输血科标准操作规程SOP文件(检验科).doc

血库标准操作规程（SOP）

检验科

2015-01修订

目 录
第一章 血库仪器标准操作规程
第一节 Dianafuge标准操作规程···········································3
第二节 80-2离心机标准操作规程·········································3
第三节 CU600型电热恒温水箱标准操作程序································4
第四节 SANYO MBR-107D（H）贮血冰箱标准操作程序······················4
第五节 Haier 低温冰箱标准操作程序······································4
第六节 海尔冰箱标准操作程序··········································5
第七节 医院血库管理软件应用标准操作规程································5
第八节 SJW系列数码恒温血小板振荡保存箱标准操作规程·····················6
第九节 WGH-I型数码恒温解冻箱标准操···································6
第二章 血库项目标准操作规程
第一节 血样采集和送检、血型复查及血源组织标准操作程序····················7
第二节 ABO＆Rh（D）血型复检标准操作规程·······························8
第三节 Rh血型鉴定标准操作程序········································9
第四节 红细胞血型抗体筛查标准操作规程·································11
第五节 抗人球蛋白试验··············································14
第六节 血液交叉配血试验标准操作规程··································15
第七节 血液出库（发血）标准操作规程···································17
第八节 数据记录及费用收取标准操作规程·································17
第九节 血液申领、入库、核对、贮存标准操作规程···························19
第十节 血液报废（失效）标准操作规程····································19
第十一节 输血反应处理标准操作规程······································20
第十二节 实验室消毒和污物处理标准操作规程·······························21
第十三节 血库交接班标准操作规程·······································21
第十四节 血液质量管理标准操作规程······································22
第十五节 血库夜班操作规范·············································23
第十六节 应急预案操作规程·············································24
第十七节 贮存式自身输血（PABD）标准操作规程····························26
第十八节 临床医师用血申请操作规程······································28
第十九节 临床护士输血操作规程·········································28

血 库 标 准 操 作 规 程
第一章 血库仪器标准操作规程
第一节 Dianafuge标准操作规程
一、Dianafuge标准操作规程
（一）Dianafuge 开/关机程序
1．开机
把仪器电源开关拨到“Ⅰ”（开）的位置，开始正确运行。
2．关机
把仪器电源开关拨到“0”（关）的位置。
（二）Dianafuge标准操作程序
1．Dianafuge 离心机应放置于水平台桌上，电源（压）须匹配。
2．离心机在离心前，先按OPEN，此时门盖打开，放入检测卡（需对称放置），放入完毕后，用手把门盖按下，然后按START，离心机开始转动，10分钟后自动报警开门盖，取出卡片，最后把门盖按下关好。
二、Diana-Incubator 标准操作规程
（一）Diana-Incubator 开/关机程序
1．开机
①按顺序依次打开电源开关。
②把仪器电源开关拨到“Ⅰ”（开）的位置，开始正确运行。
2．关机
把仪器电源开关拨到“0”（关）的位置。
（二）Diana-Incubator 标准操作程序
1．Diana-Incubator 孵育器应放置于水平台桌上，电源（压）须匹配。
2．孵育器的使用，用手开启门盖，放入检测卡，按所需要的保温（其温度自动调节保持为37℃）时间，顺时针旋转选择所需时间，到时后会报警提示，开门盖取出卡片后关盖。
第二节 CH80-2离心机标准操作规程
一、CH80-2离心机开/关机程序
1．开机
①插上电源
②把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。
2．关机
按依次顺序把仪器电源开关拨到OFF的位置。
二、CH80-2离心机标准操作程序
1．电源开关拨到ON位置
2．离心试管需等重量对称放置。
3．按时间开关调至所需离心时间。
4．再把转速开关调至所需离心转速。
5. 按启动，开始正确运行。
5．停止运转后取出标本。

第三节 CU600型电热恒温水箱标准操作规程
CU600型电热恒温水箱标准操作程序
1．在水箱内加入清洁温水至总高度1/2~2/3处。
2．接通电源，选择工作温度。
说明
操作
显示
备注
设定工作温度
按“SET”键
37.0
预先设定温度值显示闪烁
增加设定温度值
按“+” 键
52.5
数值增加，显示闪烁
减少设定温度值
按“-”键
30.0
数值减少，显示闪烁
确定工作温度
按“SET”键
25.0
新设定温度储存后，显示箱内温度
3．水槽进入升温状态，加热指示灯亮。当箱内温度接近设定温度时，加热指示灯闪烁，到达设定温度后，控制进入恒温状态。
4．水浴箱工作温度波动范围应控制在±1℃左右，定期用校正过的温度计进行校正。
5．水浴箱内外应保持清洁，每周定期清洗更换清水，经常保持水箱内水质干净。

第四节 SANYO MBR-107D（H）贮血冰箱标准操作规程
SANYO MBR-107D（H）贮血冰箱标准操作程序
1．接通电源，把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。
2． 温度控制在2～6℃范围内，实际运行温度在4℃左右，工作温度波动范围应控制在±1℃以内，定期（时）用校正过的温度计进行校正。
3．温度每天记录四次（晨8时、上午11时，下午4时、晚8时）的温度，如温度超出正常范围，警报器会自动报警，须及时进行处理。
4．每月对贮血冰箱内的温度芯片进行检查并作记录于电脑中，以免查询。
5．贮血冰箱内外应保持清洁，严禁存放他物；每周清洗消毒一次，用2%戊二醛溶液或施康Ⅰ（1：100）消毒；每月冰箱内空气培养一次。无霉菌生长或培养皿（90mm）细菌生长菌落<8CFU/10分钟或<200 CFU/M3为合格，结果须登记在记录本上。

第五节 Haier 低温冰箱标准操作规程
Haier 低温冰箱标准操作程序
1．接通电源，把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。
2．温度控制在-30℃左右范围内，实际运行温度波动范围应控制在-32℃±3左右，定期（时）用校正过的温度计进行校正。
3．温度每天记录四次（晨8时、上午11时，下午4时、晚8时）的温度，如温度超出正常范围，警报器会自动报警，须及时进行处理。
4．每月对低温冰箱内的温度芯片进行检查并作记录于电脑中，以免查询。
5．定期进行化霜清洗消毒。
第六节 海尔冰箱标准操作规程
海尔冰箱标准操作程序
1．接通电源，把电源开关拨到ON位置，开始正确运行。
2．温度控制在2~8℃左右范围内，实际运行温度波动范围应控制在5℃±2左右，定期（时）用校正过的温度计进行校正。
3．温度每天记录两次（上午8时，下午4时）的温度，如温度超出正常范围，须及时进行处理。

第七节 医院血库管理软件应用标准操作规程
医院血库管理软件应用标准操作程序
一、开机
1．接通电源，开主机按下①电源开关，同时按Ctrl+Alt+Delete——按回车。
2．双击医院用血管理信息系统，输入本人的工号——按回车键——再回车——医院血库管理软件系统。
二、血液入库
点击入库——点击新增，输入血卡号、血袋号、血型、血液类别、血量、采血日期，保存即可。
三、患者档案建立
在配发血前自先将患者档案输入电脑内。
点击【患者档案】 出现患者登记菜单——点击新增 进入第二联患者登记菜单，然后输入患者档案，保存。再输入其他患者档案至输完为止。如门诊病人，可以输入就诊卡号。
四、交叉配血
带有红细胞的血液均需做血液交叉配血试验
直接点击配血——出现配血操作菜单——选择入院类型——输入患者住院号、用激光扫描仪，扫描血袋号条形码，出现配血菜单，输入配血方法等（已有默认结果） ——按确定，然后再扫描第二或第三个助血员的血袋号条形码，——按确定——保存 ——取消（不打配血收费单时）——退出。
五、出库（发血）
直接点击出库，出现发血操作菜单——选择入院类型——输入住院号、用激光扫描仪，扫描血袋号条形码，再扫描第二或第三个血袋号条形码，——点击配血单——打印血液交叉配合试验报告单——点击反馈卡——打印患者输血不良反应反馈单——再保存——取消（不打收费单时）——退出。
血浆、血小板不需要配血的血液发血，直接点击出库，并按以上进行操作。

第八节 SJW系列数码恒温血小板振荡保存箱标准操作规程
SJW系列数码恒温血小板振荡保存箱标准操作规程
1．开机
①打开电源开关。
②把仪器电源开关拨到“Ⅰ”（开）的位置，开始正确运行。
③打开门，把振荡箱电源开关拨到“Ⅰ”（开）的位置，振荡箱开始振荡运行，并显示
箱内温度22±2℃。
④拉开抽屉，把血小板袋平整放入，注意不要外露，以免箱体在运行时夹破血小板袋。然后，关上抽屉和门让其运行。
2．关机
按依次顺序把振荡箱电源开关拨到“O”（关）的位置，振荡箱停止运行，然后关门，再
把仪器电源开关拨到“0”（关）的位置。
3. 消毒
按下消毒键，打开电源开关，系统进入消毒状态（设为20分钟），消毒完毕后，先关消毒键，再关闭电源开关。
第九节WGH-I型数码恒温解冻箱标准操作规程
WGH-I型数码恒温解冻箱标准操作规程
1．开机
①水箱内注入清水；
②按顺序依次打开电源开关。
2．融化周期
①装载：将冷冻血浆袋套进外包装袋，挂到篮架上；
②编程：设定融化周期时间，按下启动钮；
③振荡：挂篮降入水箱中，开始振荡周期；
④上升：融化周期结束后，挂篮自动升出水面。
3．清洁
每周定期清洗更换清水，经常保持水箱内水质干净。

第二章 血库项目标准操作规程
第一节 血样采集和送检、标本核收、血型复查及血源组织标准操作程序
一、血样采集和送检与输血申请单核收 标准操作程序
采集血样
1．采血护士:采集配血血样，护士要求必须有初级以上护士职称，实习/进修护士不得单独进行。
2.明确病人用血申请，核对病人信息：姓名、性别、年龄、住院号、科别、床号等信息。
3.准备采血材料，并明确以下内容。
①正确的标本：取材正确；
②正确的标本量：血型复查（血交叉）标本抽取3ml；
③正确的标识：条形码号标签或手工书写标签，但必须明确标明姓名、科室床号、住院号。
4．采集血样过程：
①确保在采集血样时，床边正确的核对患者；
②正确地给血样试管贴标签：血样采集后，在床边给血样贴标签，而不应该事先贴好标签或到护士站后贴标签；
③第一次输血，应同时采集输血前五项检测血样，并记录抽取时间入病历。
5.采血样完成后，再次核对血样标识与申请单信息，无误后送输血科，并进行护理记录。
6.质量标准要求：
①正确完整的血样标识，与申请单一致；
②正确地核对与采血过程；
③标本无溶血、不能在输液处采集血样；
④正确地记录。
送收血样
1．送血样人员必须是医护人员，严禁患者家属送血样。
2．血样送到输血科后应由送血人员和输血科人员一起核对以下信息：
①血样信息与申请单信息是否一致；
②核对查看申请单的完整性（必须有血常规+血型结果）、血样标识的完整性（必须内容齐全、文字清楚）；
③血样标本量、有无溶血；
④双方核对，无误后签字交接。
3.有以下情况，输血科拒绝收血样：
①血样标识不完整；
②血样无标识；
③标本量不足、血样质量有问题；
④无输血申请单或申请单上无血常规+血型的结果。
4.质量标准要求
①血样信息完整无误；
②血样质量符合要求及采集量正确。
血型复查核收
1． 核对：按要求核对输血申请单与血标本上的全部内容，并在标本接收簿中作记录；
2． 核收：在检验之星中，进行血型复查医嘱的核收；
3．血型复检及不完全抗体测定（具体操作详见有关章节）；
4．核对输血申请单、血标本、病历中的姓名、住院号、血型（如与原始血型不相符时，必须重新抽取病人标本检测），正确无误后，报告其血型复查和抗筛结果，作记录；
5．输血申请单按血型类别在文件夹中放置；血型复查后的标本，按先后次序放在试管架中。
二、血源组织
1．对临床医师申请用血种类、用血量进行了解核实，提前备好相应血源；
3． 血库存量组织，要求每日存量必须保持在周用血量的1/2；
当发生重大事件急需大量血液时，按照急诊用血应急预案执行
3．特殊血液组织
①紧急用血时，血库人员在接到特殊用血申请单时，应在第一时间先向市中心血站报告用血种类、用血量和用血时间等；
②非紧急用时，按规定须提前1天预约，由血库值班人向血站报告；
③Rh(D)阴性和其他稀有血型患者的输血
择期手术病人输血：当临床遇到稀有血型患者后，应对患者家庭成员、兄弟姐妹进行筛选，符合者到血站体检献血，并填写《稀有血型用血申请单》。组织到血源后，临床再择期手术用血；
急诊抢救病人紧急输血：按卫生部《临床输血技术规范》第十五条Rh（D）检查可除外。也可采用自身输血、同型输血或配合型输血。对紧急输用配合型血液时，由经管医师向患者或其家属（代理人）讲明，征得同意后方可输用，由医患双方共同签字并载入病历；
具体实施可按照稀有血型及应急用血管理条款执行
④特殊血液预约的信息反馈与记录。
注：
特殊血液是指：单采血小板、洗涤红细胞、冷沉淀、辐照血、Rh(D)阴性和其他稀有血型血液等

第二节 ABO＆Rh（D）血型复检标准操作规程
ABO＆Rh（D）血型复检标准操作程序
抗A、抗B、抗D血清定型（试管或玻片法）标准操作程序
【方法原理】
1．ABO血型：根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，进行红细胞凝集试验。正定型，是用已知抗－A和抗－B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。
2．Rh（D）血型：用抗D血清进行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh（D）阳性，不带D抗原者称为Rh（D）阴性。
【标本采集和处理】
1．标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。
2．标本保存：室温放置不超过8小时，4℃保存不超过72小时，无溶血现象。
【试剂】
1． 抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体 长春博德）
2． Anti-D (IgM) Biotest。
3．5%及0型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见附注。
【操作步骤】
1．取小试管3支（或玻片一张划成三等分），分别标明抗A、抗B、抗D，用滴管分别加抗A、抗B、抗D分型血清各1滴，再以滴管分别加受检者5%红细胞（取1滴压积红细胞加16滴生理盐水）悬液1滴，混和。
2．另取小试管3支（或玻片一张划成三等分），分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴，再分别滴加A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混和。
3．立即以1000r/min离心1min（或将玻片不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min）。
4． 将试管轻轻摇动，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低培镜检查。
5．观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。
6．凝集强度判断标准：
4+=红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3+=红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2+=红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1+=肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
±=镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
MF=混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。见表2－1

表2－1 ABO血型正反定型结果
分型血清+受检者红细胞
抗—A 抗—B 抗—A+B
受检者血型
受检者血清+试剂红细胞
A细胞 B细胞 O细胞
＋ － ＋
－ ＋ ＋
－ － －
＋ ＋ ＋
A
B
O
AB
－ ＋ －
＋ － －
＋ ＋ －
－ － －
注：＋=凝集；－=不凝集。
7．“AB”注意冷凝集或自身凝集，可以在37℃水浴中鉴别。
8．血型复查结果输入检验之星中，核对后审定报告。

第三节RhD血型鉴定标准操作程序
RhD血型鉴定标准操作程序
RhD血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇到相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。若误诊误治，可导致患者残废或死亡。临床输血时，一般需作助血型鉴定。
一、RhD血型鉴定标准操作程序
【原理】
应用血凝试验检测红细胞抗原。RhD血型是由红细胞表面是存在或缺失D抗原确定。D抗原于细胞株BS226细胞产生的单克隆抗体发生特异性反应。
【试剂】
RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）

【操作】
1．盐水法 取小试管(10mm×60mm)1支，蜡笔标记，加试剂1滴，再加人5%受检者红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。
2．对照管 用蜡笔标记阳性和阴性，分别加人抗D血清（IgM）1滴，阳性对照管加Rh阳性红细胞1滴，阴性对照管加Rh阴性红细胞1滴，混匀，1000r/min离心1min观察结果。 3．结果判定 如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管凝集，即表示受检者红细胞上有相应抗原；受检管不凝集，即表示受检红细胞上没有相应抗原。
【附注】
1．单克隆IgM Rh抗血清有商品试剂供应，可用盐水介质做凝集试验。抗血清（IgM）1滴，加5%受检者红细胞悬液1滴，混合，置7℃水浴1h，观察凝集反应。
2．如临床上只要求检查是否为Rh(D)阳性还是阴性，只需用抗D血清进行鉴别。如结果为阴性，则应进一步检查排除弱D。
3.在我国汉族人群中，Rh阳性占99.66%，Rh阴性占0.34%。
4.阳性对照可取3人0型红细胞混合配成。阴性对照不易得到，一般设计方法为正常AB型血清1滴，加5% D阳性红细胞悬液1滴和菠萝酶试剂混匀，与受检管一同置7℃水浴1h。
5．Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体凝集反应时，凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。

【假阳性反应原因分析】
1．试剂中存在具有其他特异性的抗体(指不完全D抗体)，因此，对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验，因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检查人员意识到有进一步试验的必要。
2．多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。
3．当用未经洗涤的细胞做试验时，试样中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
4．试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染。
【假阴性反应原因分析】
1．搞错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶子上的标签。
2．试管中漏加抗血清，在加人细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。

3．未遵照抗血清使用说明书做试验，如抗血清和细胞间的比例以及温育的温度和时间不正确。
4．抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。
二、弱D（weaK D）型鉴定标准操作程序
【原理】
根据美AABB技术手册第12版(1996)规定：D“这术语不再使用，携带弱的D抗原的红细胞仍被归类为D阳性，称之“弱D（weaK D）”。原称之“D”红细胞一部分具有与正常D
阳性红细胞同样性质的D抗原，只是D抗原数量减少；另一部分原“D”红细胞D抗原与正常D抗原相比缺少正常D抗原中1个或多个抗原表位。
弱D型红细胞与某批或几批抗D血清在盐水介质及酶试验中不发生凝集，但在间接抗人球蛋白试验中均发生凝集。因此，当用酶试验检查发现与抗D不凝集时，不应轻率地定为Rh阴性，需进一步排除弱D型的可能。
【试剂】
1． 抗D血清不同生产单位或批号不同的抗D血清3～5个。
2． 抗人球蛋白血清。
3．1%菠萝酶溶液。
4．5%受检红细胞悬液。
【操作】
1．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作间接抗人球蛋白试验(方法见本章第四节)。
2．将受检者红细胞分别与各批抗D血清作酶试验(方法见本章第五节)。
【结果判定】
受检红细胞与各批抗D血清在酶试验中都不凝集或只与其中1批或数批抗D血清凝集，但在间接抗人球蛋白试验中都凝集者，都属弱D型细胞。
【附注】
1．在临床输血中，弱D型人经输注D阳性红细胞后可产生抗D抗体。所以受血者若为弱D型，应作Rh阴性论，应输注Rh阴性血液；供血者为弱D型者，应作Rh阳性论，不应当输血给Rh阴性的受血者。
2.弱D型妇女与Rh阳性丈夫生育的婴儿可能发生新生儿溶血病。

第四节 红细胞血型抗体筛查标准操作规程
红细胞血型抗体筛查标准操作程序
红细胞血型抗体检查适用于下列情况：
1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；
2．供血者血清抗体筛检；
3．输血前受血者血清抗体检查；
4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；
5．孕妇血清的抗体检查；
6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；
7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。
筛查方法
一、盐水介质法：
【方法原理】
有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。对患者或供血者的血样不需要用这种方法。在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，
而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。
【试剂】
1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。
因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。
筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。
每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。
如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。
合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。
2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。因为：
①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；
②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；
③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。
血清标本的采取时间应注意：例如，受血者血样一定要在48h内采集。为了检出由于最近红细胞刺激而产生的抗体，血样必须是新近的。如果抗体筛查结果阴性，有时需要隔数天后重新采样复查，因为此时抗体的浓度可逐渐增强。
每一样本应详细记录病史，包括姓名、性别、年龄、民族、妊娠史、输血史，使用过哪些药物(如甲基多巴、青霉素、先锋霉素等)、采样日期、有无抗凝剂、抗凝剂的种类和剂量、血液样本的外观、有无溶血、黄疽以及红细胞比积等。
【操作步骤】
1．取受检者血清2滴于标好的试管中。
2．取2%试剂（筛查）红细胞悬液l滴于每个试管中，混和。
3．1000r/min离心1min（离心速度和时间应按质控规定）。
4．观察溶血和凝集反应，记录结果。
5．按需要置室温（22～24℃）温育15～30 min。
6．离心，观察溶血和凝集，并记录结果。溶血或凝集都是阳性结果。
7．报告结果于检验之星中。
二、凝聚胺法
【方法原理】
利用低离子介质（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（浆）中的抗体结合。加入凝聚胺可使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液，具有中和凝聚胺的作用，使正常红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
【标本采集和处理】
1．标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。
2．血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。
3．标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。
【试剂】
1．抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞。
2．凝聚胺试剂：低离子介质（LIM ）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液（Resuspending）。
3．3～5%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成3～5%红细胞悬液。
【操作步骤】
1．准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞或3～5%红细胞悬液。
2．取小试管2支，各加被检血清（浆）2滴，分别加入3～5%筛检红细胞1滴或Ⅰ和Ⅱ细胞50ul（0.8%）。
3．各加入LIM0.7ml，混合后，加凝聚胺Polybrene2滴，并混合。
4．以3400rpm，离心10秒，把上清液倒掉，轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
5．最后加入悬浮液Resuspending2滴，轻轻转动试管混合并观察结果。如凝集散开，表示由凝聚胺引起的非特异性凝集，抗体筛检结果为阴性。如凝集不散开，则红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
6．报告结果于检验之星中。
五、微柱凝胶法
【方法原理】
利用凝胶过滤技术和离心技术，抗体筛查细胞上有特定的抗原，抗原可以和相应的抗体结合。当待检血清（浆）样本中有不完全抗体时，抗体筛查细胞和待检血清（浆）中不完全抗体可专一性的结合。抗人球蛋白可结合抗体，通过桥介作用使细胞凝集。凝集发生说明血清（浆）中有不完全抗体。
【标本采集和处理】
1．标本采集：常规静脉采血于分离胶/促凝剂管（血清）、或静脉采血3ml于EDTA.K2（血浆），一般采用血清进行抗体检查。
2．血清标本的采取时间：要求受检者血样一定要在输血前3天内采集，血样必须是新近的。
3．标本分离保存：血清及早分离防止溶血，可冷冻保存，如用冰冻血清作抗体检查，融化后的样本要充分混和，反复冻融的标本不能供抗体鉴定用。
【试剂】
1．抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞。
2．抗人球蛋白检测卡。
3．3～5%红细胞悬液：取多个“O”型人红细胞，经生理盐水洗涤三次，配成3～5%红细胞悬液。
【操作步骤】
1．准备样本，患者血清（血浆）、抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞或3～5%红细胞悬液。
2．标记抗人球蛋白检测卡、姓名、住院号、标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。
3． 微柱中加50ul待检样本血清（浆）。
4．加抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞各50ul（0.8%）。
5．37℃ 15分钟，离心10分钟。
6．读结果和记录。离心时，凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应。未凝集血细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。
7．报告结果于检验之星中。
【附注】
1．判读试验结果常用的代号是:
4+：一个结实的凝集块。
3+：几个大的凝集块。
2+：中等大的凝块，背景清晰。
1+：小凝集块，背景混浊。
士：微小凝集块，背景混浊。
O：无凝集或溶血。
PH：表示部分溶血，有一些细胞残留。
H：表示完全溶血，无残留细胞。
2．抗体筛查试验结果的解释
抗体筛检试验是很有价值的，但也有其局限性。一个阴性试验不一定意味着这一血清中没有抗体，而只是在使用这些技术时，缺乏与筛查细胞起反应的抗体。如果临床资料和其他实验室所见提供了另外的线索，就应扩大常规筛查方法。例如，如果ABO正反定型不符，就应在室温下做抗体筛查。如疑为溶血性输血反应、新生儿溶血病或自身免疫性溶血性贫血，有必要做酶试验或以放散液做筛查，以证明引起疾病的抗体。
第五节 抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验标准操作程序
【方法原理】
抗人球蛋白试验(antiglobulin test, AGT)又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法、将抗人球蛋白血清(antiglobulin serum, AGS)加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗人球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。抗人球蛋白血清除可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(C3、C4)。所谓广谱AGS，即包括抗IgG和抗C3抗体。
【标本采集和处理】
标本采集：常规静脉采血3ml于EDTA.K2。
【试剂】
1. 1%标准A/B/O型红悬。
2．抗人球蛋白检测卡。
3. 0.9%生理盐水。
【操作步骤】
一、 ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验：
（1） 在戴安娜微柱凝胶新生儿血型卡的8个孔中分别加入1%的样本红细胞50ul；
（2） 血型卡直接放入专用离心机离心，观察结果。
二、释放试验
(1） 取压积红细胞0.2 ml洗涤三次，再加0.2 ml生理盐水，56℃水浴10分钟，2000转/ min离心3 min，吸取上清液备用；（即放散液）
（2） 根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul上清液，置37℃孵育15分钟，离心，观察结果。
患者ABO血型为“A”型的，加入标准A型、O型红细胞悬液；
“B”型的，加入标准B型、O型红细胞悬液；
“AB”型的，加入标准A型、B型、O型红细胞悬液；
“O”型的，加入标准O型红细胞悬液。
三、游离抗体测定
（1）根据新生儿ABO血型，分别在微孔中加入1%标准A/B/O型红悬50ul，然后加入50ul样本血清；（原则同上）
（2）置37℃孵育15分钟，离心，观察结果。
结果判断：
（1） ABO血型、RH血型鉴定、直接抗人球蛋白试验结果判断：
第1-5孔为血型检测；
第6孔Ctl为阴性对照管；
第7孔为兔多克隆抗IgG；
第8孔AHG为抗人球蛋白试验结果。
（2） 游离、释放试验结果判断：

5

凝集有80%的红细胞在微柱管下端2/3以下者（即1+以上）为阳性。

第六节 血液交叉配血试验标准操作规程
血液交叉配血试验标准操作程序
交叉配血主要是检查受血者血清中有无破坏供血者红细胞的抗体，故受血者血清加供
血者红细胞相配的一管称为“主侧”；供血者血清加受血者红细胞相配的一管称为“次侧”，两者合称交叉配血。
交叉配血试验又称不配合性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验，完整的操作
规程应包括：①查阅受血者以前的血型检查记录，如与这次检查结果有所不同，应及时分析原因；②对收到的受血者血样应作ABO正反定型，Rh血型和其他血型检查以及血型抗体检测和鉴定；③选择预先进行血型检查的合格供血者作交叉配血试验。
一、配血要求
1． 受血者配血试验的血样（血型复查）必须是输血前三天之内的；
2．核对病人资料：核对输血申请单、受血者血样、病历三者，其内容包括：患者姓名、性别、年龄、科室床号、住院号、血型（原始血常规血型和血型复查中血型）、用血品种、用血量等，必须正确无误；
3．核对血液：血液完整性、血液标签、血液质量；
4．核对取血凭证：按临床（取血凭证）实际用血品种、量进行配发血；
5．配血前，先复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型）、Rh（D）血型和抗筛，并报告其结果；
6．在电子病历或急诊医生工作站中，检查临床输血五项的执行情况；
7．输注全血、浓缩红细胞、洗涤红细胞、浓缩白细胞等患者应进行交叉配血试验，其方法：采用盐水配血试验、凝聚胺法。
二、盐水配血试验标准操