超高效液相色谱-串联质谱法检测猪血浆中的12种利尿剂.pdf

收稿日期:2 0 2 2-0 6-0 8 修回日期:2 0 2 2-0 9-0 2基金项目:四川省财政自主创新专项项目(2 0 2 2 Z Z C X 0 4 1)*通讯作者:郑幸果,女,硕士,助理研究员,主要研究方向:营养与食品安全.E-m a i l:5 2 5 7 7 6 5 1 7q q.c o m靳可婷,女,硕士,助理研究员,主要研究方向:营养与食品安全.E-m a i l:9 6 9 0 6 8 0 0 9q q.c o m第3 9卷第3期V o l.3 9 N o.3分 析 科 学 学 报J OUR NA LO FANA L Y T I C A LS C I E N C E2 0 2 3年6月J u n e 2 0 2 3D O I:1 0.1 3 5 2 6/j.i s s n.1 0 0 6-6 1 4 4.2 0 2 3.0 3.0 0 2超高效液相色谱-串联质谱法检测猪血浆中的1 2种利尿剂郑幸果*,仲伶俐,李 曦,雷欣宇,赵 珊,秦 琳,黄世群,靳可婷*(四川省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,四川成都6 1 0 0 6 6)摘 要:建立了在猪血浆中同时检测乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米等1 2种利尿剂的超高效液相色谱-串联质谱法。样品经乙腈提取,提取液通过固相萃取柱净化,净化后的样品溶液氮吹浓缩复溶后上机测定。采用C 1 8色谱柱(1 0 0mm2.0mm,3m),以0.5mm o l/L甲酸铵溶液-甲醇为流动相进行梯度洗脱。通过多反应检测(MRM),在正负离子模式下进行分析,基质匹配外标法定量。结果表明,1 2种利尿剂药物在2 1 0 0g/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9 9 9。方法检出限为0.6 1.2g/L,定量限为2.0 4.0g/L。在2、1 0、1 0 0g/L(4-氨基-6-氯-1,3苯二磺酰胺为4、2 0、2 0 0g/L)3个添加水平下的平均回收率为7 2.1%9 5.2%,相对标准偏差(R S D,n=6)为2.0%8.4%。该方法具有操作简单、灵敏度高、重现性好等优点,可用于同时检测猪血浆中的1 2种利尿剂。关键词:超高效液相色谱-串联质谱;猪血浆;利尿剂中图分类号:O 6 5 7.6 3 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 6-6 1 4 4(2 0 2 3)0 3-2 6 0-0 7利尿剂属于兴奋剂的一种,是世界反兴奋剂机构公布的禁用药物之一1,临床上常被用于治疗水肿、高血压和心力衰竭,其主要作用于肾脏,通过促进体内电解质和水分排出达到增加尿量的目的。由于此类药物能将积聚在皮下和腹腔中多余的水分快速排出,减轻体重,涉及重量级别项目的运动员可以利用该特性,参加更轻一级别的比赛,破坏公平竞争原则,并且尿的排泄量增加可减少体液和排泄物中其他禁用药物残留,从而躲开药检、缓解副作用。因此,利尿剂无论是比赛还是赛外都属于禁用药物1。在畜禽养殖过程中利尿剂可作为兽药,治疗因各种原因引起的水肿、急性肾功能衰竭以及肉鸡的腹水综合征2,3,这些情况可能造成动物中利尿剂残留,不仅危害食用者的身体健康还可能导致运动员兴奋剂检测阳性。因此,为保障供赛食品的质量安全,有必要在畜禽养殖过程中对利尿剂的使用情况进行严格监测。目前,利尿剂的检测方法主要有高效液相色谱法4、气相色谱-串联质谱法5和液相色谱-串联质谱法6-9。液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、特异性强等优点,已成为测定生物、食品和环境样品中利尿剂残留的重要方法。利尿剂检测研究的基质范围主要集中在人体血浆6,7、尿液8、饲料9、功能食品1 0或禽蛋1 1,1 2、鸡肉1 1,1 2、猪肉1 3等动物源性产品,针对动物血浆中利尿剂残留分析的研究相对较少,并且化合物种类有限,无法达到 大型赛事食源性兴奋剂防控工作指南(下文简称 指南)的检测要求。因此,亟需建立动物血浆中1 2种利尿剂的分析方法,为农业执法和运动会食品安全风险评估提供技术支持。本研究选用O a s i sP R i MEHL B固相萃取柱,因其属于通过式固相萃取技术,无需活化、淋洗和洗脱,又能有效吸附血浆基质中的蛋白质和磷脂类物质,使前处理高效、环保,结合超高效液相色谱-串联质谱法,建立了在猪血浆中同时测定乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米、螺内酯、卞氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氨苯喋啶、4-氨基-6-氯-1,3苯二磺酰胺、布美他尼和托拉塞米1 2种利尿剂的新方法,该方法操作简单,灵敏度高,适用于大批量的猪血浆中利尿剂药物的测定。062第3期分 析 科 学 学 报第3 9卷1 实验部分1.1 仪器及试剂X e v oT Q-X S超高效液相色谱-串联质谱仪(美国W a t e r s公司);N e o f u g e1 8 R高速冷冻离心机(香港力康生物医疗科技控股集团);HD-2 5 0 0多管涡旋混合仪(上海朗赋生物科技有限公司);A u t o E VA-2 0 p l u s全自动平行浓缩仪(睿科集团(厦门)股份有限公司);U P H-I-1 0 0 L超纯水机(四川优普超纯科技有限公司);A E 2 4 0十万分之一电子天平(上海梅特勒-托利多国际贸易有限公司)。乙酰唑胺(A c e t a z o l a m i d e,A C E)、坎利酮(C a n r e n o n e,C AN)、螺内酯(S p i r o n o l a c t o n e,S P I)、氯噻嗪(C h l o r o t h i a z i d e,C T)、氢氯噻嗪(H y d r o c h l o r o t h i a z i d e,HY D)和4-氨基-6-氯-1,3苯二磺酰胺(4-Am i n o-6-c h l o r o b e n z e n e-1,3-d i s u l f o n a m i d e,D I S)购于中国C AT O公司,氯噻酮(C h l o r t h a l i d o n e,CHL)、氨苯喋啶(T r i a m t e r e n u m,T R I)、布美他尼(B u m e t a n i d e,B UM)和托拉塞米(T o r a s e m i d e,T O R)购于中国B e P u r e公司,纯度均大于9 9%;呋塞米(F u r o s e m i d e,F UR)购于德国D r.E h r e n s t o r f e r公司,纯度9 8.7 9%;卞氟噻嗪(B e n d r o f l u m e t h i a z i d e,B E N)购于中国TM s t a n d a r d公司,纯度9 9.9%。O a s i sP R i MEHL B固相萃取柱(6 0m g/3 m L,美国W a t e r s公司),乙腈、甲醇、甲酸(质谱纯,美国F i s h e r公司),甲酸铵(质谱纯,上海安谱实验科技股份有限公司),0.2 2m聚四氟乙烯滤膜(上海安谱实验科技股份有限公司),实验室用水为超纯水。1.2 标准溶液配制准确称取1 2种利尿剂标准品1 0.0 0m g(折合纯度),分别置于5 0m L容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,配制成浓度为2 0 0m g/L的单标储备液,转移至棕色玻璃瓶中,于-2 0避光保存;准确吸取各单标储备液0.1 2 5m L,分别置于5 0m L容量瓶中,用甲醇定容,配制成浓度为5 0 0n g/m L的单标工作液,于4避光保存;分别准确吸取各单标储备液0.2 5m L,依次置于5 0m L容量瓶中,用甲醇定容,配制成浓度为1m g/L的混标储备液,于4避光保存。1.3 样品前处理准确移取待测血浆2.0 0m L于3 0m L离心管中,加入4m L乙腈溶液,20 0 0r/m i n涡旋提取5m i n,于4下80 0 0r/m i n离心5m i n。取上清液全部通过O a s i sP R i MEHL B固相萃取柱,用1 5m L玻璃试管收集流出液,将流出液于4 0下氮吹至近干,准确加入1.0m L3 0%甲醇水溶液溶解残渣,过0.2 2m聚四氟乙烯滤膜,供超高效液相色谱-串联质谱仪测定。1.4 液相色谱-串联质谱条件色谱条件:S H I S E I D O MG-HC 1 8色谱柱(2.0mm1 0 0mm,3m);流动相:A为0.5mm o l/L甲酸铵溶液,B为甲醇;流速:0.3m L/m i n;进样体积:2L;柱温:4 0。梯度洗脱程序:01.0m i n,1 0%B;1.03.0m i n,1 0%5 5%B;3.06.0m i n,5 5%8 0%B;6.07.0m i n,8 0%9 0%B;7.07.1m i n,9 0%1 0%B;7.18.5m i n,1 0%B。质谱条件:电喷雾离子源(E S I+/E S I-),多反应监测(MRM)模式,锥孔气流速:1 5 0L/h,脱溶剂气流速:8 0 0L/h,离子源温度:1 5 0,脱溶剂温度:3 0 0,毛细管电压:3.0k V。其余质谱参数见表1。表1 1 2种利尿剂的质谱参数T a b l e1 M Sp a r a m e t e r so f1 2d i u r e t i c sC o m p o u n dS c a nm o d eR e t e n t i o nt i m e(m i n)P r e c u r s o r i o n(m/z)P r o d u c t i o n(m/z)C o n e(V)C o l l i s i o ne n e r g y(e V)A c e t a z o l a m i d e(A C E)E S I-2.8 92 2 18 3*,5 83 41 6,1 6C a n r e n o n e(C AN)E S I+6.2 23 4 11 0 7*,1 8 75 23 2,2 2C h l o r t h a l i d o n e(CHL)E S I-3.9 03 3 71 9 0*,1 4 64 81 6,2 4F u r o s e m i d e(F UR)E S I-4.4 53 2 92 8 5*,2 0 52 81 4,2 2S p i r o n o l a c t o n e(S P I)E S I+5.9 33 4 11 0 7*,1 8 76 83 0,2 2B e n d r o f l u m e t h i a z i d e(B E N)E S I-4.5 84 2 02 8 9*,3 2 85 82 2,2 6C h l o r o t h i a z i d e(C T)E S I-2.8 12 9 42 1 4*,1 7 96 63 0,4 2H y d r o c h l o r o t h i a z i d e(HY D)E S I-2.8 52 9 62 6 9*,2 0 54 21 8,2 4T r i a m t e r e n u m(T R I)E S I+3.9 42 5 42 3 7*,1 0 45 62 4,3 6162第3期郑幸果等:超高效液相色谱-串联质谱法检测猪血浆中的1 2种利尿剂第3 9卷(续表1)C o m p o u n dS c a nm o d eR e t e n t i o nt i m e(m i n)P r e c u r s o r i o n(m/z)P r o d u c t i o n(m/z)C o n e(V)C o l l i s i o ne n e r g y(e V)4-Am i n o-6-c h l o r o b e n z e n e-1,3-d i s u l f o n a m i d e(D I S)E S I-2.4 22 8 47 8*,2 0 55 22 4,2 0B u m e t a n i d e(B UM)E S I-5.3 53 6 38 0*,2 0 74 62 4,1 6T o r a s e m i d e(T O R)E S I-5.2 53 4 72 6 2*,1 8 12 81 6,4 4 *:Q u a t i t a t i v e i o n.2 结果与讨论2.1 质谱条件优化将浓度为5 0 0n g/m L的单标溶液,分别在E S I正负离子模式下进行全扫描。发现C AN、S P I和T R I在正离子模式下生成的M+H+离子峰信号更强,而其他化合物均在负离子模式下,生成了特异性较强的M-H-离子。确定各个化合物的母离子后,分别进行子离子扫描和质谱参数优化,选择2个响应高、稳定性强且干扰较小的子离子为检测离子,其中强度高的子离子作为定量离子。2.2 色谱条件优化1 2种利尿剂在C 1 8色谱柱上保留性较好,但C AN和S P I的结构相似,为减少仪器的分析时长,本方法选择分离度高且耐压性强的S H I S E I D O MG-HC 1 8(1 0 0mm2.0mm,3m)色谱柱。由于乙腈的洗脱能力较强,不利于C AN和S P I的分离,加上大部分化合物为负离子模式,首先考察水-甲醇为流动相对目标物的影响,此时除B UM以外其他化合物的峰形和灵敏度较好,但B UM的响应较差且保留不稳定;在水相中加入0.5mm o l/L甲酸铵后,B UM的响应明显增强、保留稳定,其他化合物影响较小;继续在水相中加入0.0 1%的甲酸,负离子模式化合物尤其是D I S的响应值明显变低。为了兼顾1 2种化合物均有良好的峰形、响应值和稳定性,最终选择0.5mm o l/L甲酸铵溶液-甲醇为流动相进行液相色谱分析。在优化好的质谱、色谱条件下,1 2种化合物在空白样品中的定量离子色谱图见图1。图1 空白基质加标样品的定量离子色谱图(2.0 g/L)F i g.1 Q u a n t i t a t i v e i o nc h r o m a t o g r a m so fb l a n ks a m p l e s p i k e dw i t hs t a n d a r d(2.0 g/L)262第3期分 析 科 学 学 报第3 9卷2.3 提取试剂选择在药物多残留分析过程中,提取试剂至关重要,必须同时提取基质中所有具有不同性质的分析物,其提取效率直接影响样品前处理的试验效果。根据已报道的文献,提取利尿剂的常用试剂有乙腈1 3-1 5,0.1%甲酸乙腈1 1和乙酸乙酯1 2。在空白样品中加入1 0g/L的利尿剂,将以上3种试剂进行提取效果对比。1 2种化合物的回收率见图2,乙腈作为提取剂时平均回收率为8 0.2%9 7.8%;0.1%甲酸乙腈虽然能提高C AN和S P I的提取率,但B UM的回收率不到6 0%;乙酸乙酯对于大部分化合物的提取效果较好,但B UM的回收仍然仅7 0%左右。因此本研究选用乙腈为前处理提取试剂。2.4 净化方式选择血浆中药物分析检测的净化方法大多采用固相萃取法1 6,1 7和Q u E C h E R S法6,1 8。固相萃取法净化效果较好,但操作繁琐且因其具有高选择性,难以兼顾所有目标物的回收率;Q u E C h E R S法操作简单快速,在药物检测试验中被广泛应用,但对于样品中蛋白和磷脂等杂质的净化效果较差。O a s i sP R i MEHL B通过式固相萃取小柱无需活化、淋洗和洗脱,操作简便,能够有效去除血浆中的蛋白质、盐和磷脂类干扰物。本研究在空白样品中加入1 0g/L的利尿剂,将乙腈作为提取试剂,通过加标回收试验对比O a s i sP R i MEHL B6 0m g/3 m L和2 0 0m g/6 m L两种型号的回收率。结果见图3,2 0 0m g/6 m L的小柱对1 2种化合物都有不同程度的吸附,T R I尤为严重,回收率不足1 0%;而使用6 0m g/3 m L的小柱净化时,1 2种目标物的回收率达到7 5%以上。此外,试验发现0.2 2m的有机系尼龙膜对B E N吸附较强,应选择0.2 2m的聚四氟乙烯膜过滤样品。图2 1 2种化合物在不同提取试剂下的回收率F i g.2 R e c o v e r i e so f t h e1 2c o m p o u n d s i nd i f f e r e n te x t r a c t i o nr e a g e n t图3 两种型号的O a s i sP R i MEH L B小柱对1 2种化合物回收率的影响F i g.3 E f f e c t so ft w ot y p e so fO a s i sP R i ME H L Bo nr e c o v e r i e so f1 2c o m p o u n d s2.5 基质效应采用液相色谱-串联质谱法检测化合物时,样品中的复杂基质可能会使数据结果发生偏离,为提高试验准确性,必须考虑基质效应(ME)的影响。本研究采用文献方法1 9,以公式:ME=(基质标准曲线斜率/溶剂标准曲线斜率-1)1 0 0%进行基质效应分析。结果显示1 2种目标物的ME值为-4 8.6%5 5.7%,C T和T R I在猪血浆中表现为基质增强效应(ME0),其他化合物为基质减弱效应(ME2 0%)。因此,实际样品检测时有必要采取基质匹配标准溶液进行定量分析。1 2种目标物在猪血浆中的ME值见表2。2.6 方法学验证2.6.1 线性范围、检测限和定量限 用空白基质配制浓度为21 0 0g/L的标准工作溶液,按照本研究建立的仪器方法进行测定,分别以各化合物的浓度和定量离子峰面积为横、纵坐标进行线性回归。结果见表2,1 2组标准曲线线性关系良好,相关系数(r2)为0.9 9 9 00.9 9 9 9。基质匹配标准溶液经上机测定后,分别以信噪比(S/N)为3和1 0的浓度作为化合物的检出限(L O D)和定量限(L O Q)。A C E、C AN、C HL、F UR、S P I、B E N、C T、HY D、T R I、B UM和T O R的L O D为0.6g/L,L O Q为2.0g/L;D I S的L O D为1.2g/L,L O Q为4.0g/L。方法L O D和L O Q均满足 指南 对利尿剂类药物残留检测的灵敏度要求。362第3期郑幸果等:超高效液相色谱-串联质谱法检测猪血浆中的1 2种利尿剂第3 9卷表2 1 2种化合物的回归方程、相关系数及基质效应T a b l e2 R e g r e s s i o ne q u a t i o n s,r2a n dm a t r i xe f f e c t(ME)o f t h e1 2c o m p o u n d sC o m p o u n dL i n e a re q u a t i o nr2ME(%)C o m p o u n dL i n e a re q u a t i o nr2ME(%)A C Ey=2 3 4.2 6 3x-6 4 8.5 9 30.9 9 9 0-3 0.6C Ty=1 2 0 5.5 4x+2 5 6.0 1 20.9 9 9 61 8.8C ANy=1 0 9 7 1 7x-7 3 1 6 6.60.9 9 9 1-9.0HY Dy=3 7 5.7 5 2x-6 3 5.0 20.9 9 9 9-1 0.2CHLy=9 3 0.5 3 7x-2 5 1 4.4 30.9 9 9 7-9.1T R Iy=1 7 6 6 3 4x-3 3 7 7 2 60.9 9 9 65 5.7F URy=4 5 3 7.9 7x-1 0 4 0 5.40.9 9 9 5-2.3D I Sy=3 4.5 4 3 9x-6 9.8 0 2 80.9 9 9 8-4 8.6S P Iy=6 1 1 7 8.5x-5 4 5 8 8.10.9 9 9 5-1 4.5B UMy=1 6 7 9.8 7x-1 5 7 1.1 30.9 9 9 9-1.5B E Ny=2 9 4 4.5 5x+1 1 0 6.0 60.9 9 9 3-6.3T O Ry=7 6 8 6.9 2x+2 5 6 7.6 50.9 9 9 9-1 1.72.6.2 回收率及精密度 在经检测不含目标物的阴性猪血浆样品中,分别添加1倍、5倍和5 0倍L OQ3个浓度的目标化合物,按照“1.3”前处理方法和“1.4”仪器条件进行加标回收试验。结果见表3,1 2种化合物的添加回收率为7 2.1%9 5.2%,相对标准偏差(R S D)为2.0%8.4%,方法准确度和精密度良好,适用于猪血浆中1 2种利尿剂的检测分析。表3 1 2种化合物的添加回收率及相对标准偏差(n=6)T a b l e3 R e c o v e r i e sa n dr e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n so f t h e1 2c o m p o u n d s(n=6)C o m p o u n dS p i k e d(g/L)R e c o v e r y(%)R S D(%)C o m p o u n dS p i k e d(g/L)R e c o v e r y(%)R S D(%)A C E2,1 0,1 0 07 9.4,8 1.1,8 2.74.1,2.7,4.5C T2,1 0,1 0 08 1.3,7 9.9,8 2.24.8,2.3,4.4C A N2,1 0,1 0 08 2.6,7 9.6,8 1.88.4,6.1,4.3HY D2,1 0,1 0 09 4.2,9 3.6,9 2.44.9,3.6,4.2C H L2,1 0,1 0 07 5.4,7 2.1,7 6.05.3,3.8,2.2T R I2,1 0,1 0 07 9.8,7 8.1,8 0.94.5,2.8,5.6F U R2,1 0,1 0 09 0.8,8 9.9,8 7.2 3.3,2.2,3.0D I S4,2 0,2 0 08 0.8,7 8.9,8 1.46.6,7.1,7.8S P I2,1 0,1 0 08 1.2,8 0.7,8 1.63.9,5.6,4.1B UM2,1 0,1 0 09 2.8,9 3.8,9 0.24.3,3.8,3.6B E N2,1 0,1 0 08 6.2,8 7.2,8 4.05.9,3.8,3.2T O R2,1 0,1 0 09 2.1,9 4.2,9 5.23.2,3.8,2.02.7 实际样品分析在四川各大生猪养殖场采集猪血浆样品,共计2 0份。利用本方法进行1 2种利尿剂的分析检测,实验结果均未检出。2.8 方法比较由表4可以看出,利尿剂类药物的检测分析方法众多,但将猪血浆作为基质,同时满足 指南 检测要求的研究鲜有报道。此外,与液液萃取法和Q u E C h E R S法相比,传统的固相萃取法净化效果虽然好,但操作繁琐效率低。YAN等1 1利用新型通过式的O a s i sP R i ME HL B小柱、UH P L C-M S/M S法同时测定猪肉、牛肉、羊肉、牛奶和鸡蛋中的1 4种利尿剂类药物残留,相较其他动物源性食品的分析方法,该方法涵盖药物种类更多且简单、灵敏。鉴于竞技体育中反兴奋剂的需要,针对人类尿液的检测方法也较为成熟,马艳华等8通过动态多反应检测模式(d MRM),同时检测人尿中的3 5种利尿剂,解决了传统L C-M S/M S(L C-c MRM)技术同时检测多个组分时灵敏度较低的问题。利尿剂在动物源性食品和人类血液及尿液中的检测技术相对完善,将功能食品、保健食品、茶饮料、饲料和动物尿液等作为样品的研究也有报道,而与目前的文献相比,本研究高效、灵敏,填补了目前动物血浆中利尿剂检测方法的技术空白。表4 利尿剂类药物检测方法比较T a b l e4 C o m p a r i s o nw i t ho t h e rd e t e c t i o nm e t h o d so fd i u r e t i c sS a m p l eC o m p o u n dP u r i f i c a t i o nm e t h o dL O DL O QA n a l y t i c a lm e t h o dW e i g h t c o n t r o l f o o d s 4D i u r e t i c sO a s i sM C X5.2-8.2g/k g-H P L C4D i e t a r ys u p p l e m e n t2 0D i u r e t i c sL i q u i d-l i q u i de x t r a c t i o n0.6-1.5g/L,3-7 0g/k g2-4g/L,1 0-2 0 0g/k gL C-M S/M S2 0T e ad r i n k s6D i u r e t i c sF l o r i s i l S P Ec o l u m n3.0-2 4.0g/L,1.5-1 2.0g/L1 0.0-8 0.0g/L,5.0-4 0.0g/LG C-M S(S I M),G C-M S/M S5A n i m a l f e e d8D i u r e t i c sO a s i sH L B0.1-0.5g/k g0.3-1.5g/k gH P L C-M S/M S9A n i m a l u r i n e8D i u r e t i c sC l e a n e r tP A X1 0g/L2 0g/LH P L C-M S/M S2 1H u m a np l a s m a6D i u r e t i c sQ u E C h E R S0.3-0.5g/L1.0-2.0g/LH P L C-M S/M S6462第3期分 析 科 学 学 报第3 9卷(续表4)S a m p l eC o m p o u n dP u r i f i c a t i o nm e t h o dL O DL O QA n a l y t i c a lm e t h o dH u m a np l a s m a1D i u r e t i cS e q u e n t i a l l i q u i d-l i q u i de x t r a c t i o n-2.0g/LL C-M S/M S7H u m a nu r i n e3 5D i u r e t i c sP r e c i p i t a t i o no fp r o t e i n sw i t h5%P b A c2a q u e o u s s o l u t i o n0.0 5-2 0g/L-L C-M S/M S(L C-d MRM)8P o r k,b e e f,l a m b,m i l ka n de g g s1 4D i u r e t i c sO a s i sP R i M EH L B0.1 6-0.7 3g/k g 0.5 3-2.4 3g/k g UH P L C-M S/M S1 1C h i c k e na n ds w i n e3D i u r e t i c sC 1 8p o w d e r0.5g/k g1.0g/k gU P L C-M S/M S1 2P o r k,b e e f,m u t t o n,m i l ka n de g g s1 0D i u r e t i c sD i s p e r s i v e s o l i dp h a s e e x t r a c t i o n2.0-5.0g/k g5.0-1 0.0g/k gL C-M S/M S1 4E g g s,c h i c k e n,p o r ka n db e e f1 0D i u r e t i c sC a p t i v aEMR-l i p i dc o l u m n0.5-1.0g/k g1.5-2.0g/k gU P L C-M S/M S1 5P o r k,b e e f,l a m b,r a b b i tm u s c l e,m i l ka n de g g s7D i u r e t i c sQ u E C h E R S-0.5-2g/k gH P L C-M S/M S2 2S w i n ep l a s m a1 2D i u r e t i c sO a s i sP R i M EH L B0.6-1.2g/L2.0-4.0g/LU P L C-M S/M ST h i sw o r k3 结论国内外对于动物血浆中利尿剂的分析研究较少,并且我国暂无相关检测标准。本研究建立了通过超高效液相色谱-串联质谱同时测定猪血浆中乙酰唑胺、坎利酮、氯噻酮、呋塞米、螺内酯、卞氟噻嗪、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氨苯喋啶、4-氨基-6-氯-1,3苯二磺酰胺、布美他尼和托拉塞米1 2种利尿剂的分析方法。选用O a s i sP R i MEHL B小柱净化,提高分析效率的同时更加绿色环保。经方法学验证,本方法灵敏、准确,适用于检测大批量猪血浆中的利尿剂类药物。参考文献:1 2 0 2 2L i s to fP r o h i b i t e dS u b s t a n c e sa n dM e t h o d sE B/O L.h t t p s:/ww w.w a d a-a m a.o r g/.2 YUZG.M a n u a l o fR a t i o n a lA p p l i c a t i o na n dC o m b i n a t i o no fV e t e r i n a r yD r u g s.B e i j i n g:C h e m i c a l I n d u s t r yP r e s s(余祖功.兽药合理应用与联用手册.北京:化学工业出版社),2 0 1 4:2 6 7.3 L IYP,Z HANGXS,WAN GL,e t a l.T i a n j i nA g r i c u l t u r a l S c i e n c e s(李玉鹏,张效生,王丽等.天津农业科学),2 0 2 1,2 7(7):3 3.4 WANGY,Z HANGW T,L I ST,e t a l.J o u r n a l o f S i c h u a nU n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e s)(王媛,张文韬,李斯特等.四川大学学报(医学版),2 0 1 0,4 1(5):8 7 3.5 Z HA O H X,GUOZF,WAN GLP,e ta l.P h y s i c a lT e s t i n ga n dC h e m i c a lA n a l y s i s(P a r tB:C h e m i c a lA n a l y s i s)(赵海香,郭振福,汪丽萍等.理化检验(化学分册),2 0 1 0,4 6(7):8 2 0.6 L I AN G Y,WANGXL,GUOLQ.C h i n e s eJ o u r n a lo fP h a r m a c e u t i c a lA n a l y s i s(梁杨,王小玲,郭礼强.药物分析杂志),2 0 1 9,3 9(9):1 5 9 0.7 E l k a d yEF,M a n d o u rAA,A l g e t h a m iFK,e t a l.M i c r o c h e m i c a l J o u r n a l,2 0 2 0,1 5 5:1 0 4 7 5 7.8 MAY H,YANK,D ONGY,e t a l.C h i n e s eJ o u r n a lo fS p o r t sM e d i c i n e(马艳华,闫宽,董颖等.中国运动医学杂志),2 0 1 6,3 5(5):4 6 1.9 YAN G W H.C e r e a l&F e e dI n d u s t r y(杨旺火.粮食与饲料工业),2 0 1 9,4:5 7.1 0J iHL,Y a n gYJ,M i nAY,e t a l.S c i e n c e&J u s t i c e,2 0 2 1,6 1:4 5 1.1 1Y a nY H,L i a nKQ,Z h a n gHC,e t a l.M i c r o c h e m i c a l J o u r n a l,2 0 2 2,1 7 4:1 0 6 9 4 8.1 2X U EY,HUAJ,GA OH,e t a l.S c i e n c e a n dT e c h n o l o g yo fF o o d I n d u s t r y(薛颖,花锦,高浩等.食品工业科技),2 0 2 1,4 2(3):2 3 0.1 3Z HA OXY,CHE NXY,WANG H,e ta l.J o u r n a lo fA n a l y t i c a lS c i e n c e(赵晓亚,陈新艳,王晗等.分析科学学报),2 0 2 1,3 7(5):6 4 3.1 4S N/T5 1 6 7-2 0 1 9.D e t e r m i n a t i o no fh y d r o c h l o r o t h i a z i d ea n do t h e r 1 0d i u r e t i c s r e s i d u e s i n f o o d so f a n i m a l o r i g i n f o r e x-p o r t-L i q u i dC h r o m a t o g r a p h yT a n d e m M a s sS p e c t r o m e t r y(出口动物源食品中氢氯噻嗪等1 0种利尿剂残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法).562第3期郑幸果等:超高效液相色谱-串联质谱法检测猪血浆中的1 2种利尿剂第3 9卷1 5L IW H,L I UJ,S UNZ W,e ta l.A n i m a lH u s b a n d r y&V e t e r i n a r yM e d i c i n e(李文辉,刘佳,孙志文等.畜牧与兽医),2 0 2 2,5 4(3):5 3.1 6S U NXC,L I NFF,W A N M M,e t a l.A c t aP h a r m a c e u t i c aS i n i c a(孙筱初,林菲菲,万咪咪等.药学学报),2 0 2 1,5 6(9):2 3 8 3.1 7GUOX,L ITD,T I ANDC,e t a l.C h i n e s e J o u r n a l o f I n d u s t r i a lH y g i e n e a n dO c c u p a t i o n a lD i s e a s e s(郭翔,李添娣,田东超等.中华劳动卫生职业病杂志),2 0 2 1,3 9(8):6 1 2.1 8M i n i s t r yo fA g r i c u l t u r ea n dR u r a lA f f a i r sN o.1 9 7B u l l e t i n-1 0-2 0 1 9.D e t e r m i n a t i o no f 1 6 0V e t e r i n a r yD r u g sa n dO t h e rC o m p o u n d s i nB l o o da n dU r i n eo fA n i m a l-L i q u i dC h r o m a t o g r a p h yT a n d e m M a s