检测中心培训—硝基呋喃类药物的残留检测.ppt

检测中心培训（二）080115硝基呋喃类药物代谢物的残留检测LC/MS/MS一 背景简介n硝基呋喃类药物对大肠杆菌、沙门氏菌引起的消化道感染效果很好n硝基呋喃类药物价格低廉一 背景简介n硝基呋喃类药物有致畸、致癌等副作用n1997年欧盟禁用2002年美国、中国禁用2006年肯定列表把它列为禁用药二 硝基呋喃类药物的性质n硝基呋喃类药物在体内代谢很快，原形药物是无法检测的n代谢产物可稳定存在数月，所以残留检测以代谢物作为指示该类药物残留的标识物二 硝基呋喃类药物的性质n呋喃唑酮n分子量225.2n其代谢产物是AOZ,分子量102.1n其代谢产物的衍生物是2-NP-AOZ,分子量236二 硝基呋喃类药物的性质n呋喃它酮n分子量342.3n其代谢产物是AMOZ,分子量201.2n其代谢产物的衍生物是2-NP-AOZ,分子量335.2二 硝基呋喃类药物的性质n呋喃妥因n分子量238.2n其代谢产物是AHD,分子量115.1n其代谢产物的衍生物是2-NP-AHD,分子量249二 硝基呋喃类药物的性质n呋喃西林n分子量198.1n其代谢产物是SEM,分子量75.1n其代谢产物的衍生物是2-NP-SEM,分子量209三 残留检测的前处理n洗涤n水解、衍生化和提取n净化三 残留检测的前处理n洗涤n方案一：2g均质好的样品，15ml的甲醇-水（2+1），混匀1min，4000rmp离心，弃掉上清液。（GB/T20752-2006)n方案二：5g均质好的样品，10ml的甲醇-水（8+2），混匀0.5min，振荡5min，3800rmp离心5min，弃掉上清液，同样再依次用10ml甲醇，10ml乙醇，10ml乙醚洗涤（农大）n方案三：1g组织，不用洗涤（SN/T 1627-2005)三 残留检测的前处理n水解和衍生化试剂n方案一：加入20ml 0.2M盐酸，加入0.3ml的衍生化试剂（75mg 2-硝基苯甲醛溶于10ml二甲基亚砜，0.05M）（GB/T20752-2006)n方案二：加入20ml 0.1M盐酸，加入0.2ml的衍生化试剂（0.1M）（农大）n方案三：加入30ml 0.125M盐酸，加入1ml的衍生化试剂（100mg 2-硝基苯甲醛溶于12.5ml二甲基亚砜）（SN/T 1627-2005)三 残留检测的前处理n水解和衍生化的时间n方案一：37避光振荡16h（GB/T20752-2006)n方案二：37避光振荡过夜（农大）n方案三：37避光振荡16h（SN/T 1627-2005)三 残留检测的前处理n水解和衍生化的时间n方案一：37避光振荡16h（GB/T20752-2006)n方案二：37避光振荡过夜（农大）n方案三：37避光振荡16h（SN/T 1627-2005)三 残留检测的前处理n净化n方案一：加入5ml 0.1M的磷酸氢二钾，并用1M氢氧化钠调pH到7.4，离心上清液过HLB柱，5ml乙酸乙酯洗脱，40 吹干，定容到1ml（10ml乙腈+0.3ml，用水定容到100ml）（GB/T20752-2006)三 残留检测的前处理n净化n方案二：加入4ml 0.1M的磷酸氢二钾，并用2.5M氢氧化钠调pH到7，加入10ml乙酸乙酯，混匀1min，3800rmp离心5min，吸取上清液，乙酸乙酯10ml重复提取1次，合并乙酸乙酯，45 吹干，定容到0.5ml（含10%乙腈的0.02%乙酸溶液），再加入5ml正己烷，振荡20次，3800离心3min，下层进样。（农大）三 残留检测的前处理n净化n方案三：加入4ml 1M的氢氧化钠，并用1M盐酸和0.1M氢氧化钠调pH到7-7.5，3000rmp离心10min，上清液倒入250ml的分液漏斗中，残渣用5ml水洗，3000rmp离心10min，上清液也倒入250ml的分液漏斗中，加乙酸乙酯40ml，振摇1ml，静置3min，重复提取1次，合并乙酸乙酯，通过装无水硫酸钠的漏斗过滤至鸡心瓶中，50 旋蒸至3-5ml，再转移到试管中，50 吹干，定容至1ml（0.1%乙酸：乙腈：甲醇 3：3：2）（SN/T 1627-2005)四 色谱条件n方案一：（GB/T20752-2006)n色谱柱：Atlantis-C18，3.5um，1502.1ml或相当者n柱温：35 n进样量：40uln流动相：A:水（含0.3%乙酸）；B:乙腈（含0.3%乙酸）n梯度洗脱方式四 色谱条件n方案二：（农大)n色谱柱：Symmetry-C18，5um，1502.1ml或相当者n柱温：n进样量：10uln流动相：A:水（含0.02%乙酸）；B:乙腈（含0.02%乙酸）n梯度洗脱方式四 色谱条件n方案三：（SN/T 1627-2005)n色谱柱：C18，5um，1502.1ml或相当者n柱温：25 n进样量：15uln流动相：A:水（含0.1%乙酸）；B:乙腈n梯度洗脱方式五 质谱条件n方案一：（GB/T20752-2006)n离子源：ESI+n电喷雾的电压：5Vn辅助气：7L/min，480 n聚焦电压：150Vn碰撞室出口电压：11Vn去簇电压：45V五 质谱条件n方案二：（农大)n离子源参数n离子源：ESI+n毛细管电压：2.8KVn萃取电压：3VnRF透镜电压：0.6Vn离子源温度：80 n锥孔气流：30L/小时n雾化器流速：440L/小时五 质谱条件n方案二：（农大)n质量分离器参数n低质量数分辨率LM1：13.0n高质量数分辨率LM1：13.0n离子能量1：1.0n入口电压：1Vn出口电压：2Vn低质量数分辨率LM2：13.0n高质量数分辨率LM2：13.0n离子能量2：1.0Vn氩气示数：2.5e-3mbar五 质谱条件n方案三：（SN/T 1627-2005)n离子源：ESI+n雾化喷嘴压力：35psin干燥器流量：9L/小时，温度350 n毛细管电压：AMOZ,SEM,AHD,AOZ分别为3861V，3713V,4500V,3516Vn撇去器电压：AMOZ,SEM,AHD,AOZ分别为15V，15V,15V,19.2Vn碰撞电压：1.0V六 MRM所选择的离子NPAMOZ NPSEMNPAHDNPAOZGB/T207522006335/291335/128209/192209/166249/134249/178236/134236/192农大335/291335/262209/192209/166249/134249/104236/134236/104SN/T1627-2005335/291335/262209/192209/166249/134249/178236/134236/104