商丘地区猪圆环2型与3型病毒混合感染情况监测与控制.pdf

为了解商丘地区圆环2 型与圆环3型病毒感染情况，2 0 2 2 年在屠宰环节分季度采集脾脏和肺脏样品，使用商品化试剂盒集中检测，以探究圆环2 型与圆环3型感染情况及二者混合感染情况。结果显示，本地屠宰企业生猪圆环2 型阳性率达到57.0 8%，圆环3型阳性率6.8 8%，二者混合感染率6.46%，圆环3型阳性样品中圆环2 型阳性比例为91.18%，春夏季节阳性率高于秋冬季节，母猪阳性率高于育肥猪。根据监测结果，商丘地区圆环2 型感染率高，带毒生产情况存在，圆环3型阳性率较低但威胁持续存在。通过对混合感染养殖场的追溯，有针对性地采取措施进行防控，兼顾预防和治疗，全面提高养殖场的生物安全水平，减少圆环病毒的发生和传播。关键词：圆环2 型病毒；圆环3型病毒；屠宰企业；荧光PCR检测中图分类号：S858.28文献标识码：B文章编号：10 0 4-50 9 0（2 0 2 3）15-0 0 2 9-0 3猪圆环病毒（PCV)是一种单链闭合环状DNA，是迄今作者简介：乔波（19 8 9.0 2），男，兽医师，预防兽医学硕士，商丘市动物检疫和疫病预防控制中心，主要从事动物疫病防控与流行病学调查工作。苗。疫苗接种必须要保证诱导充分的黏膜免疫以保护靶细胞（即肠道细胞），要求新生仔猪在出生时和整个哺乳期间保持高水平的保护性黏膜免疫。但是新生仔猪直接接种PECs疫苗有两个主要问题：母源抗体可能会干扰仔猪口服活疫苗诱导的保护；仔猪黏膜免疫未发育健全，实际抗体产生需要3w，而易受PEC感染的仔猪日龄很小，且急性病程较快。因此，被动乳源性免疫仍然是保护新生乳猪免受PEC等肠道病毒感染的最有希望和最有效的方法，目前多采用免疫母猪通过初乳/乳汁中的特异性sIgA抗体给仔猪提供被动免疫，sIgA抗体对蛋白水解酶具有一定的抗性,并且在中和肠黏膜中的PECs方面非常有效。TGEV的商品化疫苗对猪场中TGEV的暴发起到了关键的预防作用；随着PEDV灭活或减毒疫苗在我国的广泛使用，PED在全国范围内的传播得到了控制，直到2010年10 月，一种PEDV变异毒株的出现给养猪业造成了巨大的经济损失。哈尔滨维科生物技术开发公司和哈尔滨兽医研究所联合研发的TGEV-PEDV-PoRV三联活发现最小的脊椎动物病毒，具有较高的遗传变异性。常与其他病原微生物形成混合感染，如猪细小病毒(PPV）、猪呼吸与繁殖综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV)等。目前已发现的猪圆环病毒有4个基因型,猪圆环病毒疫苗可以使仔猪的被动免疫保护率提高到8 8%以上，对我国养猪场防控该类疫病具有重要意义。然而,PDCoV和SADS-CoV目前还没有开发出商品化的疫苗，因此，我们迫切需要建立新的疫苗开发平台和技术，而且更深人地了解PECs的复制和发病机制是开发新的和有效的疫苗来预防、控制和最终消除病毒的先决条件。3展展望除了TGEV外，变异的PEDV和新发的PDCoV和SADS-CoV被认为是新的冠状病毒,这些冠状病毒除了给我国养猪业造成巨大的经济损失外，有些还具有跨种传播的风险,因此,开展PECs的流行病学调查和深人的致病机制研究对人类和动物的健康具有重要的意义。PEC感染的防控重点是加强猪场内部和猪场之间的生物安全措施，加强疫苗接种，科学研究应着重发展和建立新的疫苗开发平台和技术，从根源上防控PECs。参考文献：（略）（收稿日期：2 0 2 3-0 6-2 7）2023年（第44卷）第15期30畜禽类（非草食动物）方向河南富牧書医上光调查报告DIAOCHABAOGAAO1型(PCV1)是最早发现并经过鉴定的猪圆环病毒，人工感染实验证实其一般不引起猪发病，但可刺激机体产生抗体，猪圆环病毒2 型(PCV2)在包括我国在内的多个国家流行，临床上表现为猪多种疫病综合征，造成损害较大的是断奶仔猪多系统衰竭综合征，猪圆环病毒3型(PCV3)在2 0 16 年被首次报道，被认为是引起母猪繁殖障碍和皮炎肾病问题的潜在病原体,与PCV2的核苷酸同源性仅48%，目前尚无有效的商品化疫苗，猪圆环病毒4型（PCV4)是在2 0 19 年在我国湖南省首次分离到，目前感染面不大，就我国而言，猪群中流行的主要是PCV2和PCV31-2。PCV主要侵袭胎儿心肌细胞、肝细胞和巨噬细胞，对仔猪和成年猪只感染巨噬细胞，从而引起免疫系统损伤，T淋巴细胞和B淋巴细胞数量下降，导致免疫抑制，降低其他一些疫苗的免疫效果,属于条件性致病病毒，当环境剧烈变化，生猪抵抗力变弱时，易发病或造成继发感染【3。商丘地处豫、鲁、苏、皖四省交界处，地势平坦，交通便利，生猪养殖量大，动物疫病防控压力大，辖区内屠宰企业多，生猪来源涉及周边地市与省份产品涉及江苏、重庆、福建等省市，具有一定代表性。该研究采集辖区内屠宰企业生产线生猪组织样品检测PCV2型与PCV3型感染情况，根据感染情况，追溯养殖环节感染场点，从而开展PCV防控。1材料与方法1.1样品采集与保存2022年采集商丘市辖区内2 1个屠宰企业生产线上生猪脾脏、肺脏组织（同1头猪组织样品混为1份）共48 0 份，冷冻保存。1.2主要检测试剂圆环2 型与3型荧光PCR检测试剂盒（生产批号：PCV2PCV320220521），购自哈尔滨元亨生物药业有限公司，磁珠法核酸提取试剂（生产批号：2 2 0 9 2 6 10 T052），购自西安天隆科技有限公司。1.3主要仪器设备生物安全柜、组织球磨仪，天隆NP968全自动核酸提取仪，天隆TL988荧光PCR仪。1.4方法将组织样品处理成黄豆大小组织块，用无菌PBS液冲洗后，置于1.5ml离心管中，加人灭菌钢珠研磨成组织悬液，反复冻融3次，8 0 0 0 r/min离心5min后取上清备用。处理后的样品使用同一批次的试剂盒，按照试剂盒说明书提取核酸，进行荧光PCR检测并记录结果。2结果与分析2.1总体情况荧光PCR检测结果显示，PCV2阳性率57.0 8%，PCV3阳性率6.8 8%，混合感染率6.46%，PCV3阳性的34份样品中有3份PCV2为阴性，即PCV3阳性样品中与PCV2混合感染比例为9 1.18%。2.2季节影响检测结果显示PCV的感染也存在一定的季节差异，其中一季度与四季度采样时间分别为春季和冬季温度较低，PCV2阳性率分别为47.50%和35.8 3%，PCV3阳性率分别为7.50%和3.33%。二季度和三季度采样时间为春末至夏季结束，温度较高,PCV2阳性率高于春季和冬季分别为64.17%和8 0.8 3%，PCV3阳性率也高于春冬两季，分别为6.67%和15.8 3%，详见表1。表12022年商丘市屠宰场生猪PCV2与PCV3感染情况样品病原检出率/%季度数量/份PCV2PCV3混合感染一季度12047.50%(57/120)2.50%(3/120)7.50%(3/120)二季度12064.17%(77/120)6.67%(8/120)5.00%(6/120)三季度12080.83%(97/120)15.83%(19/120)15.00%(18/120)四季度12035.83%(43/120)3.33%(4/120)3.33%(4/120)2.3种类差异由于辖区内母猪屠宰企业多且产能较大,在采样时偏重母猪屠宰企业，对7 个母猪屠宰企业采集组织样品2 0 0 份，对14个育肥猪屠宰企业采集组织样品2 8 0 份。结果显示，母猪PCV2阳性率为7 7.50%，圆环3型阳性率14.0 0%，明显高于育肥猪的42.50%和1.0 7%。这表明淘汰母猪PCV2带毒生产比例较育肥猪高35.0 0%，淘汰母猪由于饲养时间较育肥猪更长，隐性感染风险更高，其在场内垂直传播和水平传播的风险持续存在，一定程度上成为猪场圆环病毒无法实现净化的原因之一。相比之下，育肥猪生产周期为6 个月左右，存栏时间较后备母猪或经产母猪短，在母源抗体和使用疫苗的情况下,PCV2和PCV3感染率相对较低，详见表2。312023年（第44卷）第15期（收稿日期：2 0 2 3-0 6-2 6）畜禽类（非草食动物）方向河南书牧書医秀调查，报告DIAOCHABAAOGAO表22022年商丘市屠宰企业母猪与育肥猪PCV2与PCV3感染情况病原检出率/%屠宰场点样品类型数量数量/份PCV2PCV3混合感染母猪720077.50%(155/200)14.00%(28/200)12.50%(25/200)育肥猪1428042.50%(119/280)1.07%(3/280)1.07%(3/280)2.4养殖环节控制根据屠宰环节检测结果，对PCV2和PCV3混合感染的生猪进行追溯，其中某场建场5年，2 0 2 2 年月均存栏152 0头母猪猪场，下半年被动淘汰母猪56 1头，淘汰率36.9 1%，其中3胎和4胎母猪淘汰比例占57.39%，淘汰原因主要为子宫内膜炎和繁殖障碍。育肥猪4月龄左右出现渐进性消瘦，发病率约15%，死亡率约1%，兽医剖检可见全身淋巴结肿大，肺脏肿大。对该场母猪、育肥猪和仔猪进行抽检。结果显示，该场母猪和育肥猪PCV2与PCV3混合感染率分别为18.33%和16.6 7%。指导该场按照“增强免疫、抗病毒、抗继发感染”的原则，对母猪群开展PCV2型疫苗补免补防，间隔1个月连续免疫2 次，饲料中添加茯苓多糖散500g/吨，间隔15d，连续使用3次。育肥猪提前免疫，每吨饲料添加茯苓多糖散50 0 g、10%泰乐菌素+10%磺胺二甲嘧啶150 0 g和浓缩鱼肝油50 0 g，间隔15d，连续使用3次。根据猪场反馈，育肥猪用药5d后大群采食量上升，渐进性消瘦比例下降到5%以下，母猪被动淘汰率明显下降。3讨论赵胜杰等对河南省17 4个屠宰场的2 0 8 7 份样品检测发现，PCV2阳性率47.48%，PCV3阳性率6.32%，这表明河南省PCV2和PCV3带毒生产情况不容乐观 4。商丘地理位置特殊，屠宰企业采购生猪主要来自省内周边地区，监测结果提示本地生猪圆环病毒感染情况及受威胁程度。在追溯过程中发现养殖从业人员对PCV等免疫抑制病的认识不足，往往会导致疫情的失控和错过早期控制的时机。结合当前生猪养殖实际，猪圆环病毒的防控仍然需要按照经典的疫病防控三要素“传染源、传播途径、易感动物 进行。在控制传染源方面：鼓励自繁自养体系建设，自繁自养体系相对封闭，不易受到外部病毒的感染，也有利于控制传染源，也可以避免因为大规模跨区域运输而带来的病毒传播风险。定期对猪群进行检测，通过对猪群的检测，可以及早发现感染病毒的猪,并对其进行隔离和治疗。同时，也可以掌握猪群的病情情况，及时采取相应的防控措施，避免病毒的传播和扩散。做好种猪净化，种猪作为繁殖群体的重要组成部分，其健康状况直接影响整个猪群的健康。因此,对种猪的净化工作非常重要，可以通过一系列的检测和隔离措施，确保种猪的健康状况。严格引种，为了避免引入隐性感染猪群，应该严格控制引种，制定详细的监测方案，对引进的猪群进行检测与隔离，确保其没有携带病毒。在控制传播途径方面：提升生物安全防控能力，落实生物安全规范，做好人车物的生物安全管理，做好生物媒介的防范，实行封闭管理。坚持“全进全出”的饲养原则，避免交叉循环传播的问题。重视消毒，根据圆环病毒对季铵盐加碘的消毒液敏感的特点，合理安排消毒程序。在易感动物方面：积极使用疫苗，目前PCV2单苗约14种，联苗约6 种，规模猪场的免疫时间一般是在50 日龄左右免疫，母猪产前1月免疫。在监测中发现，对于已经存在PCV2和PCV3混合感染的猪场，育肥猪的提前免疫和母猪的加强免疫是控制感染的关键措施。加强饲养管理，注意转群、换料、疫苗免疫等生产应激，避免使用霉变、被病毒污染饲料。防止继发感染，对于已经发生感染的猪群，可按照“疫苗+中药增强免疫+抗生素防止继发感染原则，结合混合感染的情况如支原体、蓝耳病、巴氏杆菌等病原微生物，有针对性地使用抗生素或抗病毒药物进行控制。参考文献：1顾金燕,邢刚，雷静等.猪圆环病毒2 型与猪圆环病毒相关性系统疾病的回顾及展望 J.生物工程学报，2 0 15，31(6):880-891.2刘相聪，申翰钦，张鹏飞等.华南地区猪圆环病毒3型感染的分子流行病学调查与分析 J.畜牧与兽医，2 0 18,50(6):95-100.3陈芳洲，杨华威，赵祖凯.我国猪圆环病毒流行特点和防控方案 J.猪业科学，2 0 2 3，40（3）：39-40.4赵胜杰，刘光辉，盛敏，房大学，郭洛生，冉晓龙，班付国.2 0 19 年河南省屠宰场猪群常见病原隐性感染情况调查 J.上海畜牧兽医通讯，2 0 2 0（3）：34-36.