rhIL⁃11联合利妥昔单克隆抗体对免疫性血小板减少症患者NK细胞、色氨酸代谢的影响.pdf

分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7论著基金项目：河北省卫计委医学科学研究重点课题计划（20181197）作者单位：秦皇岛市第一医院血液内科，河北，秦皇岛 066000通信作者：李峰敏，Email：rhIL11联合利妥昔单克隆抗体对免疫性血小板减少症患者NK细胞、色氨酸代谢的影响于艺冰张琳孔艳王晶陈晨李峰敏摘要 目的探究重组人白介素11（rhIL11）联合利妥昔单克隆抗体对免疫性血小板减少症患者 NK 细胞、色氨酸代谢的影响。方法选取 2018 年 1 月至 2022 年 3 月于秦皇岛市第一医院接受治疗的免疫性血小板减少症患者 136 例，按照随机数字法分为抗体治疗组（利妥昔单克隆抗体）和联合治疗组（rhIL11 联合利妥昔单克隆抗体）各 68 例。检测并对比两组患者 干扰素（INF）、白细胞介素4（IL4）水平、T 淋巴细胞亚群（CD4+、CD8+）水平、NK 细胞、Bright 亚群、Din 亚群数量、血清色氨酸、犬尿氨酸浓度，对比两组患者治疗有效率和不良反应率。结果与抗体治疗组相比，联合治疗组患者 INF 水平较低，IL4 水平较高，差异有统计学意义（t=3.149、2.680；P0.05）；与抗体治疗组相比，联合治疗组 CD4+水平较高，CD8+水平较低，差异有统计学意义（t=12.090、8.838；P0.05）；与抗体治疗组相比，联合治疗组 NK 细胞、Bright 亚群、Din 亚群数量较多，差异有统计学意义（t=5.310、2.276、5.995；P0.05）；与抗体治疗组相比，联合治疗组患者血色氨酸水平较低，犬尿氨酸水平较高（t=11.600、2.120；P0.05）；与抗体治疗组相比，联合治疗组治疗总有效率上升（P0.05）。结论使用 rhIL11 联合利妥昔单克隆抗体能够改善免疫性血小板减少症患者 T 淋巴细胞亚群、NK 细胞及其亚群水平，效果显著。关键词 重组人白介素11；利妥昔单克隆抗体；免疫性血小板减少症；色氨酸Effects of rhIL11 combined with rituximab on NK cells and tryptophan metabolism inpatients with immune thrombocytopeniaYU Yibing，ZHANG Lin，KONG Yan，WANG Jing，CHEN Chen，LI Fengmin（Department of Hematology，the First Hospital of Qinhuangdao，Qinhuangdao，Heibei，China，066000）ABSTRACTObjectiveTo investigate the effect of recombinant human interleukin11（rhIL11）combined with rituximab on NK cells and tryptophan metabolism in patients with immune thrombocytopenia.MethodsA total of 136 immune thrombocytopenia patients treated in the Qinhuangdao First Hospital fromSeptember 2018 to September 2022 were divided into the antibody treatment group（rituximab monoclonal antibody）and the combination treatment group（rhIL11 combined with rituximab monoclonal antibody）according to random number method，and 68 cases were selected.In the two groups of patients，interferon（INF），interleukin4（IL4），T lymphocytes（CD4+，CD8+），NK cells，Bright，Din number，serum tryptophan，canine urenine concentration to compare the treatment response rate and adverse reaction rate of the two groups.ResultsCompared to the antibodytreated group，Patients in the combination treatment group had lower INFlevels，the higher level of IL4，the difference was statistically significant（t=3.149，2.680；P0.05）.Compared with the antibody treatment group，the combined treatment group had higher CD4+levels and lowerCD8+levels，with statistically significant differences（t=12.090，8.838；P0.05）.Compared with the antibody therapy group，the combination therapy group had a higher number of NK cells，Bright subgroups，andDin subgroups，with statistically significant differences（t=5.310，2.276，5.995；P0.05）.Compared to the 1261分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7antibodytreated group，Patients in the combination treatment group had lower blood tryptophan levels，highurine level（t=11.600，2.120；P0.05）.Compared with the antibody therapy group，the total effective rate ofthe combination therapy group increased（P0.05），具有可比性。纳入标准：所有患者均经本院骨髓检查及临床排它确诊为免疫性血小板减少症，诊断标准符合张之南血液病诊断及疗效标准第 2 版6；所有患者发病时血小板计数低于 30109/L。排除标准：有活动性感染患者；合并乙肝、丙肝等感染患者；依从性差者。所有患者及家属对本研究均知情，并签署知情通知书。本研究经秦皇岛市第一医院伦理审批委员会审批通过，伦理审批号为（2018）伦审第（10）号。1.2方法1.2.1治疗方法两组患者均根据发病情况给予糖皮质激素或丙种球蛋白紧急治疗，抗体治疗组在紧急治疗后给予利妥昔单克隆抗体进行治疗：每次注射 375mg/m2，每周一次。联合治疗组在抗体治疗组的基础上加用 rhIL11：rhIL11 2 400 万 U/d，皮下注射，当患者血小板升至 100109/L 时停药，观察指标。1.2.2干扰素（gamma interferon，INF）、白细胞介素4（interleukin4，IL4）、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平检测使用散射比浊法检测 INF、IL4 水平；使用间接法检测 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平：用离心机 2 000 r/min 的转速，离心 5 min，离心半径为10 cm。收取患者空腹静脉血中细胞，PBS 缓冲液洗涤 3 min，加入 1 mLPI 染液，一定要在避光的常温下放置 1 h 后，然后再用特异荧光标记，在鞘液包裹下流动中期间会发射出光子，按照流式细胞仪严格检测，在计数管内检测 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。1.2.3NK 细胞、Bright 亚群、Din 亚群数量使用流失细胞仪检测 NK 细胞、Bright 亚群、Din 亚群数量：使用流失细胞仪对 NK 细胞、Bright亚群、Din 亚群数量进行检测，检测时应严格按照仪器说明书进行，以免出现误差。1.2.4血清色氨酸、犬尿氨酸浓度检测使用高效液相色谱分析法检测血清色氨酸、犬尿氨酸浓度：使用全自动高效液相色谱分析仪对色氨酸、犬尿氨酸浓度进行检测，使用全自动高效液相色谱分析仪时应严格按照仪器说明书进行，避免出现误差。1.2.5治疗有效率比较按照显效、有效、无效的标准对临床疗效进行评价。显效：临床症状消失，血小板数量恢复正 1262分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7常；有效：临床症状明显减轻，血小板数量大于30109/L，未恢复至正常值；无效：临床症状未有效改善。总有效率=显效+有效7。1.3统计学处理使用 SPSS 21.0 软件处理。计数资料用 n（%）表示，组间对比行c2检验，计量资料用（xs）描述，两组间用 t 检验，以 P0.05）；治疗后两组患者 INF、CD8+水平下降、IL4、CD4+水平上升，且与抗体治疗组相比，联合治疗组患者 INF、CD8+水平较低，IL4、CD4+水平较高，差异均有统计学意义（P0.05）；治疗后两组患者 NK 细胞、Bright 亚群、Din 亚群数量有所上升，且与抗体治疗组相比，联合治疗组 NK 细胞、Bright 亚群、Din 亚群数量较多（P0.05）。见表 2。组别抗体治疗组联合治疗组t 值P 值INF治疗前653.08120.28651.10120.010.0940.925治疗后490.19108.56a391.7896.29a5.5920.001IL4治疗前52.0925.3852.1924.370.0230.981治疗后65.7826.39a79.8634.35a2.6800.008CD4+治疗前22.313.2522.363.210.0900.928治疗后26.384.02a35.895.09a12.0900.001CD8+治疗前29.634.3529.564.250.0940.924治疗后25.353.08a19.694.29a8.8380.001表 1两组患者治疗前后 INF、IL4、T 淋巴细胞亚群水平比较（xs）Table 1Comparison of INF，IL4 and T lymphocyte subsets before and after treatment between the two groups（xs）注：与治疗前相比较，aP0.05。组别抗体治疗组联合治疗组t 值P 值NK 细胞治疗前9.384.599.354.380.0360.971治疗后9.995.02a15.697.29a5.3100.001Bright 亚群治疗前0.410.210.430.250.5050.614治疗后0.480.33a0.650.52a2.2760.024Din 亚群治疗前8.095.718.105.590.0100.991治疗后10.185.04a16.547.15a5.9950.001表 2两组患者治疗前后 NK 细胞及其亚群数量对比（xs）Table 2Comparison of NK cells and their subsets before and after treatment between the two groups（xs）注：与治疗前相比较，aP0.05。注：与治疗前相比较，aP0.05）；治疗后两组患者色氨酸有所下降、犬尿氨酸上升，且与抗体治疗组相比，联合治疗组患者血色氨酸水平较低，犬尿氨酸水平较高（P0.05）。见表3。2.4两组患者治疗有效率比较与抗体治疗组相比，联合治疗组治疗总有效 率 上 升，差 异 有 统 计 学 意 义（P0.05）。见表 5。3讨论免疫性血小板减少症是血液科最常见的出血性疾病，临床以血小板减少，皮肤、粘膜出血为特 1263分子诊断与治疗杂志2023年7月第15卷第7期J Mol Diagn Ther,July 2023,Vol.15No.7征。该病的发病机制主要包括血小板破坏的增加和血小板生成的减少。rhIL11 为重组人白细胞介素11，常用于实体瘤、非髓系白血病化疗后血小板减少症的治疗8。利妥昔单抗是第一个被批准用于淋巴瘤治疗的单克隆抗体9。INF 为 干扰素，其是由有丝分裂原刺激 T淋巴细胞产生，其不仅是一种高效的抗病毒生物活性物质，还是一种具有广泛免疫调节的淋巴分子10。IL4 为白细胞介素4，是由多种细胞产生的并且能作用于多种细胞的一类细胞因子。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，在炎症反应中起到重要作用11。本文研究发现，免疫性血小板减少症患者 INF 水平异常上升、IL4水平异常下降，对其进行治疗后能够有效的调节INF、IL4 水平，通过对 INF、IL4 水平的调整来 达 到 对 免 疫 性 血 小 板 减 少 症 的 治 疗，效 果显著。CD4+细胞是人体免疫系统中的一种重要的免疫细胞。CD8+是 T 细胞表面所具有的一种糖蛋白，CD8+T 细胞通常在活化后分化为 CTL，能够特异性的杀伤靶细胞。郝彩霞等12在研究中指出，免疫性血小板减少病症患者体内 CD4+、CD8+细胞出现异常，对其进行有效的治疗，能够调节 T 淋巴细胞亚群的水平，说明 T 淋巴细胞亚群与免疫性血小板减少症有着密切的关联。本文研究中发现，使用 rhIL11 联合利妥昔单克隆抗体对免疫性血小板减少症患者进行治疗，患者体内 CD4+水平上升、CD8+水平下降，说明二者联合能够调节 T 淋巴细胞亚群来抑制疾病的在发生。NK细胞为自然杀伤细胞，是机体重要的免疫细胞，其能够在一定的情况下参与机体超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别疾病靶细胞、杀伤介质。Bright 亚群、Din 亚群数量是 NK 细胞的亚群，与 NK 细胞相辅相成，对治疗免疫性疾病有较好的疗效。陈珍等研究显示13，免疫性血小板减少症患者体内 NK 细胞数量减少、功能减低导致对自身反应性 B 细胞、杀伤 T 细胞的抑制及杀伤不足，导致了疾病的发生。本文研究中发现，使用rhIL11 联合利妥昔单克隆抗体对免疫性血小板减少症患者进行治疗，患者体内 NK 细胞、Bright 亚群、Din 亚群数量上升，说明二者联合能够通过增多及增强 NK 细胞及其亚群来对免疫性血小板减少症进行治疗，效果显著。大量临床研究表明，免疫性血小板减少症的病因为血小板被巨噬细胞系统严重破坏所导致，色氨酸则与机体的免疫系统紊乱有着密切的关联，所以色氨酸与免疫性血小板减少症有着密切的关联14。陈院朝等15在研究中指出，对免疫性血小板减少症患者进行检测发现，患者体内色氨酸浓度异常上升，对其进行有效的治疗，能够改善其浓度，对患者进行有效的治疗本文研究中发现，使用 rhIL11 联合利妥昔单克隆抗体对免疫性血小板减少症患者进行治疗，患者体内色氨酸和犬尿氨酸浓度有所下降，说明二者联合治疗能够引起患者机体内色氨酸的缺乏从而达到治疗的效果。综上所述，rhIL11 联合利妥昔单克隆抗体对免疫性血小板减少症患者进行治疗，能够改善患者体内 T 淋巴细胞亚群，提升 NK 细胞数量，色氨酸或许参与了免疫性血小板减少症的发生、发展。参考文献1Neunert CE，Cooper N.Evidencebased management of immune thrombocytopenia：ASH guideline update J.Hematology Am Soc Hematol Educ Program，2018，18（1）：568575.2Cooper N，Ghanima W.Immune 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