生物污染控制——总则(洁净室及相关受控环境国际标准中文版正文.doc

ISO 14644.4洁净室及相关受控环境国际标准中文版附录H(二)
中国GMP 2010年修订版本(一)
Jul 14
ISO 14698.1生物污染控制——总则(洁净室及相关受控环境国际标准中文版正文)
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序言
本文描述的原理用于推行适宜的卫生做法。只要有规定要求，可使用标准所附附件中建议的方法，但是建议的方法要与具体规定的方法相当。
１　范围
　　本标准描述了洁净技术使用时评估与控制生物污染的正式系统的原则和基本方法，使危险区内的生物污染得以被反复监控以及选择适当的控制方法。在危险性小或可忽略不计的区域，本标准可作为参考。
２　参考标准
　　以下标准含有通过本文文字的参比形成本标准条款的内容。出版的时候，当时提到的各版本是有效的。所有标准都会有修改，希望以本国际标准为准的缔约方了解是否可以采用以下最新版本的标准。IEC和ISO成员要对当前有效的国际标准做好记录。
    ISO8402：质量管理与质量保证-词汇
3 定义
    为进一步明确本标准的术语在洁净室及其相关控制环境系列文件中的标准定义增加了额外的说明文字（如：微生物的，生物污染，有生命的）。以下定义适用于本标准：
    3．1
    3．1．1
    行动限量（action level）
    规定了用户根据控制环境庙宇的微生物限量。
    注：当超过行动限量时，需立即采取行动并了解后续的纠正措施。
    3．1．2
    空气生物污染（aerobiocontamination）
    空气和/或气体受到活粒子的污染。
    3．1．3
    报警限量（alert level）
    规定了用户为控制环境庙宇的微生物限量，发出可能偏离正常条件的早期警告。
    注：超过报警限量时，应进行调查以确保过程和/或环境得到控制。
    3．1．4
    生物气溶胶（bioaerosol）
    在气体环境中弥散的生物介质（如：活粒子，过敏素，毒素或微生物原）
    3．1．5
    生物污染（biocontamination）
    材料、器件、个体、表面、液体、气体或空气受活粒子的污染。
    3．1．6
    洁净室（cleanroom）
    空气悬浮粒子浓度数量要受到控制的房间，其建造和使用方式是为了减少粒子带入房间和在房间内产生和滞留，并且必要时其它相关参数（如：温度，湿度和压力）要得到控制。
    3．1．7
    接触装置（contact device）
    专用容器，用于装放灭菌后的培养基，带有可维护表面。
    3．1．8
    接触盘（control plate）
    接触装置，其容器是一个硬盘。
    3．1．9
    控制点（control point）
    控制环境内实施控制的任意点，在该点上可防止、消除生物污染危险或将危险减至合格的标准。
    3．1．10
    控制环境（controlled environment）
    采用指定手段对污染源实施控制的规定区域。
    3．1．11
    改正措施（corrective action）
    生物污染监控结果表明已超出报警或行动限量时要采取的措施。
    3．1．12
    危害（hazard）
    对个人、环境、工艺或产品产生不利影响的生物、化学或物理成分或因素。
    3．1．13
    碰撞（impact）
    活粒子与固体表面的碰撞。
    3．1．14
    冲击（impingement）
    见液体分离。
    3．1．15
    液体分离：冲击（liquid trapping: impingement）
    活粒子与液面碰撞，液体随后进入。
    3．1．16
    鉴定（qualification）
    展示实体是否能满足指定要求（实体：活动、或工艺、产品、组织或其组合）的过程（ISO 8402）
    3．1．17
    危险（risk）
    有关危害的已知有害结果发生的可能性。
    3．1．18
    沉降盘（settle plate）
    指敞开一段时间的合适的容器（如：装载适量灭菌培养基的、大小适当的培养皿）。
    3．1．19
拭子（swab）
经过灭菌的采集装置，对正在采样的微生物的生长无毒性、无抑制性，由适当尺寸的特定材料构成，装在固定装置上。
3．1．20
涂拭（swabbing）
用拭子对指定表面涂拭进行采样，拭子要用适当的萃取液（洗脱液）预先浸湿，以探测活粒子。
3．1．21
目标限量（target level）
由用户自定的指定微生物限量。
3．1．22
验证（validation）
检查和提供客观证明，表明特定用途的特殊要求得到满足，以此实现确认（ISO 8402）
3．1．23
确认（verification）
定期检查正式系统是否按要求工作。
注：可采用监测和审查方法、规程与试验的方式，包括随机采样与分析，以确定正式系统是否正确地工作。
3．1．24
活粒子（viable particle）
能够繁殖产生可观察到生长的、孤立的、自然发生的或累积的微生物。
3．1．25
活单位（viable unit）（VU）
一个以上集结的活粒子可算为一个单位。当琼脂培养基生成一些被称为菌落的VU时，通常将它们称为菌落形成单位。
3．1．26
危险区（zone at risk）
个人、产品或材料（或以上内容的任意组合）极易受微生物污染的地理定义与界定的空间。
3．2  使用状态
3．2．1
空态（as-built）
此状态为安装已达到完成了各动力管线的连接并能发挥作用、但无生产设备、材料或人员。
3．2．2
静态（at-rest）
此状态为设备已安装并能按用户与供应商之间达成的协议运行，但无人员进入。
3．2．3
动态（operational）
此状态为安装已按指定方式发挥作用，指定数量的人员已经进入并以约定的方式工作。
4  生物污染的控制原则
    建立、使用和维护正式系统，以便在洁净室和相关控制环境下评估和控制洁净室和相关控制环境下的各因素，并影响工艺和产品的微生物质量。
    实现这一目标有一些公认的办法，比如危险评估[1：2]，如危害分析临界控制点（HACCP）系统[3：4]，故障树分析（FTA）[5]，或故障方式与效果分析（FMEA）[6]。也可使用其它经确认的同等系统[7]。
     注：根据HACCP原则修改的系统举例以作参考[8]。
    在这样的系统内部，可对具体危害及其控制的预防措施进行分析、确定和文件编制。本标准只论述了微生物的危害。
    为了评估和控制微生物的危害，选定的系统至少要涉及以下原则：
    a)  发现与工艺、产品或个人相关的可能危害。评估发生危害的可能性，找到对其控制的预防措施。
    b)  指定危险区，在每个区内，确定可被控制的点/过程/操作步骤/环境条件，以消除危害或减少其发生的可能性。
    c)  规定不允许超出的限量，以保证控制。
    d)  规定有计划进行试验或观察，以监视控制系统。
    e)  规定当监控表明在某个点/过程/操作步骤/环境条件失控时要采取的改正措施。
    f)  建立确认系统正常工作的规程。
    g)  建立并保存适当的文件。
5一般要求
    用户有责任开发、启用、实施生物污染控制的监控系统并对其进行文件编写，以便及时发现不利条件。这样的计划必须符合应用现场、具体设施和指定条件，该系统必须是质量管理系统的组成部分。这要包括对选定的正式系统进行适当的培训（有关生物污染的具体建议，请看附件H）。
    此外，生物污染控制计划的设计与实施要做到减少采样本身造成产品和/或危险区污染的可能性。
    危险区的分类应按相关的原则或规定实施。按生物污染程度进行的危险区分类可按以下情况评估：
    -  低等危险或可忽略危险；
    -  中等危险；
    -  高危险；
    -  最高危险。
    本标准不意味也不接受空气悬浮细菌和粒子污染等级之间的直接恒定或因果联系。如果两个参数的目标等级是指定或强制的，可能需要单独控制。
5．1  生物污染的分析与测量
    生物污染可构成危害的方面有表面、空气、液体、织物等（见附件B，D，E，F）。
    危险区如果采用了洁净技术，其探测与监控要按采样计划采用适当方法通过采样和计数活单位来实施。
    当设施为空态、静态或随时可用状态时，要进行危险区的监控。在动态时也要按选定的正式系统进行常规监控。（见4）
5．2  采样
    以下为采样的一般原则，详情见附件A。
5．2．1  采样计划
    采样计划通过选定的正式系统编写，并作为文件式的程序格式化。这对于准确评估和解释生物污染数据是必要的。
    区域处于动态时要进行采样，采样时间在系统的压力最大时（即：一班就要结束或活动量最大时）。
    在静态或随时可用状态时采样也可有关于设施言教性能方面的有用信息。
    采样计划应包括以下内容：
    a)  为在选定的正式系统的框架内提供参考的初期采样计划
    b)  由于实施选定的正式系统产生的常规采样计划
    5．2．2  采样计划的设计
    为了保护个人、环境、工艺和产品，采样计划要考虑危险区的洁净度和正在进行活动要求的生物污染控制程度。现就要考虑的内容举例：
    a)  现场选择，功能和地理方面；
    b)  采样数量；
     注：有限或很少的采样量可能不足以提供有代表性数据，但有时增加采样次数可以弥补不足。
     c)  采样次数；
    d)  采样方法，包括试样是质量上的还是数量上的；
    e)  采样量/面积；
    f)  稀释剂，冲洗液，中和剂等；
    g)  与影响培养结果特殊情况有关的因素；
    h)  危险区内操作、人员和设备的影响，它们构成的生物污染如：
1） 压缩气体；
2） 房间空气；
3） 制造设备；
4） 监控测量装置；
5） 存储容器；
6） 区内人员数；
7） 人员的未保护表面；
8） 个人打扮；
9） 防护服
10）墙壁/吊顶
11）地面
12）门
13）工作台
14）椅子
15）从其它来源进入的空气
5．2．3  采样次数
采样次数应通过选定的正式系统（见4）制定，并且必要时遇到以下情况要经过确认和/或修改：
    a)  结果超过报警限量或行动限量
    b)  延长了活动的停顿时间
    c)  在危险区发现了感染剂
    d)  在工作期内对通风系统进行重大维护
    e)  工艺变化影响到环境
    f)  记录到非常规结果
    g)  清洗或消毒程序有变化
    h)  非计划事件引起生物污染
5．2．4  采样点
    采样点的确定要通过选定的正式系统，并要反映在采样计划内。
    注：每个点的可能采样在一次以上，在不同位置采样次数可能不同。
    在书面规程确定的点进行采样。
5．2．5  采样区分
    每个采样的标签要有以下信息或可进行信息追溯的编码：
    a)  采集点
    b)  采集日期与时间
    c)  采样人员
    d)  采样时进行的活动
    e)  采样区分及（如果合适）培养基类型
    f)  与采样计划不同之处
5．2．6 方法
    要选择和采用适当的采样方法和有关孝顺，以反映情况的复杂性和变化。采样选用的设备和方法要符合书面规程和设备厂家提供的要求。
5．3  采样的处理
    样品的采集、运输和处理不应影响被采集细菌的活性和数量。要考虑的因素：
    a)  运输/存放条件和时间
    b)  中和剂的使用
    c)  渗透溶质的使用
5．4  样品的培养
    要根据预期的微生物种类及采样的环境以及视使用的规程和设备情况选择适当的培养基和/或培养条件（如：温度、时间长度、氧张力，相对湿度）。
5．4．1  培养基
    细菌和真菌的培养基应为标准型，如无另外要求，则为非选择型。培养基要有适当的添加剂，以便当采样点有残留的抗菌活动时（如：清洗/消毒程序后或它们在上述控制环境下经过处理所带的抗菌素）可以克服或减少影响。
    如果在洁净室或相关环境中使用培养基，培养基容器的外表面应保有与其用途相适应的洁净度。
     注：根据使用现场的情况，可能需要双层或三层外包。
    要保证对使用的培养基采用适当的质量控制规程。
5．4．2  培养
    根据采样的环境条件、培养基特性和微生物方法的确认情况，应为预期的微生物选择接种培养基的适当培养温度和时间。
注1：如果涉及到厌氧、耐热、微氧性、营养缺乏或需要复杂营养的细菌和真菌，可能需要特定的大气条件和/或延长培养时间。一般公认的培养总时间是，细菌5天，真菌7天，特别是在VU数很低时。从第一天开始就应观察培养皿。
注2：经过适当培养条件下的初步培养，对于中温细菌，并根据采样环境，在室温和日光条件下延长3天的培养期可能是明智的。已经得到证明，这样做可以使曾经暴露于空气和表面的受力细菌复活，以获得再次形成菌落的条件。
5．5  评价
    生物污染的评价应有有效改正措施的足够信息。有关生物污染数据评价的详细资料见ISO 14698-2。
注：评价整体生物污染是对危险区的重要控制功能。可用监控间接指标来监控微生物污染。但是，应当注意到，这样的指标与生物污染之间可能没有直接的关系，因此，仍然要靠验证和确认来对生物污染进行直接的预测。
5．5．1  计数
    控制环境的细菌监控可包括空气、流体、表面、织物和设备细菌污染的鉴定，以便在短时间内及时获得到细菌状态的代表性预测。一般认可的做法是，与对其它微生物试样相同，对生物污染的预测可受到实施该试验使用的仪表与规程的影响。因此从采样中计数活粒子只能在经过适当的培养后以经过确认的适当方法实施。
    计数活粒子的信息见相应的文件[13：14]
5．5．2  特征化
    细菌监控不可能对控制环境[7]中全部细菌污染进行鉴别和量化。对生物污染数据的评价包括对采样获得的策生物进行适当的特征化。特征化的程序取决于采样区的临界性或者调查是否能保证深入鉴别。将微生物分成几大类（如按照菌落或细胞组织，污斑形成特性或其它特点分类）就足够了。实施时，对相关微生物的鉴别可采用规定的微生物的实验室方法至少做到属类鉴别。鉴别临界区的撮物要优先于对非临界区的微生物鉴别。
注：鉴别控制环境分离出的活粒子可能有助于特定危险区事先想到的普通菌群，以及清洗消毒程序、方法和制剂的效果。由鉴别程序收信的信息还可用于调查污染源，尤其是超过行动限量或在做决策时。
6  目标、报警和行动限量
   建议对危险区环境中通常存在的菌群要有数、质量上的了解，以便对个人、工艺、产品或设备的污染危险做出判断，及进行有意义的难和采取改正措施。
    目标、报警和行动限量应由洁净室和/或控制环境的用户独立制定。应根据危险区的等级划分和使用现场具体的要求，指定适当的生物污染限量。该限量采用控制环境的当前技术应很容易得到。
注：在控制环境的起动初期，及根据正式系统确定的间隔期间内，应审议关于生物污染水平的数据，以制定和/或确定报警与行动限量的基线。该限量应与目标限量有关，但也应对它们进行审议并做出适当调整。
7  效果的表达与解释
    生物污染的数量预测完成后，液体的每份采样（或计数单位）的活实体（单位）数用活体单位（VU）来表达，或者如果采用菌落计数、以菌落形成单位（CFU）来评估，则推广到SI测量单位（如ｍ3，dｍ2，m，等）。数据评价的有关资料见ISO 14698-2。
    由于细菌环境监控方法存在公认的限制，对生物污染的审议要延长时间，以决定趋势是否确定。随后可根据以上趋势评价和解释控制环境的生物污染状态。根据对以上调查和具体生物试验结果的审议，对因要求产生的结果的重要性和操作或按该条件加工的产品的可接受性做出决定。
    危险区的微生物分类要按总生物污染的目标限量确定进行，这包括了空气、流体、表面、织物和设备的细菌含量。
8  验证
    根据4ｆ，要定期检查监控生物污染的结果，以确认选定的系统按规程发挥作用，以及指定的要求得到了满足。这样做可能要增加试验及对各项工作步骤和设备进行系统的验证，以保证系统具有良好的功能。
    如果难表明偏离了规定限量，或者控制环境的微生物状态起了变化，应实施改正。必要时要修改系统。
9  鉴定、认证和再认证
    对选定的系统进行鉴定是认证过程的一部分。
注：有关微生物认证的方法资料见[15：16]
10  文件
     文件应包括或参阅以下内容：
a） 采样类型；
b） 使用的试验方法，以及必要时提供标准的编号和标题；
c） 使用的采集装置；
d） 采样点；
e） 采样时进行的活动类型，包括人员进入状态；
f） 视情况可提供采样区内人数；
g） 采样日期及必要是时采样时间；
h） 视情况提供采样用时；
i） 采样查验日期；
j） 培养的条件和时长；
k） 与所说试验方法不一致的地方和可能已影响到结果的因素；
l） 初次和末次读出后采集标本检查的试验结果；
m） 完成数量试验后，VU数要推广到相应的SI测量单位；
n） 如果已特征化，要有提取物的说明；
o） 负责试验报告的组织名称和试验完成日期；
p） 负责试验的人员姓名和签字。