(又称虱传斑疹伤寒)的病原体。
病人是惟一的传染源，体虱是主要传播媒介，而非储存宿主。
传播方式为虱-人-虱，体虱仅是传染媒介。

（二）莫氏立克次体
n
地方性斑疹伤寒(又称鼠型斑疹伤寒)的病原体。啮齿类动物是储存宿主，传播媒介是鼠蚤或鼠虱。
n 鼠蚤叮咬人体时，常排粪于皮肤上，斑疹伤寒立克次体从抓破的伤口进入人体。若有人虱寄生，可通过人虱为传播媒介，继发性地在人群中传播。
[致病物质]
n 有两种，其一是内毒素，主要成分为脂多糖(LPS)；其二为磷脂酶A,能损伤宿主细胞膜及溶解胞内吞噬体膜，以利于病原体穿入宿主细胞并在其中生长。
n 普氏和莫氏立克次体所致的斑疹伤寒症状相似，以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性器官损伤。

[微生物特性]
（1）. 比细菌小，呈多形态性，在感染细胞内聚 集成团,分布在胞质内, Gimenez法染色后呈红色，外表含有微荚膜结构。
（2）. 必须在真核细胞内才能生长繁殖，培养时需要C02。通常采用5-9日龄鸡胚作卵黄囊接种，于32℃-35℃孵育4～13d内死亡，鸡胚死亡时间与接种剂量大小呈直接相关。 普氏和莫氏立克次体能在多种单层细胞上生长繁殖。豚鼠可作立克次体的初代分离。
（3）.有群特异性和种特异性两种抗原。大部分立克次体与普通变形杆菌X菌株的菌体耐热多糖抗原有共同的抗原性，故可用这些菌株代替立克次体抗原进行凝集反应去检测抗体，这种交叉凝集试验被称为外斐反应，可供辅助诊断。

[微生物检验]
1.标本采集
(1)病人血液标本：发热期均有立克次体血症，
在急性期较易检出立克次体。争取在用抗生素前采血，立即床侧接种。
(2)活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心瓣膜等标本。
2.标本直接检查
(1)免疫荧光检测 用于脏器检查。制备标本片薄而均匀，组织结构清晰，固定后用荧光抗体染色, 常见脾、肺及心瓣膜中有立克次体，也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。
(2)核酸检测 PCR敏感性高，所需样品量只需ELISA实验的1／5。以编码17kD蛋白的基因和编码普氏和莫氏立克次体169kD蛋白的基因作为扩增靶区。
3．分离培养
(1)动物接种
选用健康雄性豚鼠接种以便观察阴囊肿胀现象。每日测体温，至40℃发热时采血或脏器悬液、接种鸡胚卵黄囊或细胞培养以分离立克次体；
感染莫氏立克次体豚鼠在发热1—2日内出现阴囊红肿，解剖可见腹股沟淋巴结肿大、充血、脾大2-3倍，有腹水；有阴囊反应者，睾丸有小出血点，鞘膜充血并有浆液性渗出物等。鞘膜涂片可查到立克次体。
(2)鉴定
n 用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵黄囊、细胞培养物中的特异性抗原以已知抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。必要时用补体结合试验、微量凝集试验等，作群和种的鉴定。
4．抗体检测
立克次体病常用的血清学诊断方法除外斐反应、间接免疫荧光(IFA )试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)外，还有补体结合(CF)试验、微量凝集(MA)试验、间接血凝(IHA)试验、胶乳凝集(LA)试验等 。
外斐反应
除Q热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴性外，其他为阳性。患者OX凝集素上升较晚，在病程2周左右方出现阳性，病程中双份血清试验，若效价有4倍增长，方有诊断意义。

二、恙虫病立克次体
又名东方立克次体是恙虫病的病原体，由恙螨叮咬侵入人体，对人体致病性很强，释放的毒素样物质是主要致病因素，引起发热皮疹全身中毒症状，以及全身淋巴结肿大及各组织器官的血管炎病变。虫咬处溃疡形成黑色焦痂，周围有红晕等为其特征。为自然疫源性疾病。

[微生物特性]
1、形态：
具有多形性，但以短杆状为常见。G-,姬姆萨染色呈紫红色, Gimenez染色呈暗红色，背景为绿色。可以鉴别恙虫病立克次体和其他立克次体。分布在细胞质内，密集于细胞核旁。细胞内寄生。
2、培养特性
(1)动物接种：小鼠最敏感，刮取腹膜上的粘液涂片检查，可见细胞质内有大量立克次体，尤以腹膜上皮细胞内多见，常密集于细胞核旁。
(2)细胞培养：恙虫病立克次体可以在多种细胞内生长、繁殖，多采用Vero、L929细胞进行培养。培养32℃为宜，繁殖缓慢，用Vero细胞培养8—9d，在细胞质内生长繁殖，在细胞核旁高度密集，但不侵入细胞核。
3．抗原成分
n 恙虫病立克次体具有耐热性多糖抗原和特异性抗原。
n 恙虫病立克次体和变形杆菌OXk株有共同的抗原成分，在Weil-Felex反应中，血清与OX，抗原发生凝集而不与OX19、OX2发生凝集。
[微生物检验]
(1)抗原检测：ELISA间接法是检测标本的特异性抗原或抗体的最常用方法。
(2)PCR：可检出20ng恙虫病立克次体DNA；套式PCR法可检出200pg，是目前最为快速、特异、敏感的实验室诊断方法，可用于急性期患者的早期诊断。
(3)分离培养
接种小鼠分离病原。将标本接种腹腔O．5ml，一般多在7～18天死亡，感染小鼠有明显症状，濒死前解剖，可见皮下淋巴结肿大充血，脾肿大，有粘稠的腹腔渗出液，以Giemsa染色镜检，在靠近细胞核旁边可见成堆排列的立克次体。也可接种Vero细胞、L929细胞进行立克次体分离培养。细胞培养10—15天，取细胞涂片，Giemsa染色镜检。
(4)抗体检测
外斐试验：血清抗体OXk效价达l：160以上有意义，病程中双份或多份血清试验，若效价有4倍增高，有诊断意义。外斐试验特异性、敏感性低，容易造成误诊或漏诊，不应作为恙虫病的诊断方法。
免疫荧光试验：快速、敏感、特异，可分别检测患者血清中的抗恙虫病立克次体lgG、IgM抗体，效价在1：80以上有诊断意义。双份血清有4倍或以上增长可以确诊。

第二十八章 支原体及检验
（mycoplasma）
支原体是一类缺乏细细胞壁、呈高度多形性，能通过除菌滤器，并能在无生命培养基中独立生长繁殖的最小原核细胞型微生物。因其能形成分枝的长丝，故1967年正式命名。
分类： 1、支原体科：需外源性胆固醇。
2、无胆甾原体科：不需外源性胆固醇。
3、螺原体科：需外源性胆固醇。
支原体科共64个种，对人致病的有肺炎支原体、人型支原体、生殖支原体等。

第一节 概 述
一、生物学性状
1、形态与染色：
体积微小，直径为0.2～0.3μm，长1～10μm，可通过一般除菌滤器。缺乏细胞壁、表现高度多形性，呈球形、杆状、长丝、分支与颗粒等形态。革兰法染色为阴性，但着色较难。一般以姬姆萨法染色较佳，呈淡紫色。
电镜下可见其胞膜由三层膜组成，内、外层为蛋白质及糖类，中层为脂质。脂质中胆固醇约占36%，故支原体对作用于胆固醇的抗菌物质如二性霉素B、皂素、毛地黄苷等敏感。有的支原体胞膜外还产生一种由多糖组成的荚膜，有毒力，是支原体的一种致病因素。

2、培养特性
生长所需PH为7.8～8.0，低于7.0则死亡。但溶脲脲原体最适Ph为6.0～6.5，在22～41℃中均能生长，但以36～37℃最适宜。
支原体营养要求比一般细菌高。在含有牛心浸液、20%血清（提供胆固醇）、酵母浸膏的培养基中，生长缓慢，2～3天后才形成油煎荷包蛋样微小菌落（彩图17），核心较厚，向下长入培养基，周边为一层薄薄的透明颗粒区。
肺炎支原体的菌落较大，直径为100-150um;
溶脲脲原体的菌落最小，仅10-40um，故原称T株（tiny strain）。
支原体在鸡胚或细胞培养中极易生长。支原体的繁殖方式多样，以二分裂繁殖为主，也有出芽、分支或球体延伸，分节段裂成许多球状与短杆状的颗粒。
3、生化反应
支原体可根据是否利用葡萄糖、水解精氨酸和尿素来进行鉴别。
4、抗原构造
支原体细胞膜上的抗原结构由蛋白质和糖脂组成。细胞膜外层蛋白质是支原体的主要型特异性抗原，具有免疫原性，在鉴定支原体时有重要意义。支原体的抗原常用生长抑制试验（GIT）与代谢制试验（MIT）鉴定，这两种方法可将支原体分成若干血清型，如溶脲脲原体可分为16型。
5、抵抗力
抵抗力略比一般细菌弱，55℃5～15min即死亡。耐冷，-70℃或液氮可长期存活。对一般消毒剂比细菌敏感。因缺乏细胞壁，对青霉素、头孢霉等等作用于细胞壁的抗生素不敏感，常用于检材以抑制杂菌生长有利于支原体的分离。对阻碍蛋白质合成的强力霉素、氯霉素、红霉素及螺旋霉素等敏感。

二、致病性
大多不致病，少数主要通过其顶端结构与宿主细胞上的受体结合而粘附于细胞，从细胞获得脂质和胆固醇作为养料，并产生毒性代谢产物引起细胞损伤。

第二节 主要病原性支原体
一、肺炎支原体
肺炎支原体（M.pneumoniae）主要引起人的原发性非典型性肺炎(Primary atypical pneumonia)。
1、形态培养
多呈球形或丝状，长约0.2-0.5um,革兰阴性， Giemsa染色呈淡紫色，初次分离，培养基中须加入足量的血清、新鲜酵母液，培养10天，长出油煎蛋样菌落。
发酵葡萄糖，还原美兰，有氧情况下可使无色的氯化三笨四氮唑（TTC）还原为红色，从而使菌落呈粉红色或深红色；不分解尿素和精氨酸，由此可做鉴定依据。
2、致病性
一般认为是外源性感染，传染源是病人或带菌者。常发生于夏末秋初，青少年多见。主要通过咳嗽，飞沫经呼吸道感染。
临床表现 头痛、发热、咳嗽、胸痛、淋巴结肿大等，X线胸部透视见肺部明显浸润。此外，还可引起咽喉炎、鼻炎、中耳炎、气管炎和支气管炎。感染支原体后呼吸道粘膜产生的SigA对再感染有一定防御作用，但免疫力不强，可重复感染。

二、泌尿生殖道感染的支原体

主要有溶脲脲原体、人型支原体和生殖支原体。被列为性传播疾病的病原体。
1.溶脲脲原体：
在培养基上形成的菌落极小，直径15～40μm，故又称T株（tiny strain），可分解尿素。
与沙眼衣原体一起同是人类非淋菌性尿道炎的病原体（约占 90% ），主要经性接触传播，潜伏期为1-3周。典型症状为尿道内痒，伴尿急、排尿不畅，轻微尿痛，少数病人有脓性分泌物；也可引起不育症，睾丸附睾丸炎、慢性前列腺炎；女性可引起阴道炎、盆腔炎、输卵管炎、宫颈炎、，流产、早产、死胎和低体重胎儿及新生儿呼吸道感染，不孕症。
2.人型支原体：
除引起人非淋菌性尿道炎外，还可慢性前列腺炎、宫颈炎和盆腔炎
3 .生殖支原体：
形态多呈烧瓶样，有一明显的颈部。致病性与前相同。

第三节 微生物学检验

一、标本采集：
肺炎可采咽部分泌物、痰或胸水
泌尿生殖道感染：采尿道分泌物、前列腺液、阴道或宫颈分泌物等。
二、检验方法及鉴定
因其无固定形态，染色结果难与其他杂物区别，故支原体的诊断主要依靠分离培养、生化反应和血清学试验。
（一）肺炎衣原体
1、分离培养：
常用（Hayflick）培养基：以牛心浸液为基础，另加小牛血清、酵母浸液、蛋白胨、NaCl、葡萄糖、指示剂、抑制剂等。
液体-固体二步培养法：①将标本种于液体（Hayflick）培养基，每日、观察培基指示剂颜色的变化（因分解葡萄糖产酸），初次分离约须21天才使指示剂变色；②取0.1的液体转种至固体培养基，二氧化碳培养，从接种第一周之后，每隔一日取出观察一次，（初次分离约需2~4周），两周后用高倍镜检查有无油滴状菌落，可初步诊断。
鉴定：溶血试验、生长抑制实验、氯化三笨四氮唑（TTC）试验、红细胞吸附试验。
2.血清学试验
特异性抗原、抗体的检测（少用）
非特异性血清学试验：
冷凝集实验：人感染肺炎支原体后，血清中可产生一种冷凝集素（即IgM型的自身抗体）,可与自身红细胞或型人红细胞在4℃条件下结合，效价大于1：64为阳性反应，可考虑肺炎支原体感染。
MG链球菌凝集试验：感染者血清中可产生能凝集甲型链球菌MG株的抗体。而病毒性肺炎则无此抗体，故可鉴别
3. PCR
（二）溶脲脲原体：
培养法，将标本接种于含尿素和酚红指示剂的培养基中，8~12小时可发生颜色改变，72小时不变色者为阴性。人型支原体较慢，2~3天才可变色，5天不变为阴性。

小结：本次课学习了衣原体、支原体、立克次体的概念及其特征，并介绍了衣原体、支原体、立克次体的生物学性状、主要病原性衣原体、支原体、立克次体的致病性及其检验方法，注意衣原体、支原体、立克次体与细菌的鉴别，它们同为原核细胞型微生物，有许多相似之处，但衣原体、立克次体为专性细胞内寄生，衣原体有独特的发育周期，支原体无细胞壁。