输血科标准操作规程SOP文件(检验科).doc

血库标准操作规程（SOP） 检验科2015-01修订目 录第一章 血库仪器标准操作规程第一节 Dianafuge标准操作规程3第二节 80-2离心机标准操作规程3第三节 CU600型电热恒温水箱标准操作程序4第四节 SANYO MBR-107D（H）贮血冰箱标准操作程序4第五节 Haier 低温冰箱标准操作程序4第六节 海尔冰箱标准操作程序5第七节 医院血库管理软件应用标准操作规程5第八节 SJW系列数码恒温血小板振荡保存箱标准操作规程6第九节 WGH-I型数码恒温解冻箱标准操6第二章 血库项目标准操作规程第一节 血样采集和送检、血型复查及血源组织标准操作程序7第二节 ABORh（D）血型复检标准操作规程8第三节 Rh血型鉴定标准操作程序9第四节 红细胞血型抗体筛查标准操作规程11第五节 抗人球蛋白试验14第六节 血液交叉配血试验标准操作规程15第七节 血液出库（发血）标准操作规程17第八节 数据记录及费用收取标准操作规程17第九节 血液申领、入库、核对、贮存标准操作规程19第十节 血液报废（失效）标准操作规程19第十一节 输血反应处理标准操作规程20第十二节 实验室消毒和污物处理标准操作规程21第十三节 血库交接班标准操作规程21第十四节 血液质量管理标准操作规程22第十五节 血库夜班操作规范23第十六节 应急预案操作规程24第十七节 贮存式自身输血（PABD）标准操作规程26第十八节 临床医师用血申请操作规程28第十九节 临床护士输血操作规程28血 库 标 准 操 作 规 程第一章 血库仪器标准操作规程第一节 Dianafuge标准操作规程一、Dianafuge标准操作规程（一）Dianafuge 开/关机程序1开机把仪器电源开关拨到“”（开）的位置，开始正确运行。2关机把仪器电源开关拨到“0”（关）的位置。（二）Dianafuge标准操作程序1Dianafuge 离心机应放置于水平台桌上，电源（压）须匹配。2离心机在离心前，先按OPEN，此时门盖打开，放入检测卡（需对称放置），放入完毕后，用手把门盖按下，然后按START，离心机开始转动，10分钟后自动报警开门盖，取出卡片，最后把门盖按下关好。二、Diana-Incubator 标准操作规程（一）Diana-Incubator 开/关机程序1开机按顺序依次打开电源开关。把仪器电源开关拨到“”（开）的位置，开始正确运行。2关机把仪器电源开关拨到“0”（关）的位置。（二）Diana-Incubator 标准操作程序1Diana-Incubator 孵育器应放置于水平台桌上，电源（压）须匹配。2孵育器的使用，用手开启门盖，放入检测卡，按所需要的保温（其温度自动调节保持为37）时间，顺时针旋转选择所需时间，到时后会报警提示，开门盖取出卡片后关盖。第二节 CH80-2离心机标准操作规程一、CH80-2离心机开/关机程序1开机插上电源把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。2关机 按依次顺序把仪器电源开关拨到OFF的位置。二、CH80-2离心机标准操作程序1电源开关拨到ON位置 2离心试管需等重量对称放置。 3按时间开关调至所需离心时间。 4再把转速开关调至所需离心转速。 5. 按启动，开始正确运行。 5停止运转后取出标本。第三节 CU600型电热恒温水箱标准操作规程CU600型电热恒温水箱标准操作程序 1在水箱内加入清洁温水至总高度1/22/3处。 2接通电源，选择工作温度。说明操作显示备注设定工作温度按“SET”键37.0预先设定温度值显示闪烁增加设定温度值按“+” 键52.5数值增加，显示闪烁减少设定温度值按“-”键30.0数值减少，显示闪烁确定工作温度按“SET”键25.0新设定温度储存后，显示箱内温度 3水槽进入升温状态，加热指示灯亮。当箱内温度接近设定温度时，加热指示灯闪烁，到达设定温度后，控制进入恒温状态。4水浴箱工作温度波动范围应控制在1左右，定期用校正过的温度计进行校正。 5水浴箱内外应保持清洁，每周定期清洗更换清水，经常保持水箱内水质干净。第四节 SANYO MBR-107D（H）贮血冰箱标准操作规程SANYO MBR-107D（H）贮血冰箱标准操作程序1接通电源，把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。2 温度控制在26范围内，实际运行温度在4左右，工作温度波动范围应控制在1以内，定期（时）用校正过的温度计进行校正。3温度每天记录四次（晨8时、上午11时，下午4时、晚8时）的温度，如温度超出正常范围，警报器会自动报警，须及时进行处理。4每月对贮血冰箱内的温度芯片进行检查并作记录于电脑中，以免查询。5贮血冰箱内外应保持清洁，严禁存放他物；每周清洗消毒一次，用2%戊二醛溶液或施康（1：100）消毒；每月冰箱内空气培养一次。无霉菌生长或培养皿（90mm）细菌生长菌落8CFU/10分钟或200 CFU/M3为合格，结果须登记在记录本上。第五节 Haier 低温冰箱标准操作规程Haier 低温冰箱标准操作程序1接通电源，把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。2温度控制在-30左右范围内，实际运行温度波动范围应控制在-323左右，定期（时）用校正过的温度计进行校正。3温度每天记录四次（晨8时、上午11时，下午4时、晚8时）的温度，如温度超出正常范围，警报器会自动报警，须及时进行处理。4每月对低温冰箱内的温度芯片进行检查并作记录于电脑中，以免查询。5定期进行化霜清洗消毒。第六节 海尔冰箱标准操作规程海尔冰箱标准操作程序1接通电源，把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。2温度控制在28左右范围内，实际运行温度波动范围应控制在52左右，定期（时）用校正过的温度计进行校正。3温度每天记录两次（上午8时，下午4时）的温度，如温度超出正常范围，须及时进行处理。第七节 医院血库管理软件应用标准操作规程医院血库管理软件应用标准操作程序一、开机1接通电源，开主机按下电源开关，同时按Ctrl+Alt+Delete按回车。2双击医院用血管理信息系统，输入本人的工号按回车键再回车医院血库管理软件系统。二、血液入库点击入库点击新增，输入血卡号、血袋号、血型、血液类别、血量、采血日期，保存即可。三、患者档案建立在配发血前自先将患者档案输入电脑内。点击【患者档案】 出现患者登记菜单点击新增 进入第二联患者登记菜单，然后输入患者档案，保存。再输入其他患者档案至输完为止。如门诊病人，可以输入就诊卡号。四、交叉配血 带有红细胞的血液均需做血液交叉配血试验直接点击配血出现配血操作菜单选择入院类型输入患者住院号、用激光扫描仪，扫描血袋号条形码，出现配血菜单，输入配血方法等（已有默认结果） 按确定，然后再扫描第二或第三个助血员的血袋号条形码，按确定保存 取消（不打配血收费单时）退出。五、出库（发血）直接点击出库，出现发血操作菜单选择入院类型输入住院号、用激光扫描仪，扫描血袋号条形码，再扫描第二或第三个血袋号条形码，点击配血单打印血液交叉配合试验报告单点击反馈卡打印患者输血不良反应反馈单再保存取消（不打收费单时）退出。血浆、血小板不需要配血的血液发血，直接点击出库，并按以上进行操作。第八节 SJW系列数码恒温血小板振荡保存箱标准操作规程SJW系列数码恒温血小板振荡保存箱标准操作规程1开机打开电源开关。把仪器电源开关拨到“”（开）的位置，开始正确运行。打开门，把振荡箱电源开关拨到“”（开）的位置，振荡箱开始振荡运行，并显示箱内温度222。 拉开抽屉，把血小板袋平整放入，注意不要外露，以免箱体在运行时夹破血小板袋。然后，关上抽屉和门让其运行。2关机按依次顺序把振荡箱电源开关拨到“O”（关）的位置，振荡箱停止运行，然后关门，再把仪器电源开关拨到“0”（关）的位置。3. 消毒 按下消毒键，打开电源开关，系统进入消毒状态（设为20分钟），消毒完毕后，先关消毒键，再关闭电源开关。第九节WGH-I型数码恒温解冻箱标准操作规程WGH-I型数码恒温解冻箱标准操作规程1开机水箱内注入清水；按顺序依次打开电源开关。2融化周期装载：将冷冻血浆袋套进外包装袋，挂到篮架上；编程：设定融化周期时间，按下启动钮；振荡：挂篮降入水箱中，开始振荡周期；上升：融化周期结束后，挂篮自动升出水面。3清洁每周定期清洗更换清水，经常保持水箱内水质干净。第二章 血库项目标准操作规程第一节 血样采集和送检、标本核收、血型复查及血源组织标准操作程序一、血样采集和送检与输血申请单核收 标准操作程序 采集血样 1采血护士:采集配血血样，护士要求必须有初级以上护士职称，实习/进修护士不得单独进行。 2.明确病人用血申请，核对病人信息：姓名、性别、年龄、住院号、科别、床号等信息。 3.准备采血材料，并明确以下内容。 正确的标本：取材正确； 正确的标本量：血型复查（血交叉）标本抽取3ml； 正确的标识：条形码号标签或手工书写标签，但必须明确标明姓名、科室床号、住院号。 4采集血样过程： 确保在采集血样时，床边正确的核对患者； 正确地给血样试管贴标签：血样采集后，在床边给血样贴标签，而不应该事先贴好标签或到护士站后贴标签； 第一次输血，应同时采集输血前五项检测血样，并记录抽取时间入病历。 5.采血样完成后，再次核对血样标识与申请单信息，无误后送输血科，并进行护理记录。 6.质量标准要求：正确完整的血样标识，与申请单一致；正确地核对与采血过程； 标本无溶血、不能在输液处采集血样； 正确地记录。送收血样 1送血样人员必须是医护人员，严禁患者家属送血样。 2血样送到输血科后应由送血人员和输血科人员一起核对以下信息： 血样信息与申请单信息是否一致； 核对查看申请单的完整性（必须有血常规+血型结果）、血样标识的完整性（必须内容齐全、文字清楚）； 血样标本量、有无溶血； 双方核对，无误后签字交接。 3.有以下情况，输血科拒绝收血样： 血样标识不完整； 血样无标识；标本量不足、血样质量有问题；无输血申请单或申请单上无血常规+血型的结果。 4.质量标准要求 血样信息完整无误；血样质量符合要求及采集量正确。血型复查核收1 核对：按要求核对输血申请单与血标本上的全部内容，并在标本接收簿中作记录；2 核收：在检验之星中，进行血型复查医嘱的核收；3血型复检及不完全抗体测定（具体操作详见有关章节）；4核对输血申请单、血标本、病历中的姓名、住院号、血型（如与原始血型不相符时，必须重新抽取病人标本检测），正确无误后，报告其血型复查和抗筛结果，作记录；5输血申请单按血型类别在文件夹中放置；血型复查后的标本，按先后次序放在试管架中。二、血源组织1对临床医师申请用血种类、用血量进行了解核实，提前备好相应血源；3 血库存量组织，要求每日存量必须保持在周用血量的1/2；当发生重大事件急需大量血液时，按照急诊用血应急预案执行3特殊血液组织紧急用血时，血库人员在接到特殊用血申请单时，应在第一时间先向市中心血站报告用血种类、用血量和用血时间等；非紧急用时，按规定须提前1天预约，由血库值班人向血站报告；Rh(D)阴性和其他稀有血型患者的输血择期手术病人输血：当临床遇到稀有血型患者后，应对患者家庭成员、兄弟姐妹进行筛选，符合者到血站体检献血，并填写稀有血型用血申请单。组织到血源后，临床再择期手术用血；急诊抢救病人紧急输血：按卫生部临床输血技术规范第十五条Rh（D）检查可除外。也可采用自身输血、同型输血或配合型输血。对紧急输用配合型血液时，由经管医师向患者或其家属（代理人）讲明，征得同意后方可输用，由医患双方共同签字并载入病历；具体实施可按照稀有血型及应急用血管理条款执行特殊血液预约的信息反馈与记录。注：特殊血液是指：单采血小板、洗涤红细胞、冷沉淀、辐照血、Rh(D)阴性和其他稀有血型血液等第二节 ABORh（D）血型复检标准操作规程ABORh（D）血型复检标准操作程序抗A、抗B、抗D血清定型（试管或玻片法）标准操作程序【方法原理】1ABO血型：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，进行红细胞凝集试验。正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或/和抗B。2Rh（D）血型：用抗D血清进行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh（D）阳性，不带D抗原者称为Rh（D）阴性。【标本采集和处理】1标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。2标本保存：室温放置不超过8小时，4保存不超过72小时，无溶血现象。【试剂】1 抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体 长春博德）2 Anti-D (IgM) Biotest。35%及0型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见附注。【操作步骤】1取小试管3支（或玻片一张划成三等分），分别标明抗A、抗B、抗D，用滴管分别加抗A、抗B、抗D分型血清各1滴，再以滴管分别加受检者5%红细胞（取1滴压积红细胞加16滴生理盐水）悬液1滴，混和。2另取小试管3支（或玻片一张划成三等分），分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴，再分别滴加A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混和。3立即以1000r/min离心1min（或将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min）。4 将试管轻轻摇动，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低培镜检查。5观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。6凝集强度判断标准：4+=红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+=红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2+=红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1+=肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF=混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。见表21表21 ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞 抗A 抗B 抗A+B受检者血型受检者血清+试剂红细胞A细胞 B细胞 O细胞 A B O AB 注：=凝集；=不凝集。7“AB”注意冷凝集或自身凝集，可以在37水浴中鉴别。8血型复查结果输入检验之星中，核对后审定报告。第三节RhD血型鉴定标准操作程序RhD血型鉴定标准操作程序RhD血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇到相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。若误诊误治，可导致患者残废或死亡。临床输血时，一般需作助血型鉴定。 一、RhD血型鉴定标准操作程序【原理】 应用血凝试验检测红细胞抗原。RhD血型是由红细胞表面是存在或缺失D抗原确定。D抗原于细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。 【试剂】 RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体） 【操作】 1盐水法 取小试管(10mm60mm)1支，蜡笔标记，加试剂1滴，再加人5%受检者红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。2对照管 用蜡笔标记阳性和阴性，分别加人抗D血清（IgM）1滴，阳性对照管加Rh阳性红细胞1滴，阴性对照管加Rh阴性红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。 3结果判定 如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管凝集，即表示受检者红细胞上有相应抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。【附注】 1单克隆IgM Rh抗血清有商品试剂供应，可用盐水介质做凝集试验。抗血清（IgM）1滴，加5%受检者红细胞悬液1滴，混合，置7水浴1h，观察凝集反应。 2如临床上只要求检查是否为Rh(D)阳性还是阴性，只需用抗D血清进行鉴别。如结果为阴性，则应进一步检查排除弱D。 3.在我国汉族人群中，Rh阳性占99.66%，Rh阴性占0.34%。 4.阳性对照可取3人0型红细胞混合配成。阴性对照不易得到，一般设计方法为正常AB型血清1滴，加5% D阳性红细胞悬液1滴和菠萝酶试剂混匀，与受检管一同置7水浴1h。 5Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应时，凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。 【假阳性反应原因分析】 1试剂中存在具有其他特异性的抗体(指不完全D抗体)，因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验，因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检查人员意识到有进一步试验的必要。 2多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。 3当用未经洗涤的细胞做试验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。 4试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。【假阴性反应原因分析】 1搞错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。 2试管中漏加抗血清，在加人细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。 3未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞间的比例以及温育的温度和时间不正确。 4抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。 二、弱D（weaK D）型鉴定标准操作程序 【原理】 根据美AABB技术手册第12版(1996)规定：D“这术语不再使用，携带弱的D抗原的红细胞仍被归类为D阳性，称之“弱D（weaK D）”。原称之“D”红细胞一部分具有与正常D阳性红细胞同样性质的D抗原，只是D抗原数量减少；另一部分原“D”红细胞D抗原与正常D抗原相比缺少正常D抗原中1个或多个抗原表位。 弱D型红细胞与某批或几批抗D血清在盐水介质及酶试验中不发生凝集，但在间接抗人球蛋白试验中均发生凝集。因此，当用酶试验检查发现与抗D不凝集时，不应轻率地定为Rh阴性，需进一步排除弱D型的可能。 【试剂】1 抗D血清不同生产单位或批号不同的抗D血清35个。 2 抗人球蛋白血清。 31%菠萝酶溶液。 45%受检红细胞悬液。 【操作】 1将受检者红细胞分别与各批抗D血清作间接抗人球蛋白试验(方法见本章第四节)。 2将受检者红细胞分别与各批抗D血清作酶试验(方法见本章第五节)。 【结果判定】 受检红细胞与各批抗D血清在酶试验中都不凝集或只与其中1批或数批抗D血清凝集，但在间接抗人球蛋白试验中都凝集者，都属弱D型细胞。【附注】 1在临床输血中，弱D型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗体。所以受血者若为弱D型，应作Rh阴性论，应输注Rh阴性血液；供血者为弱D型者，应作Rh阳性论，不应当输血给Rh阴性的受血者。 2.弱D型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可能发生新生儿溶血病。第四节 红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2供血者血清抗体筛检；3输血前受血者血清抗体检查；4输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5孕妇血清的抗体检查；6新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22下反应最好。在室温下有活性而在37无活性的抗体是没有什么临床意义的。对患者或供血者的血样不需要用这种方法。在37下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。【试剂】 1试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。 因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。 如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。 合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。2血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。因为：如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。血清标本的采取时间应注意：例如，受血者血样一定要在48h内采集。为了检出由于最近红细胞刺激而产生的抗体，血样必须是新近的。如果抗体筛查结果阴性，有时需要隔数天后重新采样复查，因为此时抗体的浓度可逐渐增强。每一样本应详细记录病史，包括姓名、性别、年龄、民族、妊娠史、输血史，使用过哪些药物(如甲基多巴、青霉素、先锋霉素等)、采样日期、有无抗凝剂、抗凝剂的种类和剂量、血液样本的外观、有无溶血、黄疽以及红细胞比积等。【操作步骤】1取受检者血清2滴于标好的试管中。2取2%试剂（筛查）红细胞悬液l滴于每个试管中，混和。31000r/min离心1min（离心速度和时间应按质控规定）。4观察溶血和凝集反应，记录结果。5按需要置室温（2224）温育1530 min。6离心，观察溶血和凝集，并记录结果。溶血或凝集都是阳性结果。7报告结果于检验之星中。二、凝聚胺法【方法原理】利用低离子介质（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。加入凝聚胺可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液，具有中和凝聚胺的作用，使正常红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。【标本采集和处理】1标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。2血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。3标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。【试剂】1抗体筛查、细胞。2凝聚胺试剂：低离子介质（LIM ）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液（Resuspending）。335%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成35%红细胞悬液。【操作步骤】1准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查、细胞或35%红细胞悬液。2取小试管2支，各加被检血清（浆）2滴，分别加入35%筛检红细胞1滴或和细胞50ul（0.8%）。3各加入LIM0.7ml，混合后，加凝聚胺Polybrene2滴，并混合。4以3400rpm，离心10秒，把上清液倒掉，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。5最后加入悬浮液Resuspending2滴，轻轻转动试管混合并观察结果。如凝集散开，表示由凝聚胺引起的非特异性凝集，抗体筛检结果为阴性。如凝集不散开，则红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。 6报告结果于检验之星中。五、微柱凝胶法【方法原理】利用凝胶过滤技术和离心技术，抗体筛查细胞上有特定的抗原，抗原可以和相应的抗体结合。当待检血清（浆）样本中有不完全抗体时，抗体筛查细胞和待检血清（浆）中不完全抗体可专一性的结合。抗人球蛋白可结合抗体，通过桥介作用使细胞凝集。凝集发生说明血清（浆）中有不完全抗体。【标本采集和处理】1标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。2血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。3标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。【试剂】1抗体筛查、细胞。2抗人球蛋白检测卡。335%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成35%红细胞悬液。【操作步骤】1准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查、细胞或35%红细胞悬液。2标记抗人球蛋白检测卡、姓名、住院号、标明、。3 微柱中加50ul待检样本血清（浆）。4加抗体筛查、细胞各50ul（0.8%）。537 15分钟，离心10分钟。6读结果和记录。离心时，凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应。未凝集血细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。7报告结果于检验之星中。【附注】1判读试验结果常用的代号是:4+：一个结实的凝集块。3+：几个大的凝集块。2+：中等大的凝块，背景清晰。1+：小凝集块，背景混浊。士：微小凝集块，背景混浊。O：无凝集或溶血。PH：表示部分溶血，有一些细胞残留。H：表示完全溶血，无残留细胞。2抗体筛查试验结果的解释抗体筛检试验是很有价值的，但也有其局限性。一个阴性试验不一定意味着这一血清中没有抗体，而只是在使用这些技术时，缺乏与筛查细胞起反应的抗体。如果临床资料和其他实验室所见提供了另外的线索，就应扩大常规筛查方法。例如，如果ABO正反定型不符，就应在室温下做抗体筛查。如疑为溶血性输血反应、新生儿溶血病或自身免疫性溶血性贫血，有必要做酶试验或以放散液做筛查，以证明引起疾病的抗体。第五节 抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验标准操作程序【方法原理】抗人球蛋白试验(antiglobulin test, AGT)又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法、将抗人球蛋白血清(antiglobulin serum, AGS)加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗人球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。抗人球蛋白血清除可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(C3、C4)。所谓广谱AGS，即包括抗IgG和抗C3抗体。【标本采集和处理】标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。【试剂】1. 1%标准A/B/O型红悬。2抗人球蛋白检测卡。3. 0.9%生理盐水。【操作步骤】一、 ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验：（1） 在戴安娜微柱凝胶新生儿血型卡的8个孔中分别加入1%的样本红细胞50ul；（2） 血型卡直接放入专用离心机离心，观察结果。二、释放试验 (1） 取压积红细胞0.2 ml洗涤三次，再加0.2 ml生理盐水，56水浴10分钟，2000转/ min离心3 min，吸取上清液备用；（即放散液）（2） 根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul上清液，置37孵育15分钟，离心，观察结果。患者ABO血型为“A”型的，加入标准A型、O型红细胞悬液； “B”型的，加入标准B型、O型红细胞悬液； “AB”型的，加入标准A型、B型、O型红细胞悬液； “O”型的，加入标准O型红细胞悬液。三、游离抗体测定 （1）根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul样本血清；（原则同上） （2）置37孵育15分钟，离心，观察结果。结果判断：（1） ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验结果判断： 第1-5孔为血型检测； 第6孔Ctl为阴性对照管； 第7孔为兔多克隆抗IgG； 第8孔AHG为抗人球蛋白试验结果。（2） 游离、释放试验结果判断： 5 凝集有80%的红细胞在微柱管下端2/3以下者（即1+以上）为阳性。第六节 血液交叉配血试验标准操作规程血液交叉配血试验标准操作程序交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，故受血者血清加供血者红细胞相配的一管称为“主侧”；供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为“次侧”，两者合称交叉配血。交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整的操作规程应包括：查阅受血者以前的血型检查记录，如与这次检查结果有所不同，应及时分析原因；对收到的受血者血样应作ABO正反定型，Rh血型和其他血型检查以及血型抗体检测和鉴定；选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。一、配血要求1 受血者配血试验的血样（血型复查）必须是输血前三天之内的；2核对病人资料：核对输血申请单、受血者血样、病历三者，其内容包括：患者姓名、性别、年龄、科室床号、住院号、血型（原始血常规血型和血型复查中血型）、用血品种、用血量等，必须正确无误；3核对血液：血液完整性、血液标签、血液质量；4核对取血凭证：按临床（取血凭证）实际用血品种、量进行配发血；5配血前，先复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型）、Rh（D）血型和抗筛，并报告其结果；6在电子病历或急诊医生工作站中，检查临床输血五项的执行情况；7输注全血、浓缩红细胞、洗涤红细胞、浓缩白细胞等患者应进行交叉配血试验，其方法：采用盐水配血试验、凝聚胺法。二、盐水配血试验标准操