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实验八、尿生成的调节实验八、尿生成的调节影响尿生成的因素影响尿生成的因素1实验目的实验目的1.掌掌握握输输尿尿管管插插管管技技术术,学学习习尿尿量量的的记记录和测量方法;录和测量方法;2.观观察察神神经经体体液液因因素素及及药药物物对对尿尿生生成成的的影响,并分析其作用机制。影响,并分析其作用机制。2实验原理实验原理 尿生成的过程包括:肾小球的滤过、肾小管尿生成的过程包括:肾小球的滤过、肾小管和集合管的重吸收和分泌。凡是影响尿生成过和集合管的重吸收和分泌。凡是影响尿生成过程的因素均可引起尿量的改变。程的因素均可引起尿量的改变。尿生成的调节包括肾内自身调节、神经调节、尿生成的调节包括肾内自身调节、神经调节、体液调节。本实验分别对实验动物施加不同因体液调节。本实验分别对实验动物施加不同因素,观察尿量及其成分的变化。素,观察尿量及其成分的变化。3尿生成的生理基础尿生成的生理基础肾小管肾小管肾小体肾小体肾小囊肾小囊肾小球肾小球远端小管远端小管近端小管近端小管髓袢细段髓袢细段近端小管直段近端小管直段近曲小管近曲小管髓袢升支细段髓袢升支细段 髓袢降支细段髓袢降支细段 远曲小管远曲小管 髓袢升支粗段髓袢升支粗段 肾单位肾单位45原原 理:理:终尿生成滤过液(原尿)重吸收量终尿生成滤过液(原尿)重吸收量分泌(比较少,可不考虑)分泌(比较少,可不考虑)有效滤过压毛细血管压胶体渗透压囊内压有效滤过压毛细血管压胶体渗透压囊内压凡能影响上述过程的因素都可影响尿的生成,从而引起尿量的改变6有效滤过压毛细血管压胶体渗透压囊内压有效滤过压毛细血管压胶体渗透压囊内压本实验用两道同步记录本实验用两道同步记录1道记录血压道记录血压2道记录尿量道记录尿量7实验对象:实验对象:家兔家兔实验器材和药品实验器材和药品器材:器材:BL-420 生理机能实验系统、生理机能实验系统、50ml量筒、手术器械一量筒、手术器械一套、兔手术台、输尿管插管、玻璃分针、注射器(套、兔手术台、输尿管插管、玻璃分针、注射器(1ml、5ml、20ml)、压力换能器、记滴器、纱布。)、压力换能器、记滴器、纱布。试剂:试剂:生理盐水、生理盐水、20的氨基甲酸乙酯、的氨基甲酸乙酯、20葡萄糖、垂体葡萄糖、垂体后叶素、后叶素、0.01%肾上腺素。肾上腺素。8步骤步骤(一)麻醉、固定(一)麻醉、固定(25乌拉坦乌拉坦4ml/kg)(二)颈部手术(二)颈部手术1做做颈颈部部切切口口,逐逐层层分分离离皮皮肤肤、皮皮下下组组织织、肌肌肉肉(钝性分离钝性分离),),暴露气管。暴露气管。2气管插管。气管插管。3分离双侧迷走神经,穿线备用。分离双侧迷走神经,穿线备用。9(三)尿液收集方法:(三)尿液收集方法:1.输尿管插管法输尿管插管法 在在耻骨联合上缘耻骨联合上缘作作46cm正中切口正中切口(切勿伤及其下方的(切勿伤及其下方的膀胱)膀胱),剪口以能将膀胱拉出体外为度剪口以能将膀胱拉出体外为度(勿因剪口过大暴(勿因剪口过大暴露其他器官组织)露其他器官组织)。将膀胱翻至体外(将膀胱翻至体外(勿使肠断外露,以勿使肠断外露,以免血压下降免血压下降)。膀胱的正常位置是在输尿管腹面,当轻轻)。膀胱的正常位置是在输尿管腹面,当轻轻拉出并翻转膀胱时,输尿管则位于膀胱的前方。仔细辨认拉出并翻转膀胱时,输尿管则位于膀胱的前方。仔细辨认并分离一侧输尿管(并分离一侧输尿管(莫损伤伴行血管莫损伤伴行血管),各穿两条线备用,),各穿两条线备用,分别将输尿管近膀胱端结扎,在结扎线的远离膀胱端剪开分别将输尿管近膀胱端结扎,在结扎线的远离膀胱端剪开一个斜口(可先用玻璃分针探一下),把一个斜口(可先用玻璃分针探一下),把预先充满生理盐预先充满生理盐水水的细塑料管向肾脏方向插入输尿管(的细塑料管向肾脏方向插入输尿管(1cm左右),用线结左右),用线结扎固定。扎固定。10112.膀胱套管法膀胱套管法 腹部剪毛,腹部剪毛,耻骨联合上方耻骨联合上方正中剪口正中剪口3-5cm,沿腹白线剪,沿腹白线剪开腹壁,将膀胱向尾侧移至体外,辨认膀胱和输尿管开腹壁,将膀胱向尾侧移至体外,辨认膀胱和输尿管的解剖部位,用针筒抽取尿液的解剖部位,用针筒抽取尿液6ml,装入两只试管。,装入两只试管。然后在膀胱顶部选择血管较少处,作一直径约然后在膀胱顶部选择血管较少处,作一直径约1.5cm的,在其中央沿纵向剪一小切口,插入膀胱插管(或的,在其中央沿纵向剪一小切口,插入膀胱插管(或膀胱漏斗)。把切口周围的缝线拉紧,结扎固定。膀胱漏斗)。把切口周围的缝线拉紧,结扎固定。插插管口最好正对输尿管在膀胱的入口处,但不要紧贴膀管口最好正对输尿管在膀胱的入口处,但不要紧贴膀胱后壁而堵塞输尿管。胱后壁而堵塞输尿管。膀胱插管的另一端则用导管连膀胱插管的另一端则用导管连接至记滴器或刻度试管,记录尿流量。手术完毕后,接至记滴器或刻度试管,记录尿流量。手术完毕后,用温热的生理盐水纱布覆盖腹部创口。用线结扎膀胱用温热的生理盐水纱布覆盖腹部创口。用线结扎膀胱颈部,以阻断同尿道的通路。颈部,以阻断同尿道的通路。1213(四)(四)连接换能器和记滴器连接换能器和记滴器输输尿尿管管插插管管或或膀膀胱胱套套管管与与记记滴滴器器相相连连,使使引引流流出出的的尿尿液液 滴滴在在记记滴滴器器的的两两个个电电极极之之间间,构构成成一一个个完完整整的的电电通通路路,记录通道会记录下来一次尿滴。记录通道会记录下来一次尿滴。14观察项目观察项目 手术和实验装置安装完毕后,记录正常血手术和实验装置安装完毕后,记录正常血压和尿量曲线,然后依次进行下列实验,观察压和尿量曲线,然后依次进行下列实验,观察血压和尿量的变化。血压和尿量的变化。注意:每项实验前都要记注意:每项实验前都要记录尿量作为对照。录尿量作为对照。151.记录正常每分钟尿形成的滴数。记录正常每分钟尿形成的滴数。2.耳缘静脉注射耳缘静脉注射生理盐水生理盐水20ml,观察尿量的变化,观察尿量的变化3.耳缘静脉注射耳缘静脉注射1 10000肾上腺素肾上腺素0.5ml,观察其尿量变化,观察其尿量变化。4.耳缘静脉注射耳缘静脉注射20%葡萄糖液葡萄糖液10-15ml,观察尿量变化,观察尿量变化5.结结扎扎并并剪剪断断两两侧侧迷迷走走神神经经,用用连连续续单单刺刺激激其其外外周周端端,使使血血压下降,观察尿量变化压下降,观察尿量变化。6.耳缘静脉注射耳缘静脉注射抗利尿激素抗利尿激素2U(0.2ml),观察尿量变化,观察尿量变化。16结果分析结果分析1一一次次快快速速注注射射20ml生生理理盐盐水水,使使血血容容量量增增加加,会会引引起起下下列情况:列情况:(1)血血液液被被稀稀释释,血血浆浆胶胶体体渗渗透透压压下下降降,肾肾小小球球有有效效滤过压增加,肾小球有效滤过率增加,尿量增加。滤过压增加,肾小球有效滤过率增加,尿量增加。(2)血血容容量量增增加加,肾肾小小球球血血浆浆流流量量增增加加,使使尿尿液液滤滤过过增多,也促使尿液增加。增多,也促使尿液增加。(3)血血容容量量增增加加,刺刺激激左左心心房房及及胸胸腔腔大大静静脉脉容容量量感感受受器器,冲冲动动沿沿迷迷走走神神经经上上传传到到下下丘丘脑脑的的视视上上核核和和室室旁旁核核,使使抗抗利利尿尿激激素素(ADH)的的分分泌泌与与释释放放减减少少,远远曲曲小小管管,集合管对水的重吸收减少,尿液增多。集合管对水的重吸收减少,尿液增多。17结果分析结果分析2静注大剂量肾上腺素后,静注大剂量肾上腺素后,血压上升(使与外周小动脉平滑肌血压上升(使与外周小动脉平滑肌中的中的受体相结合,使之收缩)尿量减少受体相结合,使之收缩)尿量减少机制:机制:肾小球毛细血管血压高低既受全身动脉血压的影响,又受肾小肾小球毛细血管血压高低既受全身动脉血压的影响,又受肾小球入球小动脉和出球小动脉的口径比例(也就是血管平滑肌舒缩程度)球入球小动脉和出球小动脉的口径比例(也就是血管平滑肌舒缩程度)的影响,而后一种因素比前一种因素更为重要。可使肾小球入球小动脉的影响,而后一种因素比前一种因素更为重要。可使肾小球入球小动脉收缩,使肾小球毛细血管中血流量降低,滤过率减少,尿量减少。收缩,使肾小球毛细血管中血流量降低,滤过率减少,尿量减少。因此在临床上抢救休克病人,使用大剂量的肾上腺因此在临床上抢救休克病人,使用大剂量的肾上腺素时一定要注意患者尿量的变化。素时一定要注意患者尿量的变化。18结果分析结果分析320%20%葡萄糖葡萄糖4ml/Kg4ml/Kg注入后,注入后,可见尿量立即大量增加可见尿量立即大量增加 因因为为加加入入后后肾肾中中滤滤过过的的葡葡萄萄糖糖超超过过了了肾肾的的肾肾糖糖阈阈,经经肾肾小小球球滤滤出出的的大大量量葡葡萄萄糖糖不不能能被被肾肾小小管管上上皮皮细细胞胞全全部部重重吸吸收收,致致使使小小管管液液中中出出现现较较多多的的葡葡萄萄糖糖,使使肾肾小小管管液液中中的的渗渗透透压压增增加加,防防碍碍水水的的重重吸吸收收,于于是是水水随随葡葡萄萄糖糖一一起排出,尿量增加。此称为起排出,尿量增加。此称为渗透性利尿渗透性利尿。此时尿液作生化实验,可检测出此时尿液作生化实验,可检测出尿糖尿糖。19结果分析结果分析4刺激迷走神经刺激迷走神经心输出量减少心输出量减少尿量减少迷走兴奋迷走兴奋20结果分析结果分析5抗利尿激素抗利尿激素抗利尿激素抗利尿激素antidiuretic hormone,ADH来源:来源:下丘脑视上核和室旁核神经元分泌,神经垂体下丘脑视上核和室旁核神经元分泌,神经垂体 贮存、释放贮存、释放作用:作用:提高远曲小管和集合管对水的通透性;提高远曲小管和集合管对水的通透性;增加髓质组织间液的溶质浓度增加髓质组织间液的溶质浓度机制:机制:ADH V2 GS AC cAMP PKA V2 GS AC cAMP PKA 使使使使AQP-2AQP-2镶嵌在管腔膜上形成水通道,增加水的重吸收镶嵌在管腔膜上形成水通道,增加水的重吸收镶嵌在管腔膜上形成水通道,增加水的重吸收镶嵌在管腔膜上形成水通道,增加水的重吸收2122思考题:思考题:1.试分析尿生成的主要环节,讨论各因素影响尿生成试分析尿生成的主要环节,讨论各因素影响尿生成的机制。的机制。2.一次性口服大量清水和静脉大量生理盐水时,尿量一次性口服大量清水和静脉大量生理盐水时,尿量变化有何异同?其作用机制如何?变化有何异同?其作用机制如何?231.实验前给家兔喂食足量的青菜或水,否则应在手术时给予实验前给家兔喂食足量的青菜或水,否则应在手术时给予静脉补液。静脉补液。2.每一项处理因素前,要求完整对照。等前一项影响因素每一项处理因素前,要求完整对照。等前一项影响因素3.基本消失、血压和尿量基本恢复后再实施下一步新的项目基本消失、血压和尿量基本恢复后再实施下一步新的项目操作。实验项目顺序可根据实验情况做调整。操作。实验项目顺序可根据实验情况做调整。4.保护耳缘静脉。静脉注射尽量从耳缘静脉远心端开始,逐保护耳缘静脉。静脉注射尽量从耳缘静脉远心端开始,逐步向近心端移行。亦可保留耳缘静脉输液用的头皮针,方步向近心端移行。亦可保留耳缘静脉输液用的头皮针,方便静脉给药。便静脉给药。5.输尿管插管防止出血及插入夹层。输尿管手术的难度较大,输尿管插管防止出血及插入夹层。输尿管手术的难度较大,应注意防止导管被血凝块堵塞,或被扭曲而阻断尿液的流应注意防止导管被血凝块堵塞,或被扭曲而阻断尿液的流通。通。注意事项注意事项24实验项实验项目目预预期期结结果果分分 析析尿尿 量量电电刺激迷刺激迷走神走神经经外外周端周端电电刺激使迷走神刺激使迷走神经经末梢末梢释释放的放的AchAch使心使心脏脏活活动动减弱减弱,心心输输出量出量,血血压压,肾肾血流量血流量,肾肾小球有小球有效率效率滤过压滤过压,原尿原尿注射大量注射大量生理生理盐盐水水血容量血容量,血液稀,血液稀释释,血,血浆浆胶渗胶渗压压肾肾小球有效小球有效率率滤过压滤过压,原尿原尿;同;同时时通通过过多途径引起多途径引起ADHADH分泌分泌,使使远远曲小管和集合管曲小管和集合管对对水的重吸水的重吸收收;另外;另外还还引起心房引起心房释释放心房放心房钠钠素,刺激素,刺激肾肾利利钠钠利尿利尿放血放血血容量血容量,肾肾小球有效率小球有效率滤过压滤过压,原尿原尿;ADHADH分泌分泌,远远曲小管和集合管曲小管和集合管对对水的重吸收水的重吸收注射大量注射大量高渗高渗葡萄葡萄糖糖尿糖阳尿糖阳性性由于血糖由于血糖浓浓度急度急剧剧升高,大量葡萄糖升高,大量葡萄糖滤滤出,使小出,使小管液中的糖超管液中的糖超过肾过肾糖糖阈阈,大量葡萄糖不能被,大量葡萄糖不能被吸收,而提高了小管液的渗透吸收,而提高了小管液的渗透压压,阻碍了,阻碍了肾肾小管小管对对水的重吸收(渗透性利尿)水的重吸收(渗透性利尿)25实验项实验项目目预预期期结结果果分分 析析尿尿 量量注射注射NENE(小(小剂剂量)量)小小剂剂量量NANA使使肾肾出球小出球小动动脉收脉收缩缩效效应应大于入球小大于入球小动动脉,有效脉,有效滤过压滤过压,原尿,原尿(大(大剂剂量)量)大大剂剂量量NANA整个整个肾肾小球小球动动物收物收缩缩,肾肾血流量减少,血流量减少,产产生上述相反生上述相反结结果果静脉注射静脉注射ADHADHADHADH促促进远进远曲小管和集合管曲小管和集合管对对水的重吸收水的重吸收静脉注射静脉注射速尿速尿速尿(速尿(呋呋塞米)是塞米)是NaNa+泵泵的抑制的抑制剂剂,抑制,抑制肾肾小管小管对对水的重吸收,提高了小管液的渗透水的重吸收,提高了小管液的渗透压压,阻碍,阻碍了了肾肾小管小管对对水的重吸收(渗透性利尿)水的重吸收(渗透性利尿)26
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