次声作用下SD大鼠视网膜内皮素的动态表达.pdf

论著文章编号:100025404(2003)0920760203次声作用下SD大鼠视网膜内皮素的动态表达王建洲,曹 燕,惠延年,马吉献,邱 萍(第四军医大学西京医院眼科,西安710032)提 要:目的 探讨内皮素在次声作用大鼠视网膜的动态表达。方法 雄性SD大鼠放入次声舱,经16 Hz、130 dB作用2 h,1次/d,分别于1、7、14、21 d处死动物,取眼球作成病理切片。用免疫组化的方法,以未经次声作用的雄性SD大鼠作为对照,检测不同病理时期内皮素的不同表达部位。结果 次声作用1 d和对照组表现相似,均弱表达在视网膜和脉络膜血管;次声连续作用7、14、21 d后,内皮素阳性表达部位明显变化;7 d主要表达在视网膜的外段,而14 d主要表达在内段,内核层和节细胞层阳性表达加强;21 d视网膜各层表达下降。随着次声作用时间的延长,视网膜组织表现由外段向内段的损害。结论 次声作用于视网膜后,内皮素表达在损伤部位的早期,可能为对损伤的一种修复反应。关键词:次声;内皮素;视网膜;免疫组化 中图法分类号:R318.03;R322.91;R774文献标识码:AThe dynamic expression of ET21 in retina of Sprague2Dawley rats after exposure to in2frasoundWANGJian2zhou,CAO Yan,HUI Yan2nian,MA Ji2xian,QIU Ping(Department of Ophthalmology,Xijing Hospital,Fourth MilitaryMedical University,Xian 710033,China)Abstract:ObjectiveT o explore the dynamic expression of endothelin21(ET21)in retina of Sprague2Dawleyrats after exposure to infrasound.MethodsMale Sprague2Dawley rats were exposed to infrasound of 16 Hz130 dBfor 2 h everyday.The rats were sacrificed after exposure for 1,7,14 and 21 d respectively.The expression of ET21was detected by immunohistochemistry.ResultsThe expression of ET1 in retina changed after exposure for 7,14and 21 d.ET21 was expressed mainly in outer retinal segment(ORS)after 7 d and in inter retinal segment(IRS)af2ter 14 d.With the elongation of the time of exposure to infrasound,the injury in retina gradually extended from ORSto IRS.The expression of ET21 of retina was up2regulated after exposure to infrasound and changes related to the po2sition of infrasonic injury were found.ConclusionET21,as a kind of reaction to infrasonic injury,is of protectiveeffect on the retina.Key words:infrasound;endothelin;retina;immunohistochemistry 次声是一种广泛存在于周围环境、频率为01000 120 Hz的不可听到的声波,可引起多种生物学效应13。内皮素(Endothelin,ET)是一种神经修复因子,在视神经损伤中表达增强4。但在视网膜次声损伤的作用却未见报道。本研究讨论内皮素在视网膜组织次声损害中的作用。1 材料和方法111 材料 雄性SD大鼠25只,体质量200250 g,随机分为5组,每组5只,对照组不进行次声作用,实验组每日放于次声舱中 基金项目:国家自然科学基金资助项目(39900162)作者简介:王建洲(1964-),男,河北省定州市人,硕士研究生,医师,主要从事视网膜脱落和眼外伤方面的研究。电话:[phone] 收稿日期:2002212220;修回日期:2003202228以16 Hz,130 dB作用2 h,分别于1、7、14、21 d处死动物,摘取眼球,用40 gL-1多聚甲醛固定30 min,4。经脱水、透明和浸蜡,制成5 mm厚的切片,贴附于用多聚赖氨酸涂片的玻片上。次声压力舱及次声测量系统系本校西京医院与中国科学院声学所及航天工业总公司第41所协作研建。112 方法 抗体和试剂:ET21兔抗鼠单克隆抗体、S2ABC试剂盒、DAB试剂盒(均为博士德公司提供)。免疫组织化学染色:切片浸入715 ml/L H2O22PBS,37,30 min,封闭内源性过氧化物酶;正常羊血清封闭消除非特异性染色;滴加ET21兔抗鼠单克隆抗体(1200),湿盒4 过夜,漂洗5 min3次;滴加生物素化鼠抗兔IgG(1200),湿盒37 孵育30 min;滴加SABC复合物,37 孵育30 min;DAB显色,显微镜下观察,水洗中止反应;苏木精复染,脱水,透明,封固。以未经次声作用的SD大鼠的视网膜作为对照,并设有PBS替代第一抗体的空白对照和正常羊血清替代一抗的替代对照。067第25卷第9期2003年5月第 三 军 医 大 学 学 报ACTAACADEMIAEMEDICINAEMILITARISTERTIAEVol.25,No.9May.20032 结果 以未经次声作用的雄性SD大鼠的视网膜作为对照,ET21主要弱表达在视网膜血管和脉络膜血管内皮,单层视网膜色素上皮细胞无表达,核呈圆形。视网膜各层组织致密,见图1。次声1 d的大鼠视网膜病理切片染色无改变,但7 d视网膜表现为视网膜色素细胞淡染,核距扩大,散在椭圆形核。在色素上皮和外核层之间,出现了一个棕色带,位置相当于视杆与视锥层的外节,见图2。14 d视网膜色素上皮层可见散在的梭形阳性细胞,视杆与视锥层的外节棕色带消失代之以空泡;外核层、外丛状层和内核层见较多的阳染细胞,内丛状层阳染加重,并可见少量空泡;节细胞层阳性染色加强,并可见大量阳性染色的细胞,见图3。到21 d,视网膜各层阳性染色变淡或消失,代之以内丛状层空泡增多,视网膜色素上皮细胞核梭形改变明显,但仍有阳性染色;节细胞层细胞稀少并有空泡;与对照组相比视网膜各层结构松散,见图4。图1 未经次声作用的SD大鼠视网膜(SABC200)Fig 1The retina of SD rat without exposure to infrasound(SABC200)图2 次声作用7 d的SD大鼠视网膜(SABC400)Fig 2The retina of SD rat exposed to infrasound for 7 d(SABC400)图3 次声作用14 d的SD大鼠视网膜(SABC400)Fig 3The retina of SD rat exposed to infrasound for 14 d(SABC400)图4 次声作用21 d的SD大鼠视网膜(SABC400)Fig 4The retina of SD rat exposed to infrasound for 21 d(SABC400)3 讨论 次声主要是以其特殊的生物共振效应造成机体损伤,次声作用后可引起中枢神经系统功能紊乱和结构损伤,神经元可出现核形态及神经纤维突起改变,有神经元死亡及小胶质细胞浸润等。在次声一定强度范围内,频率越高,生物效应越明显。声压级大于120 dB时反应阳性神经元明显增多,而且16 Hz次声对脑的作用效应大于8 Hz次声5。邱萍等6用8 Hz、130 dB次声对SD大鼠的视电生理检测发现,ERG2a波、b波振幅下降,OPs的振幅随着次声暴露时间的延长,振幅下降随之增多。内皮素由21个氨基酸残基组成,与蛇神经毒素有相类似区域,因此与神经系统关系密切,ET21是其同源异构体之一7。内皮素在视网膜主要存在于血管中。在很多眼病,内皮素分布的浓度随各种眼病和组织损伤而有变化8,9。内皮素是一种神经修复因子。Udono等10的视网膜色素上皮细胞体外培养,在缺氧时,视网膜色素细胞分泌内皮素。Miyata11的体外实验证明ET21通过受体有效地抑制了由肾上腺素诱导的垂体细胞向星状细胞转化;Rogers等4的研究发现,损伤后兔和鼠中枢的胶质细胞的ETB(Endothelin B)受体浓度明显增多。作为对神经损伤的反应,ET受体可调节胶质细胞的增殖和胶质细胞释放神经营养因子,说明ET对神经系统的稳定有促进作用。从本实验结果可以看出,在未经次声作用的SD大鼠,内皮素主要弱表达在视网膜血管组织。次声作用后,内皮素在视网膜各层开始表达,并随着作用的时间和组织的损害而发生改变。提示内皮素伴随损伤而诱导和分泌,随着损伤的加重在同一组织中表达下降,可能与其神经保护作用相关。参考文献:1 Cui F,Ren YS,Li L,et al1Effects of 8 Hz infrasound with different in2tensity on glutathone peroxidase and superoxide dismutase activities andmadlondialdehyde contents in ratsJ 1J Fourth Mil Med Univ,1999,20(9):743-74412 Zhang J B,Jia K Y,Li L,et al1Infrasound changes hemorheological per2formance in ratsJ 1J Fourth Mil Med Univ,2001,22(5):465-4671167第9期 王建洲,等.次声作用下SD大鼠视网膜内皮素的动态表达 3 Fei Z,Zhang X,Wang X F,et al1The changes and significance of blood2brain barrier permeability after infrasound damage in ratsJ 1J Fourth MilMed Univ,1999,20(8):678-78014 Rogers S D,Demaster E,Catton M,et al1Expression of endothelin2B re2ceptors by gliain vivois increased after CNS injury in rats,rabbits,andhumansJ 1Exp Neurol,1997,145(1):180-19515 Fu G Y,Chen J Z,Jia K Y1Changesof glutamate in brain of rats exposedto infrasoundJ 1J Fourth Mil Med Univ,1999,20(4):288-29016 Qiu P,Guo S Y,Zhang ZM,et al1Effect of infrasound on ocular electro2physiology of ratsJ 1J Fourth Mil Med Univ,1999,20(7):583-58617 Bhatt A D1Endothelins and anti2endothelinsJ 1Curr Pharm Des,2001,7(6):461-47418 Wollensak G,Schaefer H E,Ihling C1An immunohistochemical study ofendothelin21 in the human eyeJ 1Curr Eye Res,1998,17(5):541-54519 Deng D,Evans T,Mukherjee K,et al1Diabetes2induced vascular dys2function in the retina:role of endothelinsJ 1Diabetologia,1999,42(10):1228-1234110 Udono T,Takahashi K,Nakayama M,et al1Induction of adrenomedullinby hypoxia in cultured retinal pigment epithelial cellsJ 1Invest Ophthal2mol Vis Sci,2001,42(5):1080-1086111 Miyata S,Furuya K,Nakai S,et al1Morphological plasticity and rear2rangement of cytoskeletons in pituicytes cultured from adult rat neurohy2pophysisJ 1Neurosci Res,1999,33(4):299-3061(编辑 郭建秀)个案与短篇文章编号:100025404(2003)0920762201心脏瓣膜置换术后PT INR测定监测口服抗凝剂的研究Research of PT INRassay during monitoring oral anticoagulants after cardiac valve re2placement张晓兵1,郭 辉1,刘泽军1,颜 坤2(第三军医大学附属西南医院:1检验科,2胸心外科,重庆400038)心脏瓣膜置换术后的患者需要终身服用抗凝剂华法林,以预防血栓栓塞性疾病的发生。华法林使用原则是要在实验室监测下服用。监测指标是血浆凝血酶原时间(Prothrombin time,PT),经验认为,华法林的合适用量应当是病人PT为正常对照的1.52.5倍。由于实验室使用设备和PT试剂质量的不同,使得患者在不同医院测定的结果相差悬殊,给治疗带来极大的混乱。近年来均采用国际标准化比值(Intertional normalized ra2tio,INR),可避免由于试剂上的差异带来的检测结果的差异1。为此,该研究对我院收治的心脏瓣膜置换的患者服用华法林和PT监测的情况进行了总结,现报告如下。1 资料和方法 所有病例均选择于在我院手术并长期随访治疗的风湿性心脏瓣膜病的患者108例。均使用机械型瓣膜。男性37例,女性71例,年龄1972岁,手术后治疗时间0.54年。所有病例都是经过4周左右时间调整,华法林治疗进入维持阶段的患者。服用华法林维持剂量为0.610.0 mg/d。上述患者临床上无血栓栓塞形成的迹象和无出血倾向,为药物剂量使用合适者。PT测定使用法国Stago公司生产的进口试剂,国际敏感指数(International sensitivity index,ISI)为1.3。使用仪器为法国Sta2go公司生产的STA Compact型,采用凝固法(磁珠法)进行测定。参比血浆由该公司提供。PT INR允许范围的确定是据临床情况而定:抗凝药进 作者简介:张晓兵(1973-),男,四川省宣汉市人,硕士,医师,主要从事甲基化方面的研究。电话:[phone] 收稿日期:2002204209;修回日期:2002212225入维持服用期;临床上无栓塞现象;临床上无出血倾向;临床上无肝脏功能损害。此时所检测的PT INR值,称为PTINR允许范围。统计学处理:不同组别之间的数据采用t检验。2 结果211 不同性别和年龄组患者治疗中PT INR值的比较 女性患者PT INR允许范围要比男性患者小(P 0.05),见表1。表1 性别、年龄对PT INR允许范围的影响(?xs)组 别nPT INR允许范围性别男性371.960.563女性711.810.59年龄35岁381.940.593654岁561.920.5755岁141.830.523:P 0.01与女性相比较212 瓣膜置换术后病程与华法林用量及PT结果的比较 见表2。表2 病程对华法林用量和PT的影响(?xs)组别n华法林用量(mg/d)PT INR允许范围PT时间(s)1年583.320.981.850.6219.684.362年383.531.261.900.5819.934.534年123.962.892.040.6620.655.64(下转766页)267第25卷第9期2003年5月第 三 军 医 大 学 学 报ACTAACADEMIAEMEDICINAEMILITARISTERTIAEVol.25,No.9May.2003