脑脊液常规检查作业指导书.doc

沭阳县人民医院检验科

临床检验室

脑脊液（CSF）常规检查
文件编号：Q-1
版本：第一版
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脑脊液（CSF）常规检查
1 检验目的
脑脊液常规检查对许多神经系统疾病及某些神经系统并发症的诊断、鉴别诊断、疗效观察及预后判断具有参考价值。
2 检测原理
一般性状检查采用目测法；蛋白定性试验采用Pandy原理(脑脊液中的球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉产生白色混浊或沉淀)；细胞学检查采用显微镜检查法。
3 标本
3.1 脑脊液标本由临床医生进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。第一管作细菌学检查，第二管作化学或免疫学检查，第三管作常规检查。
3.2 标本采集后要立即送到检验科化验室（根据检验目的的不同分送不同的检验室），一般不能超过2小时，因为放置时间过久，其性质可能发生改变，影响检验结果。采集的脑脊液标本应尽量避免凝固和混入血液。
4 设备和试剂
4.1 仪器：OLYMPUS公司的CH-2显微镜。
4.2 试剂：5%苯酚溶液；冰醋酸。
4.3 设备：Vetri-plast一次性计数板(Cod. 211710)。
5 操作步骤
5.1 一般性状检查观察脑脊液的颜色和透明度。
5.2 潘氏(Pandy)定性试验

5.2.1 取5%苯酚溶液2～3ml置于小试管内，用毛细管滴管滴入脑脊液1～2滴，衬以黑背景，立即观察结果。
5.2.2 结果判断：阴性：清晰透明，不显雾状；弱阳性：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到；阳性：有明显白色浑浊或浓絮状沉淀；强阳性：有白色絮状物凝块。
5.3 细胞计数
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5.3.1 细胞总数
对澄清的脑脊液混匀后用滴管直接滴入一次性计数板，用低倍镜计数全部方格内细胞数；混浊或带血的脑脊液可用细胞稀释液或者生理盐水稀释混匀后滴入一次性计数板内，用低倍镜计数全部方格内细胞数。
5.3.2 白细胞计数
小试管内放入冰乙酸1～2滴，转动试管使内壁粘有冰乙酸后倾之，然后滴加混匀的脑脊液3～4滴，数分钟后，混匀充入一次性计数池内，用低倍镜计数全部方格内白细胞数。
5.3.3 白细胞分类计数
直接分类法：如果白细胞数每微升不超过20，可不分类计数；如超过20应分类计数。在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单核细胞(包括淋巴细胞和单核细胞)与多核细胞，计数100个白细胞，以百分率表示。
染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液沉淀，取沉淀物2滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，进行瑞氏染色用油镜分类。如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时。
6 干扰因素
标本送检必须及时，收到标本后应立即检验，以免脑脊液凝固或细胞破坏使结果不准确。标本必须混匀后方可充池，否则影响计数结果。
因穿刺损伤血管，引起血性脑脊液，白细胞计数结果必须校正，以剔除因出血而带来的白细胞。
细胞计数时应注意新型隐球菌与白细胞、红细胞区别，新型隐球菌不溶于乙酸，加优质黑汁后可见不着色荚膜。白细胞也不溶于乙酸，加酸后白细胞核和胞质更为明显，红细胞加乙酸溶解。
白细胞计数直接数的试管或吸管中的冰乙酸要尽量去尽，否则结果偏低。若标本陈旧、细胞变形时，白细胞直接分类法误差太大，推荐用涂片染色分类法分类计数。涂片染色分类法计数时，离心速度不能太快，否则细胞形态受影响，有条件的单位可用玻片离心沉淀法、细胞室沉淀法等收集细胞。涂片固定时间不能太长，更不能高温固定，以免细胞皱缩。
脑脊液蛋白定性试验时，苯酚不纯可引起假阳性，室温低于10℃苯酚饱和度降低可引起假阴性。
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7 计算
全部方格内的细胞总数
脑脊液细胞数(106/L) = -------------------------------- × 10
9
8 生物参考值区间
正常人脑脊液为无色透明；蛋白定性试验为阴性；细胞计数无红细胞，仅有少量白细胞，成人：(0～8)×106/L；儿童：(0～15)×106/L；婴儿：(0～20)×106/L。
9 实验室解释
9.1 正常人脑脊液为无色透明；红色见于脑出血、蛛网膜下腔出血、出血性脑膜炎、穿刺性损伤。黄色见于陈旧性出血、脑肿瘤、重症黄疸或胡萝卜素血症。白色米汤样见于化脓性脑膜炎；白色毛玻璃样见于结核性或真菌性脑膜炎。绿色见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎。褐色或黑色见于中枢神经系统黑色素细胞瘤。
9.2 脑脊液蛋白定性阳性见于：中枢神经系统炎症，以化脓性脑膜炎增高为显著，结核性脑膜炎次之，病毒性脑膜炎轻度增高。脑出血时多呈强阳性反应；脑室或蛛网膜下腔出血；脑部肿瘤；其它疾病：如肺炎、尿毒症及中枢神经中毒症状等。
9.3 细胞计数增高见于 细菌性脑膜炎：细胞总数可显著升高，以中性粒细胞为主。结核性脑膜炎：细胞总数可升高，一般情况下不超过500×106/L，在起病初期，以中性粒细胞增高为主，但很快下降；后期以淋巴细胞为主；中性粒细胞、淋巴细胞及浆细胞同时存在是结核性脑膜炎的特点。病毒性脑膜炎：细胞总数轻度升高，以淋巴细胞为主。其中流行性乙型脑炎以中性粒细胞为主。真菌性脑膜炎：细胞总数可轻度升高，早期以中性粒细胞增高为主，后期以淋巴细胞为主。寄生虫脑病：可见较多的嗜酸性粒细胞。中枢神经系统肿瘤：细胞总数可正常或轻度增高，以淋巴细胞为主，有时可见肿瘤细胞。脑室及蛛网膜下腔出血及出血性脑炎，可出现均匀性的血性脑脊液，除血细胞大量增加外，在脑脊液中也出现周围血中的各种血细胞，其中大多以中性粒细胞为主。
10 异常结果处理
脑脊液常规试验结果异常需与临床诊断相符合，不符合的结果应复查。
11 报告时间与标本保存
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11.1 脑脊液常规试验4小时出结果；病房患者的检验结果报告单在24小时内发回科室。
11.2 脑脊液常规试验检查过的标本应放2℃～8℃冰箱保存24小时。
12 操作性能
本试验是一个定性试验，目前还没有试验性能指标。

编写人

审核人

生效日期
2011年11月15日