考点一微生物的分离与培养.doc

专题二　微生物的培养与应用 知识默写
1.培养基
(1)概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质。
(2)营养组成：一般都含有 。此外，还需要满足微生物生长对 、 以及特殊营养物质的要求。例如：
培养乳酸菌时需在培养基中添加 ；培养霉菌时需将培养基的PH调至 ，培养细菌时需将培养基调至
(3)种类：按照物理性质可分为 培养基和 培养基。
2.无菌技术
(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止 的方法。
(2)不同对象的无菌操作方法(连线)

3.大肠杆菌的纯化培养
(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
→→ → →
(2)纯化大肠杆菌的方法
①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由 细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤是 。
③常用的微生物接种方法有两种
a. ：是通过接种环在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。（注意：在操作的第一步以及每次划线之前要
接种环；在做第二次及其后的划线操作时，要从上一次划线的 开始划线）
b. ：是将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。（注意：涂布平板的所有操作都应在 进行）
(3)菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以采用 的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用 的方法。

4、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到 作用。
（2）将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作

(3)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 法（统计的菌落数一般比活菌的实际数 ）； 也是测定微生物数量的常用方法；为保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板计数
(4)实验流程：土壤取样→ →微生物的培养与观察→细菌的 。
（5）鉴定：分解尿素的细菌：在以 为唯一氮源的培养基中加入 ，如果PH升高，指示剂将
5、分解纤维素的微生物的分离
(1)纤维素酶作用的原理

纤维素

(2)纤维素分解菌的筛选
①原理
　　　　　　　　 纤维素分解菌
　　　　　　　　　　　 ↓
→ 红色消失，出现
②筛选方法： 法，即通过 来筛选纤维素分解菌。
③培养基：以 为唯一碳源的选择培养基。
④实验流程
土壤取样→ 选择培养→　 →涂布平板→挑选菌落
⑤鉴别：纤维素酶发酵方法有 和
测定：对产生的 进行定量的测定

专题二　微生物的培养与应用 知识默写
1.培养基
(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。例如：
培养乳酸菌时需在培养基中添加 维生素 ；培养霉菌时需将培养基的PH调至 酸性 ，培养细菌时需将培养基调至 中性或微碱性

(3)种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。
2.无菌技术
(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
(2)关键：防止外来杂菌的入侵。
(3)不同对象的无菌操作方法(连线)

3.大肠杆菌的纯化培养
(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
①操作步骤
→→→→
②倒平板的方法及注意事项

a.请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
b.甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
c.丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。
(2)纯化大肠杆菌的方法
①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。
②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。
③常用的微生物接种方法有两种
a.平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。（注意：在操作的第一步以及每次划线之前要
灼烧 接种环；在做第二次及其后的划线操作时，要从上一次划线的 末端 开始划线）
b.稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。（注意：涂布平板的所有操作都应在 火焰附近 进行）系列稀释操作(如下图所示)：

涂布平板操作(如下图所示)：

(3)菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
考点二　微生物的筛选和计数

1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
（2）将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称作
选择培养基
(3)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。（统计的菌落数一般比活菌的实际数 低 ）； 显微镜计数 也是测定微生物数量的常用方法为保证结果准确，一般选择菌落数在 30--300 的平板计数
(4)实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
（5）鉴定：分解尿素的细菌：在以 尿素 为唯一氮源的培养基中加入 酚红指示剂 ，如果PH升高，指示剂将 变红
2.分解纤维素的微生物的分离
纤维素酶作用的原理
C1酶

、CX酶

纤维素 纤维二糖 葡萄糖苷酶。 葡萄糖
(2)纤维素分解菌的筛选
①原理
　　　　　　　　纤维素分解菌
　　　　　　　　　　　↓
→红色复合物红色消失，出现透明圈
②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。
④实验流程
土壤取样→ 选择培养→　梯度稀释→涂布平板→挑选菌落
⑤鉴别：纤维素酶发酵方法有 液体发酵 和 固体发酵
测定：对产生的葡萄糖进行定量的测定