应用Spurr树脂包埋剂结合多次离心技术制备血液电镜标本.pdf

沈阳隈学院学报j o u r n a lo fS h e n y a n gM e d i c a l C o H e g e 第6 卷第1技术与方法期2 0 0 4 年3 月应用S p u r r 树脂包埋剂结合多次离心技术制备血液电镜标本杨慧(沈阳医学院图书馆辽j j 沈阳1 1 0 0 3 4)【关键词】目的：探讨s p u r r 树脂包埋荆是否适合制备血样电镜样品。方法：多决离心技术制备血样并对原始的S p u n 配方进行盘良，改变增塑剂乙二醇二甘油醚的量，调节包埋块的硬度，使其适合制备体液样品的电镜超薄切片，结果：超薄切片上红、白细胞排列紧密，每个视野可见多十细胞、与常规的E p o l l 树脂包埋剂相比，明显增加了可供观察的信息量。细胞的蛄构清晰，未见明显的聚合损伤以噩人工假象等。结论：S p u r r 树脂包埋荆是制备血样电镜标本的良好包埋荆。【关键词】s p u 仃树脂；包埋荆；透射电镜【中周分类号】R 3 2 9 3 3；3 1 8 0 8【文献标识码】A【文章编号】1 0 0 8 2 3 4 4(2 0 0 4)O I 一0 0 3 5 0 2A p p l i c a t i o no fS p u r rR e s i nE m b e d d i n gM e d i u mw i t hM u l t i c e n t r i f u g a t i o nf o rM a k i n gt h eE l e c t r o nM i c r o s c o p i cS p e c i m e no fB l o o dY A N CH u im b o r a t o t yo fS h e n y a n gM M i c a lC o l l e g e，S h c n y a n g】1 0 0 3 4，C h i n a【A b s t r a c t】O b j e c t i v e：T oe x p l o r ew h e t h e rS p u r tr e s i ne m b e d d i n gm e d d i u mi ss u i t a b l ef o rm a k i n gt h ee l e c t r o nm i c 1 1 0 s e o p i c8 p e c i m e no fb l o o dM e t h o d s：M u l t i e e n t r i f o g a t i o nw a nu s e df o rp r e p a r i n gb l o o ds p e c i m e n，a n dt h eo r i g i n a lS p u r tp r e s c r i p t i o nw a sm o d i f i e d T h es o l i d i t yo fe m b e d d i n gs p e c i m e nW a ga d j u s t e d，i no r d e rt om a k ei ts u i t a b l ef o rp r e p a r i n gu l t r a t 1 i ns e c t i o n s0 fb l o o d b yc h a n g i n g t h ev o l u m eo f D E R7 3 6R e*I I I t s：O n t h eu h r a t h i ns e c t i o n，t 上l er e da n dw h i t eb l o o dc e l l sw e r ec l。s et o g e t h e r a n dm a n ye e n sc o u l db es e e ni ne a c hf i e l do fv i s i o nC o m p a r e dw i t ht h eo r d i n a r yE p o nr e s i ne m b e d d i n gm e d i u m，t h eo b s e r v i n gi n f o r m a t i o nW a Si n c r e a s e do b v i o u s l yi nS p u r rm e d i u m I na d d i t i o n，t h ec e l l u l a rs t r a e t u r ew*c l e a ra r i df r oe m b e d d i n gd a m a g ea n da r t i f i c i a lp s u d o p h e n o m e n o nw e r ef o u n di nS p u l Te m b e d d e ds p e c h n e n C o n d u。s i o n：S D u r e s i ni s8g o o de m b e d d i n gm e d i u mf o rm a k i n gt h ed e c t m nm i c r o s c o p i cs p e c i m e no fb l o o d I K e yw o r d s】S p u n r e s i n；e m b e d d i n gm e d i u m；t r a n s m i s s i o nd e c t m nm i e r o s e o p es p u r r 树脂包埋剂是一种环氧树脂包埋剂”。由于这种包埋剂具有粘度低、易浸透的特点，被广泛应用于制备植物根、茎、果实的透射电镜超薄切片领域。在制备体液如血液和精液等电镜切片的实际科研工作中，我们发现常规的E p o n 包埋剂粘度大，样品在E p o n 包埋剂内离心效果差导致细胞排列松散，不利于在电镜下观察。因此，我们尝试应用s p u r r树脂制备血液的电镜样品，利用其低粘度的特点，可制备出细胞排列密集的体液电镜超薄切片。1 材料与方法1 1s p u”树脂包埋剂【收稿日期】2 0 0 3 1 2 1 61 1，ls p u r r 包埋剂由以下四种成分构成二氧环己烷(E R L-4 2 0 6)：为包埋剂中的主要树脂成分。末端的两个环氧基在聚合时能打开并互相形成网状交织结构；乙二醇二甘油醚(D E R7 3 6)：为增塑荆，能使包埋块的硬度不至于过大并具有一定韧性，利于用超薄切片机制备超薄切片；琥珀酸酐(N S A)：为硬化剂。其分子中的酸酐可与羟基结合，在分子之间形成横桥，从而保证包埋块的硬度；二甲胺基乙醇(S-1)：为催化剂。能加速打开二氧环己烷树脂的两个环氧基，加快聚合反应。1 1 2S p u r r 包埋剂配方对s p u r r 等人推荐的原始配方进行改良o。通过改变增塑剂乙=醇二甘油醚的量，调节包埋块的硬度，使其适合制备体液样 万方数据沈阳医学院学报品的电镜超薄切片。配方为：二氧环已烷(E R I，4 2 0 6)25g、乙_ 二醇二甘油醚(D E R7 3 6)2 0g、琥珀酸酐(N S A)6 5g、二甲胺基乙醇(S-1)01 5g。四组份混台在一个清洁的烧杯内并搅拌均匀待用。12 超簿切片制备I2 1 血样血液样品取自5 名临床体检健康男性。由盯素抗凝 I l l，4 冰箱内保存。按常规方法用离心机离心血样，分别取白细胞和红细胞置于离心管内。12 2 吲定向含有白细胞和红细胞的离心管内加入25 的戊二醛液，轻轻吹打后离心。轻取戊：醛液，加人磷酸缓冲液(P B S)，并吹打离心漂洗3次，每次5m i n。吸出P B S 加入1 锇酸，吹打离心后固定2 0r a i n。P B S 漂洗3 次，每次5r a i n。I 2 3 脱水按常规脱水方法进行。3 0、5 0、7 0、8 0、9 0 系列酒精离心脱水各5m j n。J 0 0 丙酮离心脱水3 次，每次5r a i n。1 24 包埋将s p u”树脂包埋剂和常规的E p o n树脂包埋剂分别加入含有脱水后的白细胞和红细胞的离心管内。离心1 5r a i n。放人温箱内聚合：3 7“C1 21 1 4 5 1 2h、6 0 2 4h。125 超薄鲫片取冉拜修整包埋块，A O 切片机进行超薄切片，厚度8 0n m。在J E M 一1 2 0 0 E X 透射电镜下观察超薄切片。2 结果电镜下可见s p u r r 树脂包埋剂包埋制备的超薄切片上红细胞或白细胞排列紧密，每个视野可见许多个细胞。1 一j 时，细胞的结构清晰，红细胞胞质呈均质状，未见细胞器。白细胞细胞核内常、异染色质分辨清晰，胞质内颗粒及各种细胞器均易辨认。E p o n 树脂包埋剂包埋制备的超薄切片上可见各种血细胞的超微结构保存完好，白细胞细胞核和细胞器结构清晰。这一结果与s p u”树脂包埋剂包埋制备的超薄切片观察结果一致。但是，E p o n 树脂包埋的超薄切片上血细胞排列比较稀疏，在一个视野内可供观察的细胞数量少。此外，由于在制样过程中未对血细胞进行E p o n 包埋剂浸透，因此，在低i。(I：接2 9 页)要与引起婴儿期失盐的其它疾病相鉴别。如先天性肥厚性幽门狭窄，新生儿尤其是早产儿肾上腺皮质功能不成熟或获得性肾上腺皮质功能不全引起的暂叫性肾上腺皮质功能不全。治疗方面在纠正离子及酸碱平衡紊乱临床症状好转后，各型均需应用糖倍镜_ 卜经常可见细胞内外有空泡出现。3 讨论第6 卷与常规的E p o n 树脂包埋剂相比，s p u”树脂包埋刺包埋制备的超薄切片在一个视野内可供观察的细胞数量多，明显地增加了可供观察的信息量。此外，S p u r r 树脂包埋剂还克服了由于E p o n 树脂浓度火不利于浸透导致超薄切片空泡多的弱点。卒实验结果还表明应用s p u r r 树脂包埋剂包埋制备的超薄切片与E p o n 树脂包埋荆相比，在血细胞超微结构的保存方面具有相同的理想效果，未见明显的聚合损伤以及人工假象等。s p u r r 树脂包埋剂的主要成分乙烯基二氧环已烷(E R L 一1 2 0 6)本身粘度仅为7 8m P a s，渴合后的包埋剂粘度也只有6 0m P a s，但是目前普遍应用的E p o n 树脂包埋刺的粘度约为2 0 0m n 一”。由于S p u,，树脂具有低粘度易渗透的特点，有学者推荐其适合于制备植物等坚硬标本及培养细胞和免疫组化标本的电镜样品”4 1。本文则报道r 应_ L jS p u n 村脂包埋剂制备体液超薄切片并获得良好的效祟，扩大了s p u r r 包埋剂的应_ 范围。此外，由于S p u n 棚脂牯度低，渗透组织快，聚合时间短，叮仃于临床上某些材料的快速包埋，对临床病理快速电镜诊断也具有重大意义。【参考文献】1 A r l h u rRS p u n L o w v i a i e o s i t ye p o x yr o s i ne m b e d d i n gm M i u mf iJ re l“m mm i c r o s c o p y J J o u r n a lo fU n t r a s t r o c t u 他R e s e a H：h，1 9 6 9，8(3)：2 6 2 8 2 朱删霞生物学巾的电子显微镜技术 M 北京：人民u 吐出版社，1 9 8 33 0 3 s p e h n e rD 1)r i l l i e nR，P r o a m e rF e tdE m b e d d i n gi nS p u n sr e s i ni s8g o o dc h o i c ef o ri m m u n o l a b e l l i n ga f t e rf r e e T Ed r y i n g 龃s h o w nw i t hc h e m i c a l l yu n t l x e dd e n d r i t i cc e l l s J JM i c m s c，2 0 0 2，7(I)：1 4 4 B a r t hM O u l m iY E 1 1 I e n m i c hH，e ta 1 P r e e m b e d d i n gi m m u n o-g o l d l a b e l i n go fT U N E I，s t a i ne n a b l e se v a l u a f o no fD N As t r a n db r e a k sa n du l t r a s l D J e t u 矾Ja l t e r a t i o n si ni n d i v i d u Mc e i l so fn e u r o n a lt i s s u e J A e t aN e l l r o p a t h o l，2 0 0 2，1 0 4(6)：6 2 1 6 3 6皮质激素做替代治疗。失盐型还需应用盐皮质激素。【参考文献】皇议珍，黄德珉，官希古实用新生儿学 M 第3 版匕京：民1 叫出版社，i 9 9 0 8 5 3 8 6 0 万方数据应用Spurr树脂包埋剂结合多次离心技术制备血液电镜标本应用Spurr树脂包埋剂结合多次离心技术制备血液电镜标本作者：杨慧作者单位：沈阳医学院图书馆,辽宁,沈阳,110034刊名：沈阳医学院学报英文刊名：JOURNAL OF SHENYANG MEDICAL COLLEGE年，卷(期)：2004,6(1)被引用次数：2次 参考文献(4条)参考文献(4条)1.Arthur R;Spurr A Low-visicosity epoxy resin embedding medium for electron microscopy 1969(03)2.朱丽霞 生物学中的电子显微镜技术 19833.Spehner D;Drillien R;Proamer F Embedding in Spurrs resin is a good choice for immunolabellingafter freeze drying as shown with chemically unfixed dendritic cells外文期刊 2002(01)4.Barth M;Oulmi Y;Ehrenreich H Pre-embedding immunogold labeling of TUNEL stain enables evaluationof DNA strand breaks and ultrastrucmral alterations in individual cells of neuronal tissue外文期刊2002(06)本文读者也读过(10条)本文读者也读过(10条)1.李世丹.曹茂林 黑麦细胞融合的强化离心技术及遗传变异研究期刊论文-草业与畜牧2008(12)2.李霖.王如平.王义权.杜开河 蝮蛇外周血白细胞的电镜观察期刊论文-安徽师范大学学报(自然科学版)2001,24(4)3.俞静.林茂芳.牟海波.黄河.蔡真 抗CD47单抗对人树突状细胞的免疫调控作用及其机制探讨期刊论文-中国病理生理杂志2004,20(12)4.陶忠芬.蔡永国.杨仕明.可金星.黄文琪.肖桃元.房殿春 树突状细胞扫描电镜样本制备方法期刊论文-第三军医大学学报2005,27(12)5.官阳.阮幼冰.武忠弼.刘冰 白血病的电镜诊断期刊论文-电子显微学报2001,20(6)6.苑佳丽.刘瑞华.高旋.杨军.苑立波.Yuan Jiali.Liu Ruihua.Gao Xuan.Yang Jun.Yuan Libo 视网膜光学相干层析图像的预处理方法期刊论文-光学学报2007,27(3)7.汤莹.谢高明.雷长海.羊富光.于洋.许珊.范晓燕.杨勇骥.Tang Ying.Xie Gaoming.Lei Changhai.Yang Fuguang.Yu Yang.Xu Shan.Fan Xiaoyan.Yang Yongji 纳米二氧化钛颗粒对小鼠单核细胞超微结构的影响期刊论文-解剖学杂志2009,32(1)8.茹永新.刘津华.赵轼轩.齐淑玲.RU Yong-xin.LIU Jin-hua.ZHAO Shi-xuan.QI Shu-ling 81例急性单核细胞白血病电镜诊断分析期刊论文-白血病淋巴瘤2005,14(4)9.钟延丰.高晓明.王盛兰.谢志刚.马悦.方伟岗.邹万忠.李秀兰.张黔英.王薇.赵振东.顾江 传染性非典型肺炎病人外周血白细胞损伤的病理学研究期刊论文-中华医学杂志2003,83(24)10.申玉芹.孙新华.孟秀萍.郑义 牙龈卟啉单胞菌诱导人白细胞脱颗粒的体外观察期刊论文-中国老年学杂志2009,29(21)引证文献(2条)引证文献(2条)1.迟化昌.姬忠礼.孙冬梅 陶瓷滤管基体粉尘沉积状况SEM分析期刊论文-石油化工高等学校学报 2010(3)2.徐朝阳.周兆兵.张洋.王思群 原子力显微镜测量杨木细胞特征参数期刊论文-现代仪器 2009(5)引用本文格式：杨慧 应用Spurr树脂包埋剂结合多次离心技术制备血液电镜标本期刊论文-沈阳医学院学报2004(1)