标签蛋白酶切位点.doc

氨基酸的简写符号
名 称
三字母符号
单字母符号
名 称
三字母符号
单字母符号
丙氨酸（alanine）
Ala
A
亮氨酸（leucine）
Leu
L
精氨酸（arginine）
Arg
R
赖氨酸(lysine)
Lys
K
天冬酰胺（asparagine）
Asn
N
甲硫氨酸（methionine）
Met
M
天冬氨酸（aspartic acid）
Asp
D
笨丙氨酸（phenylalanine）
Phe
F
半胱氨酸（cysteine）
Cys
C
脯氨酸（proline）
Pro
P
谷氨酰胺（glutanine）
Gln
Q
丝胺酸（serine）
Ser
S
谷氨酸（glutamic acid）
Glu
E
苏氨酸（threonine）
Thr
T
甘氨酸（Glicine）
Gly
G
色氨酸（tryptophan）
Trp
W
组氨酸（histidine）
His
H
酪氨酸（tyrosine）
Tyr
Y
异亮氨酸（isoleucine）
Ile
I
颉氨酸（valine）
Val
V

表 5 融合蛋白的剪切方法
剪切的方法
剪切位点序列
注释
化学法
溴化氰
Met^
需要70%甲酸，室温
羟胺
Asn^Gly
在pH为9条件下，需要加热，45℃
甲酸
Asp^Pro
70%甲酸，需要加热
酶法
肠激酶
Asp-Asp-Asp-Asp-Lys^
重组的蛋白酶，为内切酶，如果在赖氨酸后为脯氨酸则不能剪切，在其它的碱性氨基酸残基后有非特异性剪切，具有活性的pH范围为4.5到9.5，温度范围为4℃到45℃
凝血因子Ⅹa蛋白酶
Ile-Glu/Asp-Gly-Arg^
如果在精氨酸后为脯氨酸和精氨酸则不能剪切，为内切酶，在Gly-Arg后存在非特异性剪切
凝血酶
Leu-Val-Pro-Arg^Gly-Ser
牛来源的含有其它蛋白质，为内切酶，存在非特异性的剪切，生物素化后可用链霉抗生物素蛋白亲和层析清除
PreScission蛋白酶
Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln^Gly-Pro
GST融合的鼻病毒3C蛋白酶，为内切酶，4℃具有最优活性
rTEV蛋白酶
Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln^Gly
重组的烟草蚀纹病毒蛋白酶，具有8个氨基酸识别位点，高特异性，为内切酶，在宽的温度范围里具有活性，与His-tag融合后，酶切后使用金属螯合亲和层析清除
二肽基氨基肽酶
(Xaa)2n^Xaa-Pro, (Xaa)2n^Xaa- Xaa –Pro, (Xaa)2n^Lys/Arg/Gln
为外切酶，当终止氨基酸为Gln时，可在谷氨酰胺环转移酶和焦谷氨酰胺肽酶的作用下去掉Gln，可产生天然的目标蛋白质，特异性强